畜牧兽医科技信息2022年第02期铜绿假单胞菌是革兰氏阴性菌袁在自然界中分布广泛遥铜绿假单胞菌的寄主范围较广袁涵盖了水生和陆生植物尧动物和人类遥铜绿假单胞菌是一种人畜共患病的机会性病原体袁对老年人或免疫功能低下的人和牲畜具有严重的健康风险袁可引起各种急慢性感染袁给人体健康和养殖业造成了较大的危害和经济损失遥生物膜的形成等因素有利于铜绿假单胞菌在各种环境条件下的存活袁并有助于该菌的增殖和分布遥铜绿假单胞菌和其他大多数假单胞菌一样袁对很多种类的抗生素具有固有的耐药性袁该菌可以通过突变或水平基因转移扩大其抗生素耐药性和耐药谱袁从而导致药物治疗失败遥同时袁铜绿假单胞菌的水生地包括河流尧大洋尧休闲水域和动物生产的废水袁该菌增殖和感染已成为日益严重的公共卫生问题袁并引起了医务工作者和研究人员高度重视和注意遥铜绿假单胞菌可引起家禽尧家畜和宠物的各种急慢性感染袁例如中耳炎尧乳腺炎尧子宫内膜炎尧出血性肺炎尧泌尿道和生殖道感染等袁可发展成致死性腹泻尧菌血症和败血症等疾病袁极大地危害了动物健康袁给动物生产行业造成了较大的经济损失遥同时袁铜绿假单胞菌及其代谢产生的毒物尧废物还可以通过直接接触或食用肉类等方式传播给人体袁给人体健康带来了较大的风险遥1铜绿假单胞菌的耐药情况及对禽鸟的危害近几十年来袁随着养鸡业规模的不断扩大袁鸡铜绿假单胞菌病也不断增多袁常见雏鸡发病袁多为急性致死性败血症袁死亡率可高达80%袁给养鸡业带来了较大的危害遥翟晶晶等从临汾尧平遥等地养鸡场中患病死亡的病鸡中分离尧鉴定得到2株禽铜绿假单胞菌G1和G2袁这两株分离株均具有高毒力袁接种雏鸡后24h内死亡率可达100%袁分离株对亚胺培南尧替卡西林尧环丙沙星等抗生素敏感遥徐晓东等从威海市文登区某养殖场病死的珍珠鸡中分离得到1株铜绿假单胞菌袁对阿莫西林尧强力霉素和丁胺卡那霉素低敏或耐药袁并确诊该菌为养殖场珍珠鸡大量死亡的病因遥张杨子等从病死鸡中分离尧鉴定4株铜绿假单胞菌袁对阿莫西林尧头孢噻吩和红霉素有较强的耐药性袁对头孢曲松和阿米卡星高度敏感遥近年来有关铜绿假单胞菌对雏鸭和雏鹅的致病性报道较少遥李翠蓉等从病死雏鹅中分离得到1株铜绿假单胞菌并确诊为造成该养殖场雏鹅大量死亡的病原菌遥该菌肉汤培养物注射小公鹅和小鼠袁实验动物26~72h内全部死亡遥该菌对痢特灵尧羧基青霉素尧盐酸土霉素等均不敏感袁对庆大霉素和丁胺卡那霉素高度敏感遥基金项目院黑龙江省院所基本应用技术研究专项渊ZNJZ2019SW01冤作者简介院叶阳渊1987~冤袁女袁硕士袁工程师袁研究方向院微生物学遥绎通信作者铜绿假单胞菌对养殖业危害及耐药性研究概况叶阳袁胡基华袁曲晓军绎渊黑龙江省科学院微生物研究所袁黑龙江哈尔滨150010冤摘要院铜绿假单胞菌广泛存在于养殖场土壤尧饮用水尧环境物品以及牲畜体内袁在畜禽免疫力低下时可造成各种急慢性感染袁进而发展成致死性腹泻尧菌血症和败血症等疾病袁危害动物健康遥铜绿假单胞菌可通过突变或基因水平转移获得对抗生素的耐药性袁近几十年来抗生素在医院和养殖业的使用袁造成了该菌耐药菌株的大量出现袁导致了抗生素疗效不佳遥本文简要概述了近年来铜绿假单胞菌对动物生产的危害和对抗生素的耐药情况遥关键词院铜绿假单胞菌曰养殖业曰危害曰耐药性DOI:10.3969/J.ISSN.1671-6027.2022.02.007专论与综述
泰山医学院学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＡＩＳＨＡＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ Ｖｏｉ．３ １ Ｎ０．１ ２０１０
亚胺培南对头孢他啶有诱导作用的
铜绿假单胞菌耐药机制研究
姜梅杰 （泰山医学院附属泰山医院，山东泰安２７１０００）
摘要：目的 研究本地区亚胺培南可诱导头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌（Ｐａ）发生率及金属酶基因、外膜通道 蛋白ＯｐｒＤ２基因存在情况及外排泵抑制剂与亚胺培南和头孢他啶敏感性之问的关系。方法 收集临床分离的Ｐａ ３２５株，Ｄ试验筛选出】１６株亚胺培南可诱导头孢她啶耐药的Ｐａ，纸片扩散法检测亚胺培南等１４种抗菌药物的敏 感性，采用ＰＣＲ法检测ＩＭＰ、ＶＩＭ、ＳＰＭ、ＧＩＭ基因和外膜通道蛋白ＯｐｒＤ２基因，琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑 制剂羟基氰氯苯腙（ＣＣＣＰ）前后对亚胺培南和头孢他啶的ＭＩＣ值。结果 收集的３２５株Ｐａ中，有３５．７％（１１６／ ３２５）亚胺培南可诱导头孢他啶耐药，加入ＣＣＣＰ前后对亚胺培南和头孢他啶的敏感性无明显变化；１１６株Ｐａ中， ８０．２％（９３／１１６）是亚胺培南耐药而头孢他啶敏感，未检出ＩＭＰ、ＶＩＭ、ＳＰＭ、ＧＩＭ基因，８７．ｉ％（８１／９３）外膜通道蛋 白ＯｐｒＤ２基因缺失。结论 铜绿假单胞菌中亚胺培南可诱导头孢他啶耐药，与其他耐药机制无关。外膜通道蛋白 ＯｐｒＤ２基因缺失是本地区Ｐａ对亚胺培南耐药的重要机制。 关键词：铜绿假单胞菌；金属酶；外膜孔蛋白；外排泵 中图分类号：Ｒ４４６．５文献标识码：Ａ文章编号：１００４－７１１５（２０１０）０１４）０１６－０４
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｉｍｉｐｅｎｅｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｆｔａｚｉｄｉｍｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
Ｊｔ４ＮＣＭｅｉ－ｊｉｅ （Ｔａｉａｎ Ｃｉｔｙ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔａｉａｎ ２７ １０００，Ｃｈｉｎａ）
铜绿假单胞菌生物学特性、实验室检查、生化鉴定、临床症状、耐药性及预防
生物学特性
铜绿假单胞菌是常见条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。
铜绿假单胞菌为专性需氧菌，最适生长温度为25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，绿脓素与带荧光的水溶性荧光素等。在血平板上会有透明溶血环。
含有O抗原以及H抗原。O抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。
实验室检查
标本来源。采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。
染色镜检。为革兰阴性杆菌，菌体大小(1.5~5.0)um×宽(0.5~1)um，细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无芽胞，无荚膜。
分离培养
本菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或来自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC)；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。
普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落，365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部的细菌生长不良。
生长实验。铜绿假单胞菌在4℃不生长而在42℃可以生长。
生化鉴定
分型
(1)噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。
检验医学２０１０年５月第２５卷第５期Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎ ， ！ ！笙：
文章编号：１６７３－８６４０（２０１０）０５－０３４１ＪＤ４ 中图分类号：Ｒ３７８．９９ 文献标识码：Ａ
耐阿米卡星铜绿假单胞菌氨基糖苷类耐药基因
及其基因型研究
由然．孙立颖
（北京大学第一医院检验科，北京１０００３４） ・３４１・
摘要：目的了解耐阿米卡星（ＡＭＫ）铜绿假单胞菌（Ｐａ）的氨基糖苷类修饰酶基因和氨基糖苷耐药基因的 存在情况及其基因型。方法对临床分离的７２株多重耐药Ｐａ（其中对ＡＭＫ耐药Ｐａ组和对ＡＭＫ敏感Ｐａ组各 ３６株）分别用聚合酶链反应（ＰＣＲ）测定９种主要的氨基糖苷类修饰酶基因和２种氨基糖苷耐药基因，用基因外 重复回文序列（ＲＥＰ）一ＰＣＲ进行基因型研究。结果在分组研究中ＡＭＫ耐药Ｐａ组表现为ａａｃ（６ ）一Ｉ和ａａｃ（３）一 Ⅱ基因同时阳性的占４２．４％，ａａｃ（６ ）一Ｉ和ａｎｔ（２”）一Ｉ基因同时阳性的占３６．４％，是耐药组的主要修饰酶基因； ＡＭＫ敏感Ｐａ组表现为ａａｃ（６ ）一Ｉ基因阳性的占５０．０％，ａａｃ（３）一Ⅱ基因阳性的占３３．２％，是敏感组的主要修饰 酶基因。２种氨基糖苷耐药基因（ＲｍｔＡ和ＲｍｔＤ）均为阴性。ＲＥＰ—ＰＣＲ显示耐药菌株可分为Ａ～Ｇ ７型，其中 ＡＭＫ耐药Ｐａ组的主要分型为Ｆ型（其中尤以Ｆｌ型为多）；ＡＭＫ敏感Ｐａ组以Ｅ型为多见。结论通过２种或 多种氨基糖苷类修饰酶同时作用于ＡＭＫ是Ｐａ对ＡＭＫ耐药的重要途径之一。 关键词：铜绿假单胞菌；阿米卡星；氨基糖苷类修饰酶基因；ＲｍｔＡ基因；ＲｍｔＤ基因；基因外重复回文序列一聚
合酶链反应
Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ａｍｉｋａｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＹＯＵ Ｒａｎ，ＳＵＮ Ｌｉｙｉｎｇ． （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｆｉｎｇ １０００３４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｓｉｔｕａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉ￣ｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｏｆ ａｍｉｋａｃｉｎ（ＡＭＫ）一ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（Ｐａ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ ７２ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｍｕｔｌｉ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ３６ ＡＭＫ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐａ ａｎｄ ３６ ＡＭＫ—ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｐａ，ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ９ ｍａｉｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ ２ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ （ＰＣＲ）．Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｂｙ ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ｅｘｔｒａｇｅｎｉｃ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ（ＲＥＰ）一ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ＡＭＫ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐａ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ４２．４％ｆｏｒ ａａｃ（６ ）一Ｉ ａｎｄ ａａｃ（３）一Ⅱｇｅｎｅｓ ｂｏｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ，ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ３６．４％ ｆｏｒ ａａｃ（６ ）一Ｉ ａｎｄ ａｎｔ（２ ）一Ｉ ｇｅｎｅｓ ｂｏｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｒｏｕｐ．Ｉｎ ＡＭＫ—ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｐａ ｇｒｏｕｐ，ａａｃ（６ ）一Ｉ ｇｅｎｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｗａｓ ５０．０％，ａｎｄ ａａｃ（３）一１Ｉ ｇｅｎｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｗａｓ ３３．２％．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ．２ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ（ＲｍｔＡ ｇｅｎｅ ａｎｄ ＲｍｔＤ ｇｅｎｅ）ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｆｏｕｎｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ＲＥＰ—ＰＣＲ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ７ ｔｙｐｅｓ ｆｒｏｍ Ａ ｔｏ Ｇ．Ｉｎ ＡＭＫ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｐａ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ｍａｉｎ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｗａｓ Ｆ（ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ Ｆ１）．Ｉｎ ＡＭＫ—ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｐａ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｗａｓ Ｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｉｔ ｓ ｏｎｅ ｏｆ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｗａｙｓ ｏｆ ＡＭＫ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｎ Ｐａ ｔｈａｔ ｔｗｏ ｏｒ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｔｗｏ ａｍｉｎｏｇｌｙｃｏｓｉｄｅ ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｃｔ ｏｎ ＡＭＫ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．
