维生素的测定ppt课件

二、维生素的测定
（一）荧光分析法简介（Fluorescence analysis ） 1、有关荧光的概念 荧光；荧光物质；激发光；发射光。 2、定性分析
荧光分析法简介
IF——物质被紫外线照射后所发射出的荧光强度 f——物质对紫外线的吸收系数 C——溶液浓度
4、仪器
（五）维生素B2（riboflavin）的测定 ---核黄素荧光法 １、原理 ２、方法提要 分四步：样品处理、沉淀杂质、纯化、测定。 （１）样品处理 （２）沉淀杂质 （３）纯化 （４）测定：激发光λ440nm，发射光λ525nm. 连二亚硫酸钠（Na2S2O4）; 荧光红钠
（六）维生素C（vitamin C, ascorbic acid）的测定
维生素A(vitamin A)的测定
２、紫外分光光度法
原理 方法概要
抽提脂溶性物→皂化→提取→洗涤→蒸发醚 层→异丙醇定溶→紫外分光光度计测定，波 长328nm。
特点及适用范围
（三）胡萝卜素的测定
1 IUβ-胡萝卜素 ≈0.6μgβ-胡萝卜素 1μgβ-胡萝卜素相当于0.167μgVitA
测定胡萝卜素的常用方法: 柱层析 纸层析(见图1-20 )。
食品中维生素的测定
Determination of vitamins in food
一、维生素及其测定意义
脂溶液性维生素包括维生素A、维生素D、维生素E、维生 素K。水溶性维生素包括硫胺素（维生素B1）、核黄素（维 生素B2）、吡哆醇（维生素B6）、烟酸（尼克酸、於酸、维 生素PP）、氰钴胺（维生素B12）、抗坏血酸（VC）等。
测量荧光的仪器有光电荧光计和荧光分光光度计。 see fig.3-23,3-24
（二）维生素A(vitamin A)的测定

（三）液相色谱分析 色谱推荐条件： 预柱：ODS 10μm,4mm×4.5cm 分析柱：ODS 5μm,4.6mm×25cm 流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用
前脱气。
紫外检测器波长：300nm,量程0.02 进样量：20μL 流速：1.65～1.70mL/min
生物鉴定法：费时、费力、需要动物饲养场地 微生物法：仅限于水溶性维生素的测定 荧光法：用于硫胺素的测定 仪器法：快速、灵敏、有较好的选择性 HPLC：用于大多数维生素的测定，费用高
二、脂溶性维生素的测定
脂溶性维生素的理化性质
溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于苯、 乙 醚、 丙酮、三氯甲烷、乙醇等有机溶剂。

做空白试验
重复上述操作，将20ml维生素B1标准使用液加入 盐基交换管以代替试样提取液，即得到标准净化液。
4.氧化
将5ml试样 净化液分别加 入A、B两个 反应瓶；
同时将5ml 标准净化液分 别加入A1、B 1两个反应瓶 中。
Maizel-Gerson 反应瓶
氧化流程
A、A1瓶 15%NaO H (3 ml)溶液振摇
（一）原理
样品中维生素A 及维生素E 经皂化提取 处理后，将其从不可皂化部分提取至有 机溶剂中。用高效液相色谱法C18 反相 柱将维生素A 和维生素E 分离，经紫外 检测器，用内标法定量测定
（二）样品处理
1.皂化称取适量样品（含维生素A 约3μg， 维生素E 各异构体约40μg）于三角瓶中， 加30mL 无水乙醇，振摇使样品分散。加 入5mL100g/L 抗坏血酸溶液和2.00mL 苯 并[e]芘溶液（5μg/L，内标用），混匀， 加10mL 氢氧化钾溶液（50％浓度），混 匀，于沸水浴上回流30min，使皂化完全， 皂化后立即放入冰水中冷却。

三氯化锑比色专属性差， 且易水解产生SbOCl使 溶液浑浊，影响比色 （三）三氯化锑比色法
含量测定
•
原理：维生素A与三氯化锑的无水三氯 甲烷溶液作用，产生不稳定的蓝色，在 618～620nm的波长处有最大吸收，符 合Beer定律
蓝色不稳定，要求操作迅 速，一般在加入三氯化锑 后应在5～10s内测定
ക不饱和脂肪醇 ക主要来自鲛类无毒海鱼肝脏中 提取的脂肪油（通称鱼肝油）

包括:VitA1（视黄醇）、 VitA2（去氢 维生素A ）和VitA3 （去水维生素A ） 等。
生物活性：VitA1活性最高，VitA2是 VitA1的30%-40%，VitA3是VitA1的 0.4%。 故通常所说的维生素A是指维生素A1。
临床药学 第①组
讲解员：施文玲 胡家勇 PPT制作：郭贤旋 内容来源：武丰瑾 陈燕兰 贺智杰 马天著 陈天威
1.掌握维生素A的化学结构、理化性质以 及与分析方法间的关系，专属鉴别反应、 主要的含量测定方法和原理。
2.熟悉维生素A的有关物质、检查方 法与原理。
维生素A的来源、成分
维生素A的结构与性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定
1、三点校正紫外分光光度法测定维
生素A 醋酸酯含量时，采用的溶剂 是
A.甲醇 C 乙醚 E 三氯甲烷 B 丙酮 D 正己烷 D
2、维生素A采用的鉴别方法是
A 硫色素反应 3 B 三氯化锑反应 C 与硝酸银反应 D 水解后重氮化－偶合反应 E 麦芽粉反应
B
3、维生素A的含量测定方法有
A 汞量法 B 三点校正紫外分光光度法 C 高效液相色谱法 D 双相滴定法 E 三氯化锑比色法

2）计算：A.求 E % ：由A= E1cm CL公式，求得E1cm =A/(C×L) 1cm 1% B.求效价： 效价（IU / g） E1 cm 1830 C.求维生素A醋酸酯占标示量的百分含量：

维生素B6测定
• 6 分析结果计算和表述 • 维生素B6的含量（mg/kg）按下式计算： • VB6（mg/kg）＝M×D/W×（1000/1000）＝ M×D/W • 式中：M──工作曲线上查得维生素B6含量， μg/mL； • W──试样的质量，g； • D──试样的总体测定
• 3、 试剂和溶液 • 3.1 pH7缓冲液称取29.3023g磷酸氢二钠（GB 1263） 和3.8115g柠檬酸，于100mL容量瓶中，用煮沸后冷却 的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。 • 3.2 维生素B6标准贮备溶液称取40mg（中国药典参 照标准）维生素B6，或复合维生素（中国药典参照标 准）B640mg， B1100mg，B250mg（精确至 0.0001g）于100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度， 此液1mL含400μg的维生素B6。 • 3.3 维生素B6标准工作溶液 • 吸取（3.2）贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀 释至刻度，混匀，此液1mL含4μg的维生素B6。
• 3、试剂和溶液 • 3.1 盐酸溶液，0.1mol/L：将8.5mL盐酸（GB 622）用水稀释至1000mL。 • 3.2 盐酸溶液，1mol/L。 • 3.3 氢氧化钠（GB 629）溶液，1mol/L。 • 3.4 冰乙酸（GB 676）。 • 3.5 冰乙酸溶液，0.02mol/L：将1.8mL冰乙酸用 水稀释至1000mL。 • 3.6 高锰酸钾（GB 643）溶液，40g/L。 • 3.7 过氧化氢（HG 3─1082）溶液，100mL/L。 现用现配。
8.1 维生素B6的测定 8.2 VB2的测定 8.3 高效液相色谱法测定维生素
• 维生素：维持人体生理功能所必需的、含 量极少但具有重要生理功能的、含量极微 的天然有机物质。 • 维生素种类： 水溶性:VB1、VB2、VB6、VB12、VC 脂溶性：VA、VD、VE、VK