液体菌种培养基

食用菌液体菌种的制作
2009—5-5 8：23:26
在无菌的条件下把菌种投放到培养基里。

安装通气管后用输氧机给培养基输入氧气。

把培养基放置在摇床机上进行振荡培养.
食用菌液体菌种具有生产周期短、菌龄整齐一致、接种方便、发酵快、适宜于工厂化生产等优点。

食用菌液体菌种的生产方式一般可分为电磁搅拌法、摇瓶机法、简易深层发酵（吹氧)法、发酵罐法。

据省农科院食用菌站工作人员介绍，摇瓶机法不仅接种简单，管理方便，而且生产量根据机器的设定而不同，投资20 00～3000元即可。

配制液体培养基先把马铃薯煮到熟而不烂时提取上清液，然后配制3％葡萄糖、1%玉米粉、0。

05%硫酸镁、0。

1％磷酸二氢钾，最后将马铃薯上清液和上述溶液及水混合即可。

液体培养基适用于多种食用菌菌种的培养.
摇瓶振荡培养液体培养基配制好后,装入容量为500毫升的三角烧瓶中，每瓶装入100毫升，并加入1～15粒小玻璃珠，瓶口用棉塞、牛皮纸密封,在1.5千克/平方厘米压强下灭菌30分钟。

然后投入一块约2平方厘米的斜面菌种，于2 3℃～25℃下静置培养24小时。

待菌丝萌发时再放置在往复式摇床上振荡培养，振荡频率为每分钟80～100次，振幅为6～10厘米。

摇床室的温度控制在24℃～2 5℃,培养时间因菌类不同而异，一般是5天左右。

将振荡好的培养基倒入大容器里，经过扩容后，在无菌条件下安装通气管，用输氧机通入适量氧气后培养48小
时.培养结束的标准:培养液清澈透明,其中悬浮着大量小菌丝球，并伴有各种菇类特有的香味。

培养好的液体菌种应放入培养箱中保存。

液体菌种的5种接种方法液体菌种具有方便快捷菌龄短而一致，纯度高，活力强等优点，越来越受科研工作者和广大食用菌生产者的重视，但如何正确使用液体菌种尚未见系统报道。

液体菌种培养好后接种方法直接影响液体菌种优势的发挥，甚至关系到生产的成败。

笔者在规模应用液体中使用过多种接种方法，各有特点，下面介绍给大家以供参考。

1 料表面接种法这是目前采用较普遍的方法，接种时多为瓶装或袋装培养料，上端有一定的空间，如生产金针菇、茶薪菇、黑木耳、杏鲍菇菌包，以及生产香菇鸡腿菇、平菇等菌种，接种时尽量将料表面喷淋上菌种，液种萌发生长快，封面早杂菌污染的机会很小，除破袋外菌袋污染的机会极低，甚至以万袋计算可达到零污染。

这种方法的菌球处于氧气充足的条件下生长很好。

2 表面加枪头插入式接种法因表面接种法接种时菌球易被培养料的过滤作用阻滞在料的上半部分，菌丝生长需要从上往下生长，不能在料内上下同时生长。

如果将接种枪枪头做成管状插入料内接种，菌球在料内同时生长，可以缩短发菌时间一半以上。

这种方法一要注意料内氧气的供应（不适应扎口袋），二要注意接种环境的无菌要求，避免菌种不萌发或枪头带入杂菌造成污染。

如生产中香菇菌棒从两端中心插入接种时即使不封口，菌棒中段的菌种也不易萌发。

这种方法曾在低温季节大量接种香菇、鸡腿菇、金针菇、平菇等菌种，成品率在98%~100%，缩短时间一半以上。

3 袋表面扎孔接种法长菌棒从两端接种不能缩短养菌时间，从袋的表面一面或两面用枪头扎入３~５cm深并同时接种，扎孔间隔根据需要确定，如香菇每棒扎３~５个孔，这种方法调节接种量和孔间距离可以达到缩短养菌时间和减少杂菌污染的目的，缺点是用种量大，每个孔的接种量不少于１０mL，接种后不封口的应达到每孔２０mL以上。

4 袋壁内喷射接种法长菌棒还可以采取从两端一侧用枪头分别扎入到袋薄膜内，从料与塑料薄膜之间喷射菌种（要求液体压力达到9.8×100KPa以上），喷射后用手按压分散菌种，使菌棒一侧布满菌种，待菌丝生长１~３c m后可以扎孔增氧．这种方法可以覆盖较大的料表面，发菌快袋面微孔污染小，缺点是用种量大，每喷射一次用种都在１００mL左右。

液体培养基的三种生长方式
液体培养基中细菌的三种生长方式分别为混浊生长、沉淀生长和菌膜生长。

以下是对这三种生长方式的详细介绍：
- 混浊生长：大多数细菌在液体培养基中生长繁殖后均匀浑浊，如大肠埃希菌、志贺菌等。

- 沉淀生长：少数呈链状排列的细菌在液体培养基底部形成沉淀，培养液较清亮，如链球菌、炭疽芽胞杆菌等。

- 菌膜生长（表面生长）：一些专性需氧菌多在液体表面生长，形成菌膜，如枯草芽胞杆菌、结核分枝杆菌和铜绿假单胞菌等。

不同细菌在液体培养基中的生长方式不同，可以此鉴别细菌。

适于香菇菌棒生产接种的液体菌种培养基配方筛选作者：张振宇王继磊吕凯苏建昌韩建东刘晓杜兴程朱肖艳姚强来源：《山东农业科学》2014年第12期摘要：选取6种常用的香菇液体菌种培养基，通过对菌丝生物量、菌棒培养状况和出菇状况的比较，筛选适合香菇菌棒的最佳液体菌种培养基配方。

结果表明，配方③（玉米粉2%、马铃薯淀粉2%、酵母膏0.2%、麸皮1%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.1%）适于香菇菌棒的直接接种，其上接种的香菇菌棒整个生长周期仅为205天。

关键词：香菇；液体菌种培养基；出菇；生长周期中图分类号：S646.1+2文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）12-0051-03近年来，我国香菇市场增长稳定，生产发展迅速，随着香菇产业的发展，对香菇生产工艺、产量及品质提出了更高的要求。

传统的香菇制种技术经过较为繁琐的母种、原种、栽培种三级培育，最后才能扩大到栽培袋的生产。

劳动强度大、工艺繁琐、污染率高、生长周期长、接种操作要求高等都大大制约了香菇的发展[1]。

液体菌种技术的出现有效解决了以上难题，但由于种种原因，当前液体菌种在香菇栽培中的应用颇为有限。

为此，本研究对香菇液体菌种培养基做了初步筛选，以期为香菇液体菌种的推广应用提供理论依据。

1材料与方法1.1供试菌株七河6号，由山东七河生物科技股份有限公司保藏。

1.2培养基配方液体培养基配方共设6组：①玉米粉2%，豆粉2%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%[2]；②葡萄糖2%，黄豆粉4%，木屑4%[3]；③玉米粉2%，马铃薯淀粉2%，酵母膏0.2%，麸皮1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁0.1%；④麸皮10%，蔗糖1%，磷酸二氢钾0.2%，硫酸镁0.15%；⑤玉米粉2%，蔗糖2%，蛋白胨0.5%；⑥麸皮100%、麦芽糖3%、硫酸镁0.15%、磷酸二氢钾0.1%[4]。

栽培培养基配方：木屑79%，麸皮20%，石膏1%，含水量55%～60%。

1.3液体菌种培养方法将活化的七河6号母种接入斜面培养基，25℃培养13 d，待菌丝长满斜面后再分别转入液体培养基摇瓶内，每瓶接种5块，每块菌丝0.5 cm2，每个处理（配方）重复10瓶。

羊肚菌液体菌种生产技术规程
羊肚菌液体菌种生产技术规程可以分为以下几个步骤：
1. 材料准备：
- 羊肚菌母种：从优质的羊肚菌菌株中选取。

- 培养基：PDA培养基、PDB液体培养基。

- 发酵罐：用于液体菌种的培养。

2. 羊肚菌母种活化：
将羊肚菌母种转接到PDA培养基上，进行活化，使菌丝活力恢复。

然后分割得到羊肚菌原种PDA菌块。

3. 羊肚菌一级种的制备：
将羊肚菌原种PDA菌块接种到灭菌后的PDB液体培养基，在20-25℃条件下，用摇床培养箱于暗处培养5-7天，得到羊肚菌一级种。

4. 羊肚菌液体栽培种的制备：
将羊肚菌一级种接种到容纳有羊肚菌液体栽培种培养基的发酵罐中，接着进行发酵培养。

培养条件为：温度20-25℃，pH 5-6，发酵时间约为7天。

5. 菌种质量检测：
对制备好的羊肚菌液体菌种进行质量检测，包括菌落形态、菌丝生长情况、生物量等指标。

确保菌种质量达到栽培要求。

6. 栽培应用：
将制备好的羊肚菌液体菌种应用于林地仿野生栽培。

栽培过程中注意观察菌丝生长、出菇情况等，并对环境条件进行适当调整，以保证羊肚菌的产量和质量。

7. 菌渣处理：
栽培结束后，对废弃的菌渣进行合理处理，避免对环境造成污染。

整个羊肚菌液体菌种生产技术规程要求严格控制各个环节，以保证菌种的质量和栽培效果。

通过不断优化生产工艺，有望提高羊肚菌的产量和稳产性，为羊肚菌产业的可持续发展提供技术支持。

液体菌种摇瓶振荡培养技术食用菌,栽培技术培养液配制好后，装入500mL容量的三角烧瓶中，每瓶装量为100mL，并加工0～15粒小玻璃珠，加棉塞后再包扎牛皮纸封口，在1.5kg/cm2压力下灭菌30分钟，取出冷却到30℃以下时，接入一块约2平方厘米的斜面菌种，于23℃～25℃下静置培养48小时，再置往复式摇床上振荡培养，振荡频率为80～100次/分，振幅6cm～10cm。

如果用旋转式摇床，振荡频率为200～220转／分。

摇床室温控制在24℃～25℃，培养时间因菌类不同而异，一般是在7天左右。

培养结束的标准是：培养液清澈透明，液中悬浮着大量小菌丝球，并伴有******菇类特有的香味。

一、液体菌种的检验方法对液体菌种进行检验可采用感官检查和取样测验相结合的方法。

1. 感官检查可采用“看、旋、嗅”的步骤进行检查。

看：将样品静置桌上观察。

一看菌液颜色和透明度，正常发酵醪液呈黄色或黄褐色，清澈透明，菌丝颜色因菌种而异，老化后颜色变深；染杂菌的醪液则混浊不透明。

二看菌丝形态和大小，正常的菌丝大小一致，呈球状、片状、絮状或棒状，菌丝粗壮，线条分明；而染杂菌后，菌丝纤细，轮廓不清。

三看上清液与沉淀的比例，菌丝体占比例越大越好，较好的液体菌种，在瓶中所占比例可达80%左右。

四看pH值指标是否变色，在培养液中加入甲基红或复合指标剂，经3～5天颜色改变，说明培养液pH值到达4.0左右，为发酵点；如果在24小时内即变色，说明因杂菌快速生长而使培养液酸度剧变。

五看有无酵母线，如果在培养液与空气交界处的瓶壁上有灰色条状附着物，说明为酵母菌污染所致，此称为酵母线。

旋：手提样品瓶轻轻旋转一下，观其菌丝体的特点。

醪液的粘稠度高，说明菌种性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。

菌丝的悬浮力好，放置5分钟不沉淀，表明菌种生长力强；反之，如果菌丝极易沉淀，说明菌丝已老化或死亡。

再次观其菌丝状态，大小不一，毛刺明显，表明是供氧不足；如果菌球缩小且光滑，或菌丝纤细并有自溶现象，说明污染了杂菌。

液体菌种染杂菌六大原因
1、培养基灭菌不彻底在对菌袋灭菌过程中因温度或时间等问题处理不当，造成灭菌不够彻底，液体菌种接入后，菌丝长至1/3左右时，杂菌由料中间向外生长造成菌丝不再向内生长。

2、接种环境不达标接种环境不标准，不卫生而导致接种环境无菌率低，因而在接种过程中杂菌孢子落入菌袋中的数量太多，形成优势而导致染菌。

3、接种不熟练使用液体菌种初期，封扎袋（口）不熟练，使培养基在空气中暴露时间过长，或接种枪频频接触菌袋或菌筐的外表面而导致染菌。

4、液体菌种中营养残留过多液体菌种正常培养，当达到培养终点时残糖浓度一般在0.5%以下，若因配制培养时浓度太大，或其它原因导致残余营养物质浓度过高，杂菌极易在这样的营养液体上萌发、繁殖，因而易导致染菌。

5、菌种老化液体菌种培养好后，不及时接种，放置时间过长造成老化，甚至自溶以后再接种，萌发能力大大降低或不萌发，菌丝不能迅速布满料面或不能布满料面，因而易造成染菌。

6、培养温度不适宜液体菌种接种后，初期培养温度过低，菌种迟迟不萌发，而杂菌逐渐侵入，着落在液体菌种营养液或培养基上，从而造成污染。

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斑玉蕈液体菌种培养条件及搔菌时间的筛选斑玉蕈（真姬菇）；液体菌种；最佳培养基；摇瓶培养；搔菌斑玉蕈（Hypsizigus marmoreus）又名真姬菇、蟹味菇、海鲜菇，隶属于伞菌目（Agaricales），白蘑科（Tricholomataceae），玉蕈属（Hypsizigus），是一种极具发展前景的珍稀食用菌[1]。

它含有丰富的蛋白质、氨基酸和维生素，具有高蛋白、低脂肪、低热量的特点，近年来深受消费者青睐[2]。

斑玉蕈是目前生长周期最长的工厂化食用菌品种，利用传统的固体菌种生产工艺，生产周期长，生产环节多，周期长、污染不易控制[3]。

在香菇、黑木耳、金针菇、糙皮侧耳的工厂化生产中已有有采用液体菌种接种的报道[4]，液体菌种接种，菌丝球数量多、萌发点多、生长速度快、不宜污染、周期短、成本低、适宜工厂化栽培[5]。

目前已有一些关于斑玉蕈液体菌种培养基筛选的相关报道[59]，在这些研究基础上笔者通过摇瓶培养，探寻斑玉蕈液体菌种培养的最佳条件，并通过栽培试验考察了不同搔菌时间对子实体产量的影响，以期为采用液体菌种工厂化栽培斑玉蕈提供理论依据。

1材料与方法1.1菌种斑玉蕈菌种（H. marmoreus）XF1由上海丰科生物科技股份有限公司提供。

1.2培养基母种培养基：PDA培养基。

摇瓶培养基配方1：2%蔗糖，0.2%麸皮，0.15% KH ？PO4，0.05% MgSO4；配方2：2%蔗糖，0.2%酵母膏，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方3：2%蔗糖，0.2%蛋白胨，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方4：2%红糖，0.2%麸皮，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方5∶2%红糖，0.2%酵母膏，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方6：2%红糖，0.2%蛋白胨，0.15% KH2PO4，0.05% MgSO4；配方7：2%葡萄糖，0.2%麸皮，0.30% KH2PO4，0.10% MgSO4；配方8：2%葡萄糖，0.2%酵母膏，0.15% KH2PO4，0.05% MgSO4；配方9：2%葡萄糖，0.2%蛋白胨，0.20% KH2PO4，0.10% MgSO4。