端粒酶活性TRAP实时定量检测试剂盒产品说明书
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细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂盒产品说明书主要用途细胞PTEN活性定磷比色法定量检测试剂是一种旨在使用特异性合成底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3),在PTEN去磷酸化后,释放出游离磷酸根,与孔雀绿染料发生显色反应后,采用比色法测定其峰值的变化,以此进行测算单位酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种细胞裂解悬液样品的PTEN活性及其抑制剂的检测。
广泛应用于细胞凋亡、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
技术背景细胞张力蛋白同源在10号染色体缺失性磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten;PTEN;EC3.1.3.67),又称为多发性晚期肿瘤突变基因1(mutated in multiple advanced cancers1;MMAC1),是一个肿瘤抑制基因,位于染色体10q23.3,转录产物515kb,蛋白产物175氨基酸。
PTEN蛋白含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白张力蛋白(tenasin)、辅助蛋白(auxilin)同源的区域,是一种双重特异性磷酸酶,能使酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸、磷酯酰肌醇(phosphoinositide)等去磷酸化。
PTEN具有调节细胞周期、防止细胞过度生长和分裂、参与细胞凋亡、粘附、迁移、浸润,控制细胞内磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate;PIP3)水平,调控Akt/PKB信号通路等功能。
PTEN基因突变和缺失将导致肿瘤发生、发展和转移,以及多发性错构瘤综合征(Cowden syndrome)等。
基于底物磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸,在PTEN的催化下,水解产生磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2),同时释放出游离磷酸根,进而与孔雀绿染料发生显色反应产生其峰值的变化(660nm波长),以此测算PTEN的活性。
人体hTERT基因甲基化检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途人体hTERT基因甲基化检测试剂是一种旨在通过化学方法使基因组中的所有胞嘧啶(CYTOSINE)转变成尿嘧啶(URACIL),而保留了所有甲基化的胞嘧啶,经过甲基化特异性PCR扩增,探测到人体人体端粒酶逆转录酶基因hTERT启动子CpG岛甲基化信息的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于人体人体端粒酶逆转录酶基因hTERT相关的表观遗传学研究。
产品即到即用,性能稳定,操作简便,转化保证。
技术背景在基因的启动子区域(promotor region)通常存在一些富含重复双核苷酸“CG”的区域,称为“CpG岛”(CpG island)。
在人类基因组内,存在有近3万个CpG岛。
这些CpG岛不仅是基因的一种标志,而且还参与基因表达的调控和影响染色质的结构,更是DNA甲基化的唯一位置。
CpG岛甲基化形态的扫描分析是基因表达和表观基因组学的主要课题。
人体端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase;hTERT),又称hTRT、hTCS1 和hEST2,是端粒酶的核心结构,即催化亚体(catalytic subunit)。
hTERT的功能性表达是端粒酶获得活性的前提。
hTERT可以激活端粒酶,使细胞获得永生化。
hTERT是端粒酶活性的限速决定成分,其mRNA表达水平与端粒酶活性之间具有密切的相关性。
hTERT是一单拷贝基因,定位于5q15.33,属于逆转录酶家族,具有进化上的保守性,序列总长约35kb,由16个外显子和15个内含子组成。
端粒酶特异性T-motif和7个同源保守序列的RT-motif分别位于不同的外显子上。
hTERTmRNA 还有7种不同的剪切转录本,分为缺失型与插入型两类。
一旦突变或甲基化,会造成细胞繁殖调控机制缺失,而致肿瘤或细胞衰老等。
产品内容缓冲液(Reagent A) 2 X 1.5 毫升变性液(Reagent B)250微升处理液(Reagent C)1毫升转化液(Reagent D)12毫升封隔液(Reagent E)3毫升净化液(Reagent F)20毫升萃取液(Reagent G)40毫升浓缩液(Reagent H)2毫升助沉液(Reagent I)20微升沉淀液(Reagent J)10毫升清理液(Reagent K)20毫升保存液(Reagent L)1毫升扩增液(Reagent M)900微升补充液(Reagent N)1毫升U引物F(Reagent O)20微升U引物R(Reagent P)20微升M引物F (Reagent Q)20微升M引物R(Reagent R)20微升针筒离心柱20套产品说明书1份保存方式保存MB处理液(Reagent C)、MB转化液(Reagent D)、MB助沉液(Reagent I)、MB扩增液(Reagent M)、MB补充液(Reagent N)、MB U引物F(Reagent O)、MB U引物R(Reagent P)、MB M引物F (Reagent Q)和MB M引物R(Reagent R)在-20℃冰箱里;MB净化液(Reagent F)和MB针筒离心柱保存在室温下;其余的保存在4℃冰箱里;MB处理液(Reagent C)和MB转化液(Reagent D)避免光照;有效保证6月用户自备1.5毫升离心管:用于样品操作的容器2.0毫升离心管:用于样品操作的容器恒温水槽:用于孵育反应物微型台式离心机:用于沉淀样品或去除杂质涡旋震荡仪:用于混匀反应物真空泵:用于去除样品中的液体成分针筒挤压塞:用于去除样品中的液体成分PCR仪:用于样品扩增PCR管或平板:用于PCR反应的容器测序试剂盒:用于测序前的产物处理实验步骤实验开始前,将MB处理液(Reagent C)和MB转化液(Reagent D)从-20℃冰箱中取出,置入室温下。
细胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞酪氨酸酶(tyrosinase)活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过酪氨酸酶反应系统中底物酪氨酸氧化后,产生多巴色素,呈现吸光峰值的变化,即采用比色法来测定细胞裂解悬液样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种人体和动物细胞,尤其是黑色素细胞和黑色素瘤细胞裂解悬液样品中酪氨酸酶的活性检测,以及抑制剂筛选。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景酪氨酸酶(tyrosinase;EC1.14.18.1)是一种单酚单加氧酶(monophenol monooxygenase),又称为单酚酶(monophenolase)或单酚二羟基苯丙氨酸:O2氧化还原酶(monophenol dihydroxyphenylalanin:O2 oxidoreductase),具有双功能的含铜糖蛋白,广泛存在于植物、酵母和动物组织中,其蛋白结构、大小、糖基化方式、激活特征等都不同。
人体酪氨酸酶是一个跨膜蛋白,而催化结构域在黑色素细胞(melanocyte)或色素细胞的黑色素器(melanosome)里。
酪氨酸酶通过催化L-酪氨酸(L-tyrosine)等的o-羟基化(o-hydroxylation)反应变成L-多巴(L-dopamine),进而氧化产生黑色素底物多巴醌(dopaquinone),从而由多巴色素(dopachrome)转化为黑色素(melanin)中的真黑素(eumelanin),以及其它色素,包括毛发和眼睛色素。
紫外线可以激活酪氨酸酶活性,严重时,会引起色素沉着(hyperpigmentation)。
酪氨酸酶基因突变将导致I型眼皮肤白化病(oculocutaneous albinism)。
酪氨酸酶抑制剂成为增白化妆品的重要元素。
基于底物酪氨酸,在酪氨酸酶的催化下,产生多巴色素,通过其吸光值的变化(475nm波长),来定量测定酪氨酸酶的活性。
NADH氧化酶(NOX可见分光光度法货号:BC0630规格:50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体25 mL×1瓶4℃保存试剂二液体5 mL×1瓶4℃保存试剂三液体0.5 mL×1支-20℃保存试剂四液体70 mL×1瓶4℃保存试剂五液体10 mL×1瓶4℃保存试剂六粉剂×2瓶-20℃保存溶液的配制:试剂六:临用前加入9 mL双蒸水,用不完的试剂-20℃分装保存。
产品说明:NOX(EC 1.6.99.3)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可在氧气存在下,直接将NADH氧化为NAD+。
该酶不仅参与NAD+的再生,而且与免疫反应密切相关。
NOX能够将NADH氧化为NAD+,NADH的氧化与2,6二氯酚靛蓝(DCPIP)的还原相偶联,蓝色的DCPIP被还原为无色的DCPIP,在600nm下测定蓝色DCPIP的还原速率计算出NADH氧化酶活性的大小。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:1.准确称取0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10µL试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2.将匀浆600g,4℃离心5min。
将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
3.将上清液转移至另一EP管中,即胞浆提取物,用于线粒体中泄露NOX活性测定。
4.沉淀即为线粒体,加入200µL试剂二和2µL试剂三,反复吹打充分混匀,用于NOX活性测定,并用于蛋白浓度测定。
线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号:BC3240规格:25T/12S、50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称/规格25T50T保存条件提取液液体20 mL×1瓶液体40 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶液体20 mL×2瓶4℃保存试剂二粉剂×1支粉剂×2支-20℃保存试剂三液体3 mL×1支液体5.5 mL×1瓶4℃保存溶液的配制:1、工作液的配制:临用前把试剂二转移到试剂一中混合溶解,用不完的试剂4℃可保存一周;产品说明:线粒体复合体Ⅲ(EC 1.10.2.2)又称CoQ-细胞色素C还原酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C,生成还原型细胞色素C。
与氧化型细胞色素C不同,还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收,因此550nm 光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0 mL提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、4 ℃ 600 g离心10min。
将上清液移至另一离心管中,4 ℃ 11000 g离心15min。
3、上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
4、在沉淀中加入200μL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体Ⅲ酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。
线粒体复合体Ⅳ活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0945规格:100T/96S产品内容:提取液:液体75mL×2瓶,4℃保存;试剂一:液体21mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1支,-20℃保存;试剂三:粉剂×1支,4℃保存;工作液的配制:临用前取试剂一、试剂二、试剂三各一支,将试剂二和试剂三依次转移到试剂一中混合溶解。
产品说明:线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素C的氧化,并最终把电子传递给氧生成水。
还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收,线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C,因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、复合体Ⅳ的提取:1称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1.0mL提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
24℃600g离心10min。
3将上清液移至另一离心管中,4℃11000g离心15min。
4上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。
5在沉淀中加入400uL提取液,超声波破碎(功率20%,超声5秒,间隔10秒,重复15次),用于复合体Ⅳ酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。
二、测定步骤:1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至550nm,蒸馏水调零。
2、样本测定(1)将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育15min;用不完的试剂4℃可保存一周;(2)在微量玻璃比色皿/96孔板中分别加入试剂名称测定管空白管样品(μL)10-蒸馏水(μL)-10工作液(μL)200200立即混匀,分别记录测定管和空白管550nm处初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,测定管的记为A1测定管,A2测定管,空白管的记为A1空白管,A2空白管。
Catalog No. RT0411-01产品简介2×SYBR Green Mix(With ROX)是使用染料法(SYBR GreenⅠ)进行实时荧光定量PCR扩增反应的预混体系,包括Hotstart Taq DNA Polymerase,Buffer,dNTPs,SYBR Green I荧光染料、Mg2+和ROX校正染料。
本品含有经化学修饰的全新高效的热启动酶Hotstart Taq DNA Polymerase,在常温下没有聚合酶活性,有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增,酶的激活须在95℃下孵育10 分钟。
主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。
本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合,使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。
所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差, 适用于以ROX作为校正染料的所有荧光定量PCR仪。
产品包装保存条件-20℃避光保存,尽量避免尽量避免反复冻融。
注意事项1 使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。
2 本产品中含有SYBR Green I 荧光染料和ROX 染料,保存本产品或配制PCR 反应液时应避免强光照射。
3 避免反复冻融本品,反复冻融可能使产品性能下降。
如果在短期内需要频繁使用,可在2-8℃保存。
使用方法以下举例为常规PCR 反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1.PCR反应体系:注:引物浓度以0.1-1.0 μM终浓度作为设定范围的参考。
扩增效率不高时,提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度; DNA模板的量以10-100 ng基因组DNA或1-10 ng cDNA为参照。
2. PCR反应程序:两步法PCR:步骤温度时间预变性95℃10 min变性95℃15 s退火/延伸60℃ 1 min融解曲线分析95℃15 s60℃ 1 min95℃15 s60℃15 s注意:1)本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。
一步法实时RTPCR 检测试剂盒(SYBR 一步法荧光定量PCR 试剂盒)(目录号HS0614)产品包装保存条件-20℃避光保存。
产品简介本产品是一步法Real-Time qRT-PCR 专用试剂盒。
所含的SYBR Green I 荧光染料可以与所有的双链DNA 相结合,使该产品可以用于多种不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。
使用本产品进行Real Time qRT-PCR 反应,逆转录和定量PCR 在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,避免了污染的同时提高了实验效率。
本试剂盒中包含全新高效逆转录酶,具有与RNA 高亲和性的特点,能通读GC 含量高、二级结构复杂的RNA 模板;所包含的经化学修饰的热启动DNA 聚合酶最大限度的减少PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物的产生,极大提高了荧光定量PCR 反应的精确性;所包含的缓冲系统使以上两种酶同时发挥最大的功效,提高效率。
所含的ROX 染料调节PCR 反应过程中管与管之间的加样误差,适用于以ROX 作为校正染料的所有荧光定量PCR 仪。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 反转录和PCR在一个反应管中完成,方便快捷,最大限度的避免污染。
2. 与RNA具有高亲和性,能通读GC含量高、二级结构复杂的RNA模板。
3. 热启动酶有效抑制非特异性扩增,极大提高了荧光定量PCR反应的精确性。
产品应用基因表达分析;拷贝数分析。
使用方法1. 将RNA 模板、引物、2×UltraSYBR One Step RT-qPCR Buffe(r With ROX)、SuperEnzyme Mix 和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2. PCR 反应体系:•注意:通常引物浓度以0.2 uM可以得到较好结果,可以终浓度0.1 ~ 0.5 uM作为设定范围的参考。
过氧化物酶(POD)活性试剂盒说明书可见分光光度法注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
货号:UPLC-MS-4538规格:50T/48S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体40mL×1瓶4℃保存试剂二液体0.5mL×1瓶4℃保存试剂三液体10mL×1瓶4℃保存溶液的配制:1、试剂二:液体置于试剂瓶内EP管中,使用前需先离心。
取0.22mL试剂二加入3.33mL试剂一混合备用(约27T),现配现用,也可根据样本量按比例配制。
产品说明:POD(EC1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、细菌、细胞或组织样本的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
α-淀粉酶(α-AL)活性检测试剂盒(碘-淀粉比色法)说明书微量法UPLC-MS-6004100T/48S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:临用前加入6.25mL试剂三,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存8周;2、标准品:10mg淀粉标准品。
临用前加10mL试剂三,置沸水浴中振荡溶解,配成1mg/mL淀粉标准液,2-8℃保存四周。
淀粉酶负责水解淀粉,包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶。
α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等,碘可以与未被水解的淀粉结合,生成在570nm下有特征吸收峰的复合物,其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。
α-AL耐热,但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。
因此粗酶液经过70℃钝化15min,就只有α-AL能够催化淀粉水解。
Unhydrolyzed Starch+Iodine Complex(570nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
酶标仪/可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、组织:称取约0.1g样本,加1mL蒸馏水匀浆;匀浆后在室温下放置提取15min,每隔5min振荡1次,使其充分提取;6000g,室温离心10min,吸取上清液即为淀粉酶原液。
2、液体:直接检测。
(若有浑浊则离心后进行测定)二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到570nm,分光光度计蒸馏水调零。