端粒酶活性的检测与胃癌预后关系的研究

幽门螺杆菌感染、端粒酶表达与胃癌相关性分析目的：探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与端粒酶表达在胃癌发生、发展过程中的关系及临床意义。

方法：应用端粒酶反复扩增法(TRAP)进行端粒酶活性检测。

应用快速尿素酶试验和病理组织学Giemsa染色法检测Hp，两种方法均阳性即可诊断Hp感染。

结果：胃癌组织、萎缩性胃炎、浅表性胃炎中，Hp感染阳性率分别为66.6%、43.3%、35.0%，差异无显著性(P>0.05)；而端粒酶表达阳性率分别为89.5%、36.6%、10.0%，差异有显著性(P＜0.05)。

胃癌组Hp阳性者发生端粒酶阳性的危险性是Hp阴性者的6倍，差异有显著性(P＜0.01)；萎缩性胃炎组OR=0.3，差异无显著性(P>0.05)；浅表性胃炎组OR=0，差异有显著性(P＜0.05)。

结论：Hp与端粒酶阳性检出率随病变加重而增加，Hp感染在诱导端粒酶活性、导致癌变中可能起着重要作用。

标签：幽门螺杆菌；端粒酶；胃癌大量的流行病学和病理组织学资料表明，幽门螺杆菌(Hp)感染在胃癌的形成过程中具有重要作用。

以往的研究证明，Hp感染促进胃黏膜上皮细胞增生，但对其促进胞增殖机制的阐明尚在研究之中[1]。

近年来国内外有资料[2-3]表明恶性肿瘤细胞端粒酶活性阳性率为85%～90%，这说明端粒酶激活与恶性肿瘤发生也密切相关。

为了进一步探讨Hp感染、端粒酶活性与胃黏膜病变的相关性，我们检测了人胃癌、萎缩性胃炎及浅表性胃炎胃黏膜标本端粒酶活性，并对酶活性及粘膜病变与Hp感染的相关性进行了分析。

1材料与方法1.1组织标本232例标本分别取自我院胃癌、萎缩性胃炎及浅表性胃炎患者，所有病例均经病理组织学证实。

胃癌132例按日本胃癌分类标准：早期胃癌8例，中晚期胃癌124例；有淋巴结转移44例，脏器转移20例；男112例，女20例，平均年龄57.2岁。

萎缩性胃炎60例，男34例，女26例，平均年龄57岁。

浅表性胃炎40例，男4例，女36例，平均年龄34.2岁。

第18卷第1期2018年3月应用技术学报JOURNAL OF TECHNOLOGYV0I.I8N0.IMar. 2018文章编号 $096-3424(2018)01-0001-13D O I：10. 3969/j.issn.2096-3424. 2018. 01. 001端粒酶活性检测研究进展郑婷婷，冯恩铎，田阳(华东师范大学化学与分子工程学院，上海200241)摘要：端粒酶是细胞内常见的一种逆转录酶，其功能在于维持细胞内染色体末端端粒的长度。

端粒酶活性的异常升高通常与肿瘤细胞的产生以及生长相关。

端粒酶的活性已经成为了癌症诊疗领域中非常重要的生物标志物。

因此，对于端粒酶活性准确且高效的定量分析检测方案是当今分析科学，临床医学等相关学科领域研究的重点之一。

随着分析测试技术的发展，提出了一系列具有超高性能的端粒酶活性检测方案。

总结了近5年来端粒酶活性检测方案的发展全貌并且预估了端粒酶活性检测的未来发展方向。

关键词：端粒酶；活性检测；电化学分析；荧光分析；拉曼分析；在体分析；研究进展中图分类号：O 657 文献标志码：AProgress in the Analysis of Telomerase ActivityZHENG Tingling，FENGEnduo，TIAN Yang(School of C hem istry and M olecular E ngineering，East China N orm al U n iv e rs ity，Shanghai 200241，China)Abstract：Telomerase is a common type of reverse transcriptase in ce lls，w hich plays an im p orta m aintaining the length of telom eres at the ends of chromosomes.There is always a tig h t relationshipbetween the g ro w th of tu m o r cells and the high expression of telomerase a c tiv ity.Telomerase a c tiv ity hasbeen a very im p o rta n t biom arker in the fie ld of cancer diagnosis and trea tm en t.e fficient quantitative analysis of telomerase a c tiv ity is one of the key points in the fie ld of analyticalscience，clinical medicine and other related disciplines.A series of novel telomerase a c tiv ity detectionmethods w ith very good analytical performance have been proposed w ith the development of testing technology.T h is article summarizes telomerase a c tiv ity detection scheme in the recent five yearsand we also forecast the fu tu re developm ent direction of telomerase a c tiv ity detection.Key words：telom erase；a c tiv ity detection；electrochemical analysis;fluorescence analysis;Ramananalysis；in-vivo analysis；research progress端粒是一段具有重复序列（T T A G G G)的D N A裂过程中，染色体的复制会导致端粒的不断缩短[3]。

端粒酶活性对SGC7901胃癌细胞活性的影响作者：盖磊宁显忠来源：《中国实用医药》2013年第09期【摘要】目的探讨端粒酶活性对SGC7901胃癌细胞活力的影响。

方法 SGC7901细胞分组培养，其中对照组不施加处理因素，其余各组给予端粒酶抑制剂叠氮脱氧胸苷（AZT）即AZT-4、AZT-8及AZT-16组，分别给予AZT 4、8及16 mmol/L，24、48及72 h后以甲基噻唑基四唑（MTT）法检测各组细胞活力，根据MTT实验结果检测AZT抑制SGC7901细胞活力最明显时各组细胞端粒酶活性。

结果 AZT可抑制SGC7901细胞活力，呈时间依赖性及剂量依赖性。

72 h后AZT-4、AZT-8及AZT-16组端粒酶活性下调率分别为（28.1±4.3）%、（45.4±3.6）%、（63.7±5.1）%，呈明显的剂量依赖性。

结论端粒酶活性增强是SGC7901胃癌细胞永生化的重要机制之一。

【关键词】端粒酶；SGC7901胃癌细胞；细胞活力胃癌严重威胁着人类的健康，但发病机制不清，仍无有效治疗手段。

端粒-端粒酶体系在肿瘤的发生发展中发挥重要作用，端粒酶的激活导致了端粒的延长，而端粒的延长则促进了肿瘤的永生化，但仍有10%的肿瘤细胞端粒酶无活性增高表现[1]。

叠氮脱氧胸苷（3-azido-deoxythymidine，AZT）可抑制端粒酶活性，进而阻止端粒的延长，从而抑制肿瘤的永生化。

因此，本实验拟利用AZT探讨端粒酶活性对胃癌细胞株SGC7901存活率的影响，探讨端粒-端粒酶体系在SGC7901细胞增殖分化中的作用。

1 材料与方法1.1 材料及仪器 SGC7901胃癌细胞株（中科院上海细胞库），DMEM高糖培养基及胎牛血清（Gibco公司），AZT（sigma公司），甲基噻唑基四唑（MTT，南京建成生物工程研究所），TRAP-ELISA端粒酶活性试剂盒（Roche公司），酶标仪（北京普郎克公司）。

端粒酶活性的检测与胃癌预后关系的研究摘要】目的本研究检测胃癌组织中端粒酶活性蛋白的表达，旨在探索端粒酶表达与胃癌的生物学行为和患者预后的关系。

方法应用TRAP-PCR银染法检测40例胃癌组织和15例正常胃组织中端粒酶活性。

同时收集每一例胃癌患者的临床病理资料，并将上述标记物与患者的临床病理参数（年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位、病理类型、组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况、pTNM分期）进行相关性分析。

结果端粒酶在正常胃粘膜的表达为13.3%(2/15)，胃癌组织中端粒酶阳性表达率为77.5%（31/40）, 差异有显著性P＜0.01；端粒酶的表达与肿瘤浸润深度、pTNM分期及有淋巴结转移呈正相关P＜0.01。

Logistic多因素回归分析示：端粒酶活性是与肿瘤浸润深度相关的危险因素（P﹤0.05）。

结论胃癌组织中端粒酶活性与胃癌的浸润转移密切相关，对它的检测有助于对胃癌患者的转移和预后做出更准确地判断，更好的指导胃癌的治疗。

【关键词】胃癌端粒酶活性临床病理参数预后转移胃癌是严重危害人类健康最常见的恶性肿瘤之一，胃癌发病率在全球范围内仅次于肺癌居第二位，胃癌在亚洲地区更为突出，在我国男性胃癌发病率仅次于肺癌，女性胃癌为第四位高发癌[1]。

侵袭与转移是胃癌的重要生物学行为之一，其全过程包括：癌基因的激活[2]；抑癌基因失活[3]；端粒酶(telomerase)活化-细胞永生化；细胞转移相关基因及凋亡抑制基因的失调等。

这些基因和蛋白表达的增加或降低均为临床检测浸润转移提供了分子标记物。

近年来分子生物学研究的进展极大帮助研究人员从分子生物学水平认识恶性肿瘤的发生与演进。

本课题采用TRAP-PCR银染法检测胃癌组织中端粒酶活性,探讨其与病人临床病理学特征的关系，旨在从分子水平分析胃癌转移相关因素，并评价上述生物学指标判断胃癌预后的价值。

1 资料与方法1.1病例及手术标本收集收集我院胃肠外科2010年3月至2010年10月之间的40例行胃癌根治术的新鲜瘤体组织标本，所有标本修剪后用生理盐水清洗，冻存在-80℃冰箱中做长期保存。

hTERTmRNA在胃癌中表达及其与预后的关系目的了解人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA在胃癌中的表达情况及其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性。

方法以52例胃癌患者为研究对象，应用RT-PCR技术检测hTERT mRNA在胃原发癌、癌旁正常胃黏膜及淋巴结转移癌中的表达，并对所有病例进行随访，分析其与胃癌侵袭、转移和预后的相关性。

结果hTERT mRNA在胃原发癌和淋巴结转移癌中表达明显增高，而在癌旁正常胃黏膜中表达极低或不表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。

hTERT mRNA表达在浸润癌，癌浸透浆膜面，浆膜侵犯面积>20 cm2、淋巴结分期（7th TNM分期）晚者（N3）中明显增高（P＜0.01）。

hTERT mRNA高表达组患者5年生存率为17.41%，低表达组为60.04%，差异有统计学意义（χ2=14.20，P=0.0002）。

结论胃癌原发灶中hTERT mRNA表达与其恶性生物学行为有关，是反映其侵袭、转移和预后较好的分子指标。

标签：胃癌；人端粒酶逆转录酶；侵袭；转移；预后胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，就诊患者中约90%为进展期胃癌，极易发生侵袭、转移，预后差，严重威胁着人们的身体健康。

探讨胃癌侵袭转移的分子机制，寻找与其相关的生物学标志物是当今肿瘤学研究的热点之一[1]。

端粒酶是一种与细胞永生化和肿瘤形成相关的核糖核蛋白酶，它能够以细胞内部的一段RNA为模板合成端粒末端重复序列而延长端粒，从而使细胞永生化。

人端粒酶逆转录酶（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）是人类端粒酶的催化亚单位，是端粒酶活性高低的限速酶。

hTERT的表达与端粒酶活性呈正相关，可以反映端粒酶活性的高低[2-4]。

研究已证实，端粒、hTERT与正常细胞生长调控及恶性肿瘤之间密切相关。

目前有关hTERT在胃癌中的研究多集中在胃癌发生的始动阶段，hTERT高表达可促进胃癌的发生[5]。

端粒酶活性检测技术在癌症诊断中的应用研究癌症是一种极具危害性的疾病，其致死率居高不下。

尤其是对于早期诊断而言，癌症的诊断难度较大，而且常常容易出现误诊、漏诊等现象。

针对这一问题，现代医学领域逐渐发展出了一系列高科技、高精度的检测技术，其中端粒酶活性检测技术就是一种极具潜力且备受关注的检测技术。

在人体细胞内，端粒簇是一种不断缩短的DNA序列，同时，端粒酶是一种具有有限的催化活性的酶，主要作用是在DNA细胞分裂时帮助维持端粒簇的长度。

在正常情况下，端粒簇的长度每次细胞分裂时会减短一定长度，随后变得越来越短，最终当端粒簇长度缩短到一定程度时，细胞便进入了衰老阶段，发生细胞凋亡。

然而，在某些细胞异常状态下，端粒簇的长度会被一些因素提前缩短，这些因素可能涉及DNA损伤、有害物质、环境污染等等。

当端粒簇长度处于比较短的情况下，细胞将自我复制并不断增殖，容易形成恶性肿瘤等癌症。

由此引出端粒酶活性检测技术。

这种检测技术的基本原理是利用端粒酶的催化活性，根据细胞内端粒簇的长度进行判断。

在测试中，医生会提取患者细胞的核DNA，随后让其与端粒酶反应，在帮助核DNA复制后，检查端粒簇长度缩短的情况。

如果检测结果显示端粒簇长度较短，则说明该细胞具有癌症的潜在风险。

如果检测结果显示端粒簇长度较长，则说明该细胞的癌症风险比较低。

可以通过多次检测，介入治疗等方法来进行病情监测，及时发现和治疗癌症。

对于癌症患者而言，端粒酶活性检测技术具有很高的应用价值。

该检测技术可以用于各种不同类型的癌症的诊断，包括肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌等常见癌症类型。

此外，端粒酶活性检测技术对于早期癌症的诊断也有较高的精度和敏感性，可以及早发现病情，为治疗提供更加准确的依据。

同时，端粒酶活性检测技术还可以引导医生制定更加个性化的治疗方案，对于治疗效果的评估也有一定的作用。

在临床实践中，端粒酶活性检测技术的应用也在不断得到推广。

当前，国内外包括生物制药企业在内的许多机构，都将端粒酶活性检测技术作为主要诊断手段之一，并在相应的诊疗流程中进行了规范化的操作和标准化流程控制。

端粒酶在胃癌中的作用研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【关键词】胃癌；端粒酶端粒酶(telomerase) 是一种蛋白质与RNA组成的核糖核蛋白，其作用是保证真核细胞染色体线性DNA的复制得以完全。

端粒酶在正常体细胞中处于失活状态。

其活化是细胞永生化或恶化的重要标志［1］。

端粒酶基因激活以后，肿瘤细胞中端粒的长度才能相对稳定，使细胞获得无限增殖的能力。

因此，人们希望通过对端粒与端粒酶的深入研究，揭示肿瘤的发生、发展机制，并获得一些重要的治疗靶点［2］。

现将近几年来端粒及端粒酶在胃癌发生中的作用及其临床意义综述如下。

端粒及端粒酶的结构与功能1.端粒早在上世纪30年代Muller等就发现染色体末端存在一种维持染色体稳定和完整的特殊结构—端粒［1］。

近年研究表明，端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，由重复DNA序列及相关蛋白质组成。

端粒DNA是由5 TFAGGG3序列片段重复构成，重复次数高达2000次左右。

端粒相关蛋白最初是Chong于1995年发现的，命名为端粒重复序列结合因子l(TRF1)［3］，近几年，相继发现了TRF2、TANK1、TANK2、TIN2、Pinxl、POTI等10余种端粒结合蛋白。

它们对维持端粒的功能具有重要作用［4］。

人端粒的重要功能是保持染色体的完整性，防止染色体DNA降解、末端融合、缺失和非常规重组。

端粒长度随着有丝分裂的进行而逐渐缩短，当端粒缩短到一定程度，不能维护染色体的稳定时，则导致细胞凋亡及衰老。

端粒酶的激活可维持端粒RNA的稳定，进而促进肿瘤的发生；另外还存在一些替代途径可维持端粒的稳定。

在大鼠试验中，由于端粒酶的缺失使端粒极度缩短，导致染色体的不稳定，不仅可引起细胞的凋亡，还导致大鼠的过早衰老。

因此认为端粒在维持细胞染色体稳定、控制细胞寿命方面起着重要作用［5］。

但关于端粒的具体作用机制还需进一步研究。

医学论文-端粒、端粒酶与癌症【摘要】端粒和端粒酶是近年来生命科学研究的热点。

细胞分裂过程中,因其染色体末端(端粒)DNA不能完全复制而缩短,使细胞逐渐失去增殖能力而衰老,端粒酶可延长染色体末端DNA,端粒酶的活化使细胞获得无限增殖能力。

在永生细胞系及绝大多数的恶性肿瘤(85% ) 细胞中有活化的端粒酶。

本文综述了端粒与端粒酶的结构与功能,端粒酶在端粒合成与稳定中的作用,介绍了端粒酶活性的测定方法,并讨论了通过抑制端粒酶活性来治疗癌症的可能性。

【关键词】端粒;端粒酶;癌症端粒(telomere) 和端粒酶(telom erase) 是近年来生命科学研究的热点之一,正常细胞在分裂过程中,因其染色体末端(端粒)DNA 不能完全复制而缩短,细胞经多次分裂后,端粒缩短达到危机点(crisis),促发某一信号,使细胞逐渐失去增殖能力而衰老死亡。

端粒酶可延长染色体末端DNA,端粒酶的活化使细胞获得无限增殖能力。

基于此,有少数细胞(如永生细胞系) 及绝大多数恶性肿瘤细胞(85%) 可逃逸这一危机点。

因为在这些细胞中含有活化的端粒酶系统,从而使细胞获得无限增殖能力,使之永生化和恶变,因此,对端粒和端粒酶系统的研究,有助于阐明细胞衰老和恶变机制,对肿瘤的诊断、治疗以及抗衰老都具有重要的理论和实际意义。

一般认为,癌症是由多种突变的积累,破坏了细胞正常的生长调控而引起的,除了一些明确的病因外,有许多实验结果支持这样一种假说,即端粒酶的激活对许多恶性肿瘤细胞的形成是必需的,且肿瘤细胞与端粒酶活动增加之间存在相互激发的关系,1,。

这种显著的相关性提示: 在肿瘤细胞恶性状态的进展和维持中,端粒酶可能起到关键性的作用。

本文就端粒与端粒酶研究的最新进展作一综述,具体讨论了端粒的结构与功能,端粒酶在端粒合成与稳定中的作用,介绍了端粒酶活性的测定方法,细胞永生与端粒酶激活的关系,提出了通过抑制端粒酶活性来治疗癌症的可能性。

1 端粒(telomere)1.1 端粒(telomere) 的概念端粒是指真核细胞线性染色体末端的蛋白质-DNA特殊结构,即染色体末端DNA 序列的多个重复,其作用是保护和稳定染色体的末端,它由2,20kb 串联的短片段重复序列(TTAGGG) n 及一些结合蛋白组成。