原因不明的复发性流产患者子宫蜕膜组织V24NKT细胞表达研究
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・1335・现代实用医学2009年12月第21卷第12期原因不明的复发性流产患者子宫蜕膜组织V24NKT细胞表达研究卢文波，陈慧琴，陈安儿，毛华芬，郑乐朋，覃世榕【摘要】目的探讨V24NKT细胞在原因不明的复发性流产患者子宫蜕膜组织中的表达意义。方法采用流式细胞术检测30例正常妊娠自行要求终止妊娠孕妇和30例原因不明的复发性流产患者子宫蜕膜组织V24NKT细胞的表达，并进行分析比较。结果原因不明的复发性流产患者子宫蜕膜组织中V24NKT细胞比例明显高于正常妊娠者，差异有统计学意义（<0.01）。结论V24NKT细胞的高表达在原因不明的复发性流产中有着重要的意义，推测V24NKT细胞通过数量上的增加和分泌水平的变化调控妊娠的进程，而导致原因不明的复发性流产。【关键词】复发性流产；NKT细胞；流式细胞术【中图分类号】R714.21【文献标志码】A【文章编号】1671-0800(2009)12-1335-02
基金项目：宁波市卫生局资助项目，编号：2006044作者单位：宁波市妇女儿童医院，浙江宁波315012作者简介：卢文波（1969—），男，浙江省宁波市人，副主任技师。妊娠是极其复杂的生理过程，正常妊娠的维持有赖于母胎免疫耐受的形成，一旦母胎免疫耐受失衡，可能发生原因不明的复发性流产（unexplainedre-currentspontaneousabortion，URSA）。V24自然杀伤T（NaturalKillT，NKT）细胞在防止自身免疫性疾病的发生、诱导移植耐受和母胎耐受形成等方面发挥着重要的作用，但其在URSA中的免疫调节作用报道少见。我们采用流式细胞术来探讨V24NKT细胞的表达变化与URSA发生的关系。报告如下。1资料与方法1.1一般资料收集2007年6月至2009年6月来我院就诊的URSA患者30例（URSA组），年龄（26±3.3）岁，自然流产史≥2次，均排除染色体、解剖、内分泌、感染和自身免疫性疾病。本次妊娠B超证实胚胎停止发育。取同期来我院就诊的正常妊娠孕妇30例作为对照组，年龄（24.4±3.1）岁，为同期妊娠12周内人工流产的正常妇女，B超证实胚胎发育正常自行，均要求流产终止妊娠的健康妇女。1.2仪器与试剂IgG1-FITC、IgG2a-PE、TCRV24-FITC和CD56-PE单克隆抗体，FACScalibur型流式细胞仪，均为BectonDickinson产品。1.3蜕膜组织细胞的分离将人工流产术后收集的子宫蜕膜组织洗涤去除残余血液，剪碎、研磨成细胞悬液后过80目及300目网筛，1000r/min离心10min。细胞团重悬于D-Hanks液，洗涤2次后调节细胞浓度至107/mL。1.4细胞染色每份蜕膜组织细胞分别取50L到两支洁净的流式管中，一管为同型对照管，即加入10LIgG1-FITC和10LIgG2a-PE单克隆抗体；另一管为待测管，即加入10LTCRV24-FITC和10LCD56-PE单克隆抗体。室温避光孵育30min后用PBS缓冲液洗涤1次，然后将细胞重悬于500LPBS后立即上机检测。1.5FCM分析以同型对照管为对照，调节流式细胞仪电压，使得99％的细胞落在阴性区域，撤同型对照管上待测管，用CellQuest软件获取和分析，每104个细胞中TCRV24+和CD56+细胞的含量，即为子宫蜕膜组织中V24NKT细胞含量。1.6统计方法利用SPSS13.0软件，计量数据采用均数±标准差表示，采用检验。＜0.05为差异有统计学意义。2结果URSA组子宫蜕膜组织中V24NKT细胞含量为（1.56±0.17）％，高于正常妊娠组（0.97±0.08）％，两组比较差异有统计学意义（=17.2，<0.01）。3讨论NKT细胞作为新的免疫调节细胞，在抗肿瘤免疫，克服移植排斥，以及抑制自身免疫性疾病的发生中发挥着至关重要的作用。NKT细胞的功能异常与多种临床疾病的发生有关，如肿瘤的转移，自身免疫性疾病（糖尿病、系统性红斑狼疮、多发性硬化等）。调控NKT细胞的功能可达到对肿瘤以及多种人类疾病的治疗效果[1]。正常妊娠类似于同种异体移植，因而母胎界面的免疫耐受微环境对胚胎的成功着床和诱导胎儿在母体子宫内的存活与发育是至关重要的。在胚胎滋养叶细胞侵袭母体的过程中面临着来自子宫蜕膜层的各种免疫活性细胞，及其产生的细胞因子和化学因子等活性成分，它们在母胎界面共同构成了决定胎儿存活或被排斥的免疫微环境。研究证实，存在于黏膜和子宫内膜组织中的NKT细胞在妊娠早期蜕膜中含量较外周血异常增加，有利于妊娠的维系[2]。V24NKT细胞分泌高水平IFN-及IL-4，表达TNF-、穿孔素（Perforin）及FasL等细胞坏死因子[3]。在正常人早孕中成熟的NKT细胞（主要是IFN-生（下转第1337页）・1337・现代实用医学2009年12月第21卷第12期术。这些手术方法均需要开腹和切开子宫，因此患者住院时间长，术后恢复慢，而且须避孕2年后妊娠。分娩时必须剖宫产，以防子宫破裂，而且存在着术后子宫腔及盆腔的粘连，引起继发不孕。目前对纵隔子宫的治疗，已用宫腔镜取代了以往的开腹手术，使用剪刀、激光、电刀等器械，采用不同的手术方式进行子宫纵隔矫正术。宫腔镜电切术使用电切环或针状电极从纵隔下极左右对称切开至宫底部，仅需将纵隔切开，不必将宫腔内前后壁的残留纵隔组织完整切除，子宫纵隔肌纤维组织与子宫肌纤维组织相同，可以经过肌纤维组织的回缩，较好地恢复宫腔形态。宫腔镜剪开术以治疗不完全纵隔为主，要注意剪开组织层次，接近宫底时注意辨别纤维结缔组织和肌层，不能过深，否则易损伤肌层血管引起出血。本组采用宫腔镜电切术和剪开术方式手术，均一次成功，手术时间平均15min，出血量平均11mL，术后3d出院，术后回访检查也证实宫腔形态恢复良好。3.4术中监护复杂宫腔镜手术时，应行B超和/或腹腔镜监护，这样能大大提高宫腔镜手术的安全性及成功性。B超监护下的宫腔镜子宫纵隔切开术安全性高、无创伤、恢复快及费用低，并能精确地测量子宫纵隔的长度及厚度，控制切割深度，当切割端与宫底浆膜层之间距离为0.8～1cm时，可停止操作[6]。但超声也有一定局限性，不能看到整个子宫及盆腔情况。腹腔镜能准确地观察子宫外部形态，有助于进一步明确子宫畸形的诊断，并能了解子宫浆膜面和整个子宫及盆腔情况，发现盆腔病变能立即治疗，并防止子宫穿孔的发生。对于合并有盆腔病变者及合并有其他不孕因素者，选用B超联合腹腔镜监护更为合适。本组21例单纯行B超监护，5例合并不孕者，均采用腹腔镜监护下手术治疗，术中同时行盆腔粘连分离、双侧输卵管插管通液并纵隔切开术术后效果满意。3.5术后处理手术后放置金属节育环和使用雌激素治疗虽有争议，但本组资料均采用放置金属节育环3个周期，使用人工周期（雌孕激素）3个月。手术后回访患者内膜生长良好，宫腔行态正常，仅1例发现轻微粘连。参考文献：[1]曹泽毅.中华妇产科学[M].北京:人民卫生出版社，2004:1434-1664.[2]SanjaK，KurjakA，SkenderovicS，etal.Screerningforuterineabnormalitiesbythree-dimensionalultrasoundimprovesperinataloutcome[J].JPerinatMed，2002，30:7-17.[3]熊敏.宫腔镜手术在治疗子宫纵隔畸形的不孕不育患者中的价值[J].医学临床研究，2007，24(3):419.[4]JonesHWJ,JonesGE.Doubleuterusasanetiologicalfactorinrepeatedabortion:indicationsforsurgicalrepair[J].AmJObstetGynecol,1953,65:325-339.[5]TompkinsP.Commentsonthebicornuateuterusandtwinning[J].SurgClinNorthAm，1962，42:1049-1062.[6]刘能辉，张怡.宫腔镜电切术治疗子宫纵隔25例分析[J].中国内镜杂志，2004，11（6）：18.收稿日期：2009-03-12（责任编辑：钟美春）
成细胞）占绝对优势，而在URSA组中以不成熟NKT细胞（主要是IL-4生成细胞）占主导。有研究显示NKT细胞在正常妊娠妇女体内表达要高于未孕妇女而利于妊娠的维持[2]，而我们发现，URSA组的子宫蜕膜组织中V24NKT细胞的含量高于正常妊娠组，因此我们推测V24NKT细胞通过数量上的增加和分泌水平的变化调控妊娠的进程导致URSA，在妊娠的演进中NKT具有免疫调节的双向性，这也可参考Hammond等[4]的报道。综上，我们认为通过调节NKT细胞的克隆增殖及免疫耐受将可能为复发性自然流产的免疫防治提供了一条新的思路和方案。参考文献：[1]YangJie,FanHua-hua,NieXiao-xuan,etal.Apreliminarystudyontheimmunol-ogicalmechanismfortheanti-tumorac-tivityofhumanperipheralbloodV24NKTcells[J].Tumor,2007,27(2):83-87.[2]张俊峰,黄向华.树突状细胞在妊娠免疫耐受中的作用研究进展[J].中国实用药学,2008,3(8):100-103.[3]HuangYong,JiangEr-lie,ZhouZheng,etal.Modulationofcytokine-producingofV24naturalkillerTcells[J].JournalofClinicalHematology,2008,21(5):264-267.[4]HammondKJ,KronenbergM.NaturalkillerTcells:naturalorunnaturalregula-torsofautoimmunity[J].CurrentOpinionImmunology,2003,15（6）:683-689.收稿日期：2009-07-10（责任编辑：钟美春）[6]邓建珍，李铁军.艾森曼格综合征妊娠足月分娩一例分析[J].广西医学，1997，19（2）：319-320.[7]时春艳，杨慧霞.妊娠合并艾森曼格综合征的会诊与转诊[J].中国全科医学杂志，2004，7（14）：1064-1065.[8]蒋国庆，时春艳，杨慧霞，等.妊娠合并艾森曼格综合征的诊断与治疗[J].中华围产医学杂志，2004，7（2）：71-74.[9]周淑，周容.妊娠合并艾森曼格综合征1例[J].实用妇产科杂志，2007，23（7）：448-449.[10]WeissBM,ZempL,SeifertB,etal.Outcomeofpulmonaryvasculardiseaseinpregnancy:asystematicoverviewfrom1978through1996[J].JAmCollCardiol,1998,31(7):1650-1657.[11]YentisSM,SteerPJ,PlaatF.Eisenme-nger'ssyndromeinpregnancy:ma-ternalandfetalmortalityinthe1990s[J].BrJObstetGynaecol,1998,105(8):921-922.[12]GleicherN,MidwallJ,HochbergerD,etal.Eisenmenger'ssyndromeandpregn-ancy[J].ObstetGynecolSurv,1979,34(10):721-741.[13]AvilaWS,GrinbergM,SnitcowskyR,etal.Maternalandfetalout-comeinpreg-nantwomenwithEisenmenger'ssyn-drome[J].EurHeartJ,1995,16(4):460-464.收稿日期：2009-07-09（责任编辑：姜晓庆）（上接第1332页）
