国际检验医学杂志２０１５年７月第３６卷第１３期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｊｕｌｙ ２０１５，Ｖｏ１．３６，Ｎｏ．１３
・临床研究・
肛周尖锐湿疣患者病变组织ＨＰＶ感染研究
张桂花
（广东省惠州市第六人民医院检验科，广东惠州５１６２１１）
摘要：目的探讨肛周尖锐湿疣病变患者肛周病变组织不同基因型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染情况及临床意义。方法 收
集该院２０１２年９月至２Ｏｌ４年９月诊治的９Ｏ例肛周尖锐湿疣患者肛周病变组织石蜡切片标本，分析ＨＰＶ ＤＮＡ分型检测结果。
结果 ９Ｏ例标本中，ＨＰＶ感染率为６８．８９ ，以ＨＰＶ６、ＨＰＶｌｌ感染为主，感染率分别为２３．３３％、１８．８９％，各型别ＨＰＶ感染率 比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。ＨＰＶ感染组和ＨＰＶ未感染组切片标本挖空细胞在单个视野细胞中的百分比分别为７３ 、
５９ ，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论肛周尖锐湿疣病变与ＨＰＶ感染有关，病变组织以ＨＰＶ６、ＨＰｖ１１感染为主。
关键词：肛周尖锐湿疣； 人乳头瘤病毒； 感染
ＤｏＩ：１Ｏ．３９６９／Ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１５．１３．０６３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２Ｏ１５）１３—１９４３—０２
尖锐湿疣（ｃＡ）是常见性传播疾病之一，且发病率呈上升 趋势＿１＿３Ⅲ。ＣＡ由人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染所致，虽经治疗及
干预，可实现临床治愈，但易复发，复发率约为３ｏ ～ ４Ｏ ［４。］。ＨＰＶ是一类特异感染人类黏膜、上皮组织的共价双
链环状ＤＮＡ病毒，包括低危型和高危型两大类。现已发现 ２００多个ＨＰＶ型别及变异体，并已鉴定出百余种ｌ８］。不同的
ＨＰＶ亚型具有不同的致病能力，与ＣＡ密切相关的有６、１１
型 ］。因此，ＨＰＶ分型检测可协助ＣＡ患者的诊治。本研究
分析了肛周ＣＡ患者病变组织石蜡标本ＨＰＶ检测结果，旨在
为肛周ＣＡ的预防和诊治提供依据。 １资料与方法
PCR法检测HPV
引言
PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，可以在短时间内扩增DNA分子。本文将介绍PCR法在检测人状瘤病毒（HPV）中的应用。
HPV简介
HPV是一类寄生病毒，可以感染人类的皮肤和黏膜，特别是性传播器官，其感染与许多疾病如人类状瘤、宫颈癌等密切相关。因此，及早检测和诊断HPV感染对预防和治疗相关疾病具有重要意义。
PCR法在检测HPV中的应用
PCR法可以通过扩增和检测HPV的DNA片段来确认HPV感染。以下是PCR法检测HPV的步骤：
1. 样本采集：从患者的皮肤或黏膜中采集病毒样本，例如宫颈脱落细胞样本。 2. DNA提取：使用化学方法将样本中的DNA提取出来，以便后续的PCR扩增。
3. PCR扩增：利用特定的引物和酶，将HPV DNA片段扩增为大量复制物。
4. 凝胶电泳：将PCR产物与DNA标准分子进行凝胶电泳分析，以确认是否存在HPV DNA。
PCR法检测HPV的疗效和限制
PCR法具有以下优点：
- 灵敏度高：可以检测到极低浓度的HPV DNA，即使在感染早期也能够准确诊断。
- 特异性强：由于引物的特异性，PCR法可以准确区分不同类型的HPV DNA。
- 结果快速：PCR法能够在几个小时内获得检测结果。
然而，PCR法也存在一些限制：
- 假阳性结果：由于实验室操作和污染等因素的影响，有时可能出现假阳性结果。 - 无法区分活动感染和残留病毒：PCR法只能检测到HPV
DNA的存在，无法确定感染是否处于活跃状态。
- 资源需求高：PCR法需要专业实验室和设备支持，对设备、试剂等资源有一定要求。
结论
PCR法是一种常用、灵敏和可靠的方法来检测HPV感染。该方法在早期诊断、预防和治疗相关疾病中具有重要作用。然而，为了提高检测准确性，减少假阳性结果的发生，操作者应严格控制实验条件，并采取相应的对照试验和质量控制措施。
硕世hpv21分型说明书
摘要：
硕世HPV21分型检测试剂盒说明书
正文：
硕世HPV21分型检测试剂盒是一种用于检测女性宫颈脱落细胞样本中的HPV病毒（人乳头瘤病毒）的检测产品。该产品适用于临床实验室、卫生防疫部门等场所进行HPV病毒的检测。
产品由试剂盒和仪器设备两部分组成，操作步骤包括样本采集、试剂准备、样本处理和酶标检测。首先，使用样本收集器获取女性宫颈脱落细胞样本，然后将样本放入病毒保存液中，震荡混匀后静置5分钟。接着，吸取上层液体并放入离心机离心5分钟，吸取上清液后弃去样本。然后将酶标抗体、阴性对照和阳性对照分别加入相应的孔中，再将样本处理液加入样本孔中，轻轻摇匀后放入37℃恒温箱中静置1小时。最后，用洗板机将孔内液体洗去，放入酶标仪中进行检测，并记录检测结果。
结果判读分为阴性和阳性。阴性表示未感染HPV病毒，阳性表示感染了HPV病毒，需进一步进行分型检测。
在操作过程中，应严格遵循操作规程，避免样本污染或试剂失效。试剂盒应存放在2-8℃冰箱中，酶标抗体有效期为12个月。
HPV临床常用检测方法
由于HPV不能在体外细胞培养,故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断与分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹与PCR等,其中以PCR方法的敏感性最高,就是目前应用最多
感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,就是进行HPV检测的主要内容。目前主要就是通过应用分子生物学方法进行HPV DNA的检测。
1、现有的HPV实验室主要检测手段:
① 聚合酶链反应(PCR, Polymerase Chain Reaction):扩增位于两段已知序列之间的DNA片断的方法。该法有较高的敏感度,可进行HPV分型,缺点就是对实验室环境要求较高,容易发生样本间的交叉污染,从而导致假阳性率高。
② 核酸杂交检测
有较好的特异性与敏感度,还可以进行HPV DNA的分型,各种核酸杂交检测方法有一定的优缺点。
A核酸印迹原位杂交
适用于HPV分型与HPV DNA分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。
B斑点印迹
其敏感度与特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射性污染,就是环保所不能轻视的问题。
C原位杂交(in situ hybridization,一种核酸杂交技术,可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位,检测重组体DNA) 通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。
D杂交捕获法(Hybrid Capture)
杂交捕获试验就是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链,DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体,特异性抗体将RNA-DNA杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA-DNA杂合体的含量。能检测13种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。
