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超高效液相色谱法测定牛肉中头孢噻呋残留量的研究

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第40卷农业科学研究

头孢噻呋渊Ceftiofur冤是头孢菌素类兽医临床专用抗生素袁通过作用于转录肽酶来阻断粘肽的合成袁使细菌细胞壁缺失而达到杀菌作用.对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较强的抗菌作用.随着头孢噻呋在畜牧业中的广泛使用袁不可避免地引起其在动物组织或产品中的残留.欧盟及我国均规定了头孢噻呋在牛肉组织中的最高残留限量为1000滋g/kg.本文就牛肉组织中头孢噻呋残留检测进行了方法考察袁建立了超高效液相色谱法.1实验材料和方法1.1方法原理牛肉中残留的头孢噻呋袁用二硫赤藓醇溶液提取袁使头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋渊DFC冤有关代谢物从蛋白或含硫化合物中分离袁产生DFC.DFC与碘乙酰胺反应袁生成稳定的DFC乙酰胺衍生物渊DCA冤袁原形药或代谢物均转化为DCA衍生物.用C18固相萃取柱对衍生物进行提取.强阴离子交换渊SAX冤柱纯化袁再用强阳离子交换渊SCX冤柱净化.DCA衍生物用超高效液相色谱-紫外法检测袁外标法定量.1.2药品试剂

以下所用的试剂袁除特别注明者外均为分析纯试剂.对照品院头孢噻呋对照品为Dr.EhrenstorferGmbH公司提供.

二硫赤藓醇尧磷酸尧氯化钾尧氢氧化钾尧硼酸钾尧氯化钠尧碘乙酰胺尧无水氯化钙尧磷酸二氢钾尧冰乙酸尧氢氧化钠尧乙腈渊色谱纯冤尧甲醇渊色谱纯冤尧水为超纯水尧C18固相萃取柱渊1g/6mL冤尧SAX固相萃取柱渊500mg/10mL冤尧SCX固相萃取柱渊100mg/10mL冤尧

微孔滤膜0.2滋m.1.3仪器和设备

超高效液相色谱仪渊美国ACQUITYUPLCH-Class冤袁配有紫外检测器曰离心机渊日本日立

CR22G冤曰旋涡混匀器渊IKA公司MS3冤曰电子天平渊梅

特勒要托利多AX-205冤曰电子天平渊梅特勒要托利多PL202-L冤曰振荡器渊上海安亭WSZ-100-A冤曰恒温水浴振荡器渊上海琅轩SHZ-A冤曰固相萃取装置渊SU鄄PELCO冤.

超高效液相色谱法测定牛肉中头孢噻呋残留量的研究

李莉1袁李鑫2袁王复江2袁马岩1袁陈海燕1袁陈娟1袁武晓宏1袁邓亚婷1渊1.宁夏兽药饲料监察所袁宁夏银川750011曰2.宁夏中卫市动物疾病预防控制与卫生监督中心袁宁夏中卫755000冤

摘要院采用了牛肉中头孢噻呋残留检测的超高效液相色谱方法渊UPLC冤.样品中残留的头孢噻呋袁用二硫赤藓醇溶液提取袁使头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋渊DFC冤有关代谢物从蛋白或含硫化合物中分离袁产生DFC.DFC与碘乙酰胺反应袁生成稳定的DFC乙酰胺衍生物渊DCA冤.用C18固相萃取柱对衍生物进行提取.强阴离子交换渊SAX冤柱纯化袁再用强阳离子交换渊SCX冤柱净化后袁进行UPLC分析.头孢噻呋在0.06耀10.0滋g/mL的质量浓度范围内袁呈良好的线性关系曰在牛肉组织中添加量分别为500尧1000尧2000滋g/kg袁添加回收率在80.0%~102%袁批内尧批间RSD均﹤10%.本方法定量准确袁结果重复性好袁适用于牛肉中头孢噻呋残留定量分析.关键词院超高效液相色谱法曰牛肉曰头孢噻呋曰残留中图分类号院S859.84文献标志码院B

收稿日期院2018-08-14作者简介院李莉渊1972要冤袁女袁高级畜牧师袁主要从事兽药残留及畜产品质量安全监测研究.

文章编号：员远苑3原0747（圆园19）园1原园094原园3农业科学研究JournalofAgriculturalSciences

2019年3月

Mar.圆园19第40卷第1期

灾燥造援40晕燥援1第1期

1.4方法1.4.1标准贮备液和标准工作液的配制取头孢噻

呋对照品约10mg袁精密称量袁分别置于100mL量瓶中袁用0.025M磷酸盐缓冲溶液溶解并稀释至刻度袁制成质量浓度为100滋g/mL的标准贮备液.准确量取5mL头孢噻呋标准贮备液袁于50mL量瓶中袁用0.025M磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度袁制成质量浓度为10滋g/mL的标准工作液.准确量取10滋g/mL的标准工作液适量袁用0.025M磷酸盐缓冲溶液稀释袁使其质量浓度分别为0.06尧0.5尧1.0尧2.0尧3.0尧6.0尧10.0滋g/mL的系列标准溶液.将系列标准溶液各取

2.0mL袁按样品提取步骤处理后袁作为系列标准对照

溶液袁供超高效液相色谱测定袁以测得峰面积为纵坐标袁对应的标准溶液质量浓度为横坐标袁绘制标准曲线.计算回归方程及相关系数.1.4.2仪器条件及参数色谱柱院BEHC18柱袁100mm伊

2.1mm袁粒径1.7滋m.

柱温为35益袁进样量为5滋L袁检测波长为266nm袁流动相为0.1%甲酸水溶液颐0.1%甲酸乙腈溶液渊94﹕6冤

1.4.3样品的前处理1冤提取与衍生称取空白样品渊2依0.05冤g袁于50mL

离心管中袁加提取液30.0mL袁涡旋混匀袁中速振荡5min.取提取液15.0mL置于另一离心管中袁50益水浴中袁中速振摇15min提取.每个离心管中加碘乙酰胺溶液3mL袁混匀后袁室温下放置衍生30min袁于4益下12000r/min离心10min袁上清液转入另一离心管中袁备用.2冤净化淤C18固相萃取柱净化袁依次用甲

醇4mL和磷酸盐缓冲液5mL袁对C18固相萃取柱进行预洗.将备用液过柱袁依次用磷酸盐缓冲液5mL和0.01M氢氧化钠溶液3mL洗柱袁挤干.加C18柱洗脱液3mL袁收集洗脱液袁用水15mL稀释至总体积为18mL袁混匀.于SAX固相萃取柱净化袁依次用甲醇2mL尧SAX预洗液2mL和水2mL对SAX固相萃取

柱进行预洗.在柱中加C18柱的稀释洗脱液袁过柱袁用水1mL洗袁挤干.加SAX洗脱液3mL袁收集洗脱液袁加水10mL稀释至总体积为13mL袁混匀.盂SCX固相萃取柱净化袁依次用甲醇1mL尧SCX预洗液2mL和水2mL对SCX固相萃取柱进行预洗.在柱中加SAX柱

的稀释提取液袁过柱袁用水1mL洗袁挤干.加SCX洗脱液2.0mL袁洗脱袁挤干袁收集洗脱液袁混匀.经0.2滋m微

孔滤膜过滤袁供超高效液相色谱检测.注院提取液渊0.4%冤将1g二硫赤藓醇溶于250mL0.05M硼酸缓冲液中袁每天制备.

碘乙酰胺溶液渊14%冤将7g碘乙酰胺溶于50mL0.025M磷酸缓冲液中袁每天制备.

C18柱洗脱液乙腈院水渊15颐85冤

SAX预洗液甲醇院0.1MNaCL溶液渊25颐75冤

SAX洗脱液乙腈院5%醋酸溶液渊5颐95冤SCX预洗液甲醇院0.1MCaCL2溶液渊25颐75冤SCX洗脱液乙腈院0.1MNaCL溶液渊5颐95冤1.4.4回收率及精密度的测定称取均质后的牛肉样品袁置于50mL离心管中袁添加适宜质量含量的标准工作液袁使牛肉中的药物质量含量分别为500尧1000尧2000滋g/kg.每个质量含量5个样品袁重复3

批次袁按照1.4.3项方法处理后袁供超高效液相色谱测定袁外标法定量袁计算回收率尧批内尧批间变异系数.2结果

2.1标准曲线将系列标准溶液按样品提取步骤处理后袁从低质量浓度到高质量浓度依次进样袁以峰面积Y对质量浓度X渊滋g/mL冤作标准曲线袁得出的回归方程院Y=14965X原1233袁相关系数R2

为0.998.从中可以看

出袁头孢噻呋在0.06~10.0滋g/mL的质量浓度范围内呈现良好的线性关系.线性回归方程尧相关系数见图1.

2.2样品回收率尧准确度及精密度在空白牛肉样品中各添加3个不同质量浓度的头孢噻呋进行回收率试验袁结果汇总见由表1可以看出头孢噻呋在空白牛肉样品中的平均添加回收率为80.0%耀102%袁批内批间相对标准偏差均小于10%.空白尧标准及添加回收图谱见图2-4袁样品回收

率及精密度结果见表1.

图1标准曲线及相关系数

李莉等院超高效液相色谱法测定牛肉中头孢噻呋残留量的研究95第40卷农业科学研究

StudyondeterminationofceftiofurinbeefbyUPLCLiLi1,LiXin2,WangFujiang2,MaYan1,ChengHaiyan1,ChengJuan1,WuXiaohong1,DengYating1

渊1.NingxiaVeterinaryDrugsandFodderInspectionInstitute,Yinchuan750011,China;

2.NingxiaZhongweiCenterforAnimalDiseasePreventionControlandHealthSupervision,Zhongwei755000,China冤

Abstract院AUPLCmethodwasestablishedforthedeterminationofCeftiofurinbeef.Theresidualceftiofurinthesamplewasextractedwithdisulfideerythritolsolution,andtherelatedmetabolitesofceftiofurandDFCwereseparatedfromproteinorsulfurcompoundstoproduceDFC.DFCwasreactedwithiodineacetamidetoformastableDFCacetamidederivative(DCA).C18solidphaseextractioncolumnwasusedtoextractthederivatives.Stronganionexchange(SAX)columnpurification,andthenstrongcationexchange(SCX)columnpurification,UPLCanalysis.Thecalibrationcurvesweregoodlinearbetweenthepeakareasandconcentrationsfrom0.06耀10.0滋g/mL,thedosageofceftiofurinbeeftissuewas500g/kg,1000g/kg,2000g/kg,therecoverywas80.0%~102%,RSDwaslessthan10%inbatchandbetweenbatches.Themethodisaccurateandrepro鄄ducibleforthedeterminationofceftiofurresiduesinbeef.Keywords院UPLC曰beef曰ceftiofur曰residues渊责任编辑尧校对郑国琴冤

3小论本研究建立了超高效液相色谱法渊UPLC冤测定牛肉中头孢噻呋残留的方法袁方法定量准确袁回收率稳定袁线性和精密度等参数均能满足兽药残留分析

的要求袁可以用来监控牛肉中头孢噻呋的残留.参考文献院[1]赵静袁刘鹏袁钱镭.UPLC-MS/MS检测原料奶中脱呋喃甲酰基头孢噻呋残留方法的建立[J].食品工业科技袁2014渊16冤院35-37.[2]李帅鹏袁黄显会袁孔祥凯.头孢噻呋在猪组织中残留消除

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固相萃取-_液相色谱串联质谱法测定牛肉中多种磺胺类药物残留量

固相萃取-_液相色谱串联质谱法测定牛肉中多种磺胺类药物残留量

固相萃取-液相色谱串联质谱法测定牛肉中多种磺胺类药物残留量贾彩霞，周洁如，朱洪希，吴　旦（常州检验检测标准认证研究院，江苏常州 213000）摘　要：目的：建立牛肉中多种磺胺类药物残留量的检测方法。

方法：处理均质后的牛肉，用乙酸乙酯提取出目标物，用HLB小柱净化，氮吹，复溶。

以0.1%的甲酸甲醇与0.1%的甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，经T3色谱柱进行分离，采用离子源为电喷雾离子源，扫描方式为正离子扫描，检测模式为多反应监测，外标法定量。

结果：18种磺胺在2～200 ng·mL-1线性关系良好（r＞0.996），方法的检出限为2 μg·kg-1，定量限为10 μg·kg-1，加标回收率为64.87%～105.00%，相对标准偏差为1.6%～6.8%。

结论：本方法灵敏、准确，适用于牛肉中18种磺胺类药物的检测。

关键词：固相萃取；高效液相色谱-串联质谱；磺胺类药物；牛肉Determination of Sulfonamide Residues in Beef by Solid Phase Extraction-Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometryJIA Caixia, ZHOU Jieru, ZHU Hongxi, WU Dan(Changzhou Institute of Inspection and Testing Standards Certification, Changzhou 213000, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of sulfonamides residues in beef. Method: The homogenized beef was treated, the target was extracted with ethyl acetate, purified by HLB column, nitrogen blowing, and redissolved. 0.1% formic acid methanol and 0.1% formic acid aqueous solution were used as mobile phase for gradient elution, and separated by T3 column. Ion source was used as electrospray ion source, scanning mode was positive ion scan, detection mode was multi-reaction monitoring, and quantitative method was external standard method. Result: The internal linear relationship of 18 sulfonamides was good (r＞0.996) in the range of 2～200 ng·mL-1. The limits of detection and quantification were 2 μg·kg-1 and 10 μg·kg-1. The recoveries were 64.87%～105.00% and the relative standard deviations were 1.6%～6.8%. Conclusion: The method is sensitive, accurate and suitable for the detection of 18 sulfonamides in beef.Keywords: solid phase extraction; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamides; beef兽药残留是指用药后蓄积或存留于畜禽机体或产品中原型药物或其代谢产物，包括与兽药有关的杂质残留[1]。

高效液相色谱法测定牛肌肉中庆大霉素残留的研究

高效液相色谱法测定牛肌肉中庆大霉素残留的研究

高效液相色谱法测定牛肌肉中庆大霉素残留的研究侯亚莉;朱奎;郭平;李海燕;李晓薇;丁双阳【期刊名称】《中国农学通报》【年(卷),期】2008(24)6【摘要】本研究建立一种简捷、快速的高效液相色谱法测定牛肌肉组织中庆大霉素的残留。

样品经50%三氯乙酸沉淀蛋白,上清液过MCX固相萃取小柱,洗脱液氮气吹干,经FMOC-Cl柱前衍生化,正己烷脱脂,用荧光检测器检测,激发波长260nm,发射波长315nm。

该法对牛肌肉组织中庆大霉素的检测限(LOD)为25μg·kg-1,定量限(LOQ)为50μg·kg-1,在50、100、500μg·kg-1添加水平回收率为80.4%～82.8%,批内变异系数为3.4%～6.8%,批间变异系数为5.5%～8.1%。

本方法可对牛肉样品中庆大霉素残留进行分析。

【总页数】5页(P102-106)【关键词】高效液相色谱;牛肌肉组织;庆大霉素;残留检测【作者】侯亚莉;朱奎;郭平;李海燕;李晓薇;丁双阳【作者单位】重庆市饲料兽药监察所;中国农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】O657.72;TQ465.2【相关文献】1.液相色谱法对牛、猪肌肉和肾脏中头孢噻呋残留量的测定研究 [J], 姜维;方晓明;唐毅锋;庞国芳;陶宁萍2.高效液相色谱法分析牛和猪肌肉组织中残留的安乃近药物的三种代谢物 [J], 沈金灿;庞国芳;谢丽琪;陈沛金;韩瑞阳3.高效液相色谱法测定鸡肌肉中地克珠利、妥曲珠利及其代谢物的残留量 [J], 林仙军;陆春波;包爱情;周芷锦;罗成江;李孝军;应永飞4.高效液相色谱法测定牛肌肉中苯并咪唑类药物残留的研究 [J], 张英宣5.高效液相色谱法测定牛肌肉中苯并咪唑类药物残留的研究 [J], 张英宣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

超高效液相色谱- 串联质谱法分析动物源性食品中四环素类药物残留

超高效液相色谱- 串联质谱法分析动物源性食品中四环素类药物残留


移到 100ml 的棕色容量瓶中定容处理，定容处理之后将其
净化和测定
放置在零下 20 摄氏度的环境下保存。
在上文等待净化的提取液中加入比例在 99.8% 左右的
仪器使用分析条件
甲酸水溶液 0.8ml，按照涡旋的状态缓和搅拌处理，将溶
超高效液相色谱条件
解液转移到 10ml 的离心管中，按照每分钟 4000 转的离心
图一：各个兽药总离子流色谱图
动物源性食品中四环素残留药物的检测工作中。
（1-10 分别代表磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、
□□苏志同 1 谢金彤 1 李 龙 2 熊 飞 1 杨健超 1 彭 城 1
磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺异恶唑、
超高效液相质谱条件
柱净化和脱溶剂的处理之后额外使用甲醇水来对物质进行
超高效液相质谱电离的方式是大气压电喷雾，电离电
溶解，溶解处理之后将这些物质放置在超高效液相色谱串 压的基本设定值为 3.8KV，锥孔的电压为 30V，离子源的
联质谱上完成检测，检测结果发现样本中四环素类残留在 温度为 100℃，维孔反吹气流量为每小时 85L，脱溶剂气
氮吹仪、均质器。试剂包含色谱纯、实验用水、缓冲液。 残渣使用溶剂反复提取，在一定时间之后进行最终的两次
另外，还需要按照规范的比例要求配比储备液、工作液。 提取，合并形成提取液，而后将提取液放置在 40℃的环境
即分别称量各 10mg 的标准品，使用溶剂分解之后将其转 下减压快速浓缩到干燥的状态，准备净化。
分析检测
实验结果和讨论
优化前期处理条件
标准曲线和检出限 为了能够消除基质效应对定量测定的影响，要重新配
在对比乙腈和丙酮作为提取液后的提取率之后发现乙 置包含磺胺、喹诺酮的混合溶液。在仪器工作环境中对一
210988842_超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留

210988842_超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留

超高效液相色谱-质谱法测定动物源性食品中23种磺胺类药物残留傅雅丽（黄石市食品药品检验检测中心，湖北黄石 435000）摘 要：目的：建立一种超高效液相色谱-质谱法同时检测动物中23种磺胺类药物残留的方法。

方法：将样品进行酸化提取，经Oasis PRiME HLB富集净化。

用C18柱分离，以0.1%甲酸溶液-甲醇系统为流动相，经超高效液相色谱分离，电喷雾串联四极杆质谱进行检测。

结果：23种磺胺药物在13 min内可有效分离，检出限均为2 μg·kg-1。

在5～100 ng·mL-1，线性相关系数≥0.995 0，平均回收率在75.6%～101.5%，相对标准偏差为2.0%～11.8%。

结论：本方法简单高效、灵敏度高，可以满足动物中相关磺胺药物残留的检测。

关键词：超高效液相色谱-质谱法；磺胺类药物残留；动物源性食品Determination of 23 Sulfonamides Residues in Foodstuffs of Animal Origin Using UPLC-MS/MS MethodFU Yali（Huangshi Institutes for Food and Drug Control, Huangshi 435000, China）Abstract: Objective: To establish a method for simultaneous determination of 23 sulfonamides residues in animals by ultra performance liquid phase mass spectrometry. Method: The samples were acidified and purified by Oasis PRiME HLB. C18 column was used for separation, and 0.1% formic acid-methanol system was used as mobile phase. The results were separated by ultra-high performance liquid chromatography and detected by electrospray tandem quadrupole mass spectrometry. Result: 23 sulfonamide drugs were separated effectively within 13 min, and the detection limit was 2 μg·kg-1. In the range of 5～100 ng·mL-1, the linear correlation coefficients were≥0.995 0, the average recoveries were 75.6%～101.5%, and the average relative standard deviations were 2.0%～11.8%. Conclusion: This method is simple, efficient and sensitive, and can satisfy the detection of related sulfonamide residues in animals.Keywords: ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; sulfonamides residues; foodstuffs of animal origin磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物[1]。