针刺留针与否对大鼠脑缺血再灌注后白细胞浸润的影响

2012Vol.13No.2脑缺血再灌注损伤是指急性缺血后恢复血液灌流，既可挽救濒临梗死的脑组织，又可加重细胞损伤的现象。

脑缺血再灌注后，血液中的白细胞在细胞黏附因子的介导下与血管内皮细胞黏附、外渗，引起一系列炎症反应，可导致神经细胞进一步损害。

针刺作为一种传统的医疗手段，在脑血管疾病中针刺留针与否对大鼠脑缺血再灌注后白细胞浸润的影响杨晶1，张世渊2，张天生3，韩润霞1（1.山西中医学院，山西太原030024；2.山西省人民医院，山西太原030012；3.山西省针灸研究所，山西太原030006）摘要目的：研究针刺留针与否对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中白细胞浸润及神经组织缺血程度的影响。

方法：40只SD 大鼠，随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺留针组及针刺不留针组。

针刺留针组在造模后2h 、24h 针刺三阴交、内关、人中，留针30min ；针刺不留针组针刺时间、穴位与针刺留针组相同，针刺后即起针。

造模48h 后，取脑固定后行HE 染色，比较各组大鼠浸润白细胞计数和神经组织缺血程度。

结果：针刺留针组与针刺不留针组浸润白细胞数均低于模型组，差异有统计学意义（P <0.05）；神经组织缺血程度较模型组轻，差异无统计学意义（P ＞0.05）。

针刺留针组与针刺不留针组脑组织中浸润白细胞数及神经组织缺血程度比较差异无统计学意义（P >0.05）。

结论：针刺能明显减少脑缺血坏死周边区的白细胞浸润，减轻神经细胞缺血程度。

关键词针刺；留针；脑缺血再灌注；白细胞中图分类号：R285.2文献标识码：A文章编号：1671-0258（2012）02-0020-03［基金项目］山西省青年基金（20100210383）［作者简介］杨晶，女，在读硕士，从事针刺效应的基础研究［通讯作者］张世渊，男，主任医师，从事神经外科和针灸与推拿工作［收稿日期］2012-01-19蛋白质和糖原等的合成，同时也可能是通过刺激局部心肌组织产生各种各样的神经体液因子来间接刺激心肌细胞内蛋白质的合成，最后导致心肌细胞的肥大［7-8］。

目前临床上用于治疗心肌肥厚的药物主要有血管紧张素转化酶抑制剂、血管紧张素受体拮抗剂和钙离子通道阻滞剂，但皆因存在不同程度的副作用而使其临床应用受到一定限制。

心肌肥厚是一个长期的过程，因此寻找一些疗效好而毒副作用低的药物显得十分重要。

本课题组在前期研究证实无患子皂苷具有显著降压作用的基础上，通过腹主动脉缩窄术复制压力超负荷模型大鼠，诱发大鼠出现左心室肥厚，本实验结果显示模型大鼠左心室重量、左心室重量指数、SBP 、LVSP 和LVEDP 显著增高，说明模型复制成功，而无患子皂苷可以显著抑制压力超负荷所导致的左心室肥厚，同时降低模型大鼠SBP 、LVSP 和LVEDP ，改善血流动力学。

因此，证明无患子皂苷对压力超负荷所诱发的心肌肥厚模型大鼠有较好的防治作用，但其逆转心肌肥厚的作用机制仍需进一步深入探讨，以期为其临床用于治疗心肌肥厚提供依据。

参考文献［1］王维胜，龙子江，张玲，等.无患子皂苷对肾性高血压大鼠血压及左心室血流动力学的影响［J ］.现代中医药，2007，27（3）：63-64.［2］龙子江，陈明，王秋立，等.无患子皂苷对大鼠动脉血压影响的实验研究［J ］.中国实验方剂学杂志，2009，15（6）：53-54.［3］卞海，龙子江，陈明，等.无患子皂苷对原发性高血压大鼠的影响［J ］.中成药，2009，31（3）：367-368.［4］李仪奎.中药药理实验方法学［M ］．上海：上海科学技术出版社，2006：307.［5］蔡辉，张群燕，赵智明，等.压力负荷增加大鼠左心室重构模型的建立［J ］.医学研究生学报，2010，23（2）：150-151.［6］严丽，梁黔生，杨光田.丹参酮HA 磺酸钠盐抑制腹主动脉缩窄高血压大鼠的心肌肥厚［J ］.中华高血压杂志，2009，17（2）：119-120.［7］郭秋红，赵淑明，张一昕，等.葶苈生脉方对慢性心力衰竭大鼠血流动力学的影响［J ］.河北中医药学报，2009，24（2）：5-7.［8］张伟，张连峰.高血压心室肥厚机制的研究进展［J ］.中国比较医学杂志，2009，19（9）：63-66.实验中医药学202012年第13卷第2期的疗效得到了肯定［1-2］。

本文通过观察局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中白细胞浸润及神经组织损伤程度，比较针刺留针与否对脑缺血再灌注大鼠保护程度的差异。

1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物健康SD大鼠40只，雄性，体重250～300g，由山西医科大学动物实验研究中心提供。

1.1.2实验仪器LEICA-PM-2145石蜡切片机（德国）；OLYMPUS光学显微镜（日本）；不锈钢毫针（苏州华佗牌针灸针）。

1.2实验方法1.2.1分组大鼠按体重分层，随机分为5组，正常组、假手术组、模型组、针刺留针组和针刺不留针组，每组各8只。

其中，实验中死亡脱失的动物不包括在内，动物造模后不符合模型判定标准的亦不包括在内。

1.2.2模型制备参照Zealonga报道的线栓法建立MCAO再灌注模型［3］。

40只SD雄性大鼠，术前12h禁食，以10％水合氯醛（0.3mL/100g）腹腔注射麻醉成功后，将大鼠仰卧在手术台上，在颈部中间稍偏0.5cm切口，小心分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），不分离结扎翼腭动脉（PPA），结扎CCA、ECA，绕ICA穿线备用，于CCA分叉处切口将长6cm的鱼线插入，沿ICA至大脑中动脉（MCA）和大脑前动脉（ACA）根部之间，阻断MCA血流来源（此时可遇轻微阻力），在ICA 根部扎紧栓线，缝合皮肤，外留栓线1cm。

在栓线2 h时，提拉鱼线至有阻力时止（此时鱼线已退至颈总动脉切口处，MCA血供恢复）。

动物清醒后，选取符合评分标准的动物。

术后动物注意预防感染、保暖和单笼饲养。

假手术组不插入鱼线，余同模型组。

模型组造模后不针刺，针刺留针组与不留针组造模后针刺。

1.2.3试验阳性大鼠选择按zealonga5分制标准评分：0分，无神经缺损症状；1分，不能伸展对侧前爪；2分，行走时向偏瘫侧转圈；3分，向偏瘫侧倾倒；4分，不能自发行走，意识丧失。

其中，0分及4分者被剔除。

1.2.4针刺治疗方法针刺治疗组大鼠分别于造模后2h、24h针刺，选取“人中”、“内关”、“三阴交”进行治疗，取穴标准及针刺深度参照《实验针灸学》中相关标准而定［4］。

内关取穴在前肢内侧，离腕关节约3m左右的尺桡骨缝间，直刺1mm，采用捻转提插结合泻法，施术1min。

人中穴在唇裂正中，鼻尖下1mm处，向上斜刺1mm，采用雀啄法，至眼球湿润或流泪为度。

三阴交取穴在后肢内踝尖直上10mm，直刺5mm，用提插补法，使同侧下肢抽动3次为度。

针刺留针组在针刺行针后留针30min，针刺不留针组在针刺行针后即迅速起针。

正常组、假手术组和模型组动物只捆绑固定，不针刺。

1.2.5细胞计数造模后48h各组大鼠给予0.3 mL/100g腹腔注射10％水合氯醛麻醉，断头取脑，固定、脱水、透明、包埋，脑组织常规切片、HE染色。

每张切片10×20倍显微镜下随机选取缺血区内的5个视野，进行白细胞计数，并且观察该区域神经组织缺血损伤的程度。

1.3统计学方法实验数据应用统计软件SPSS13.0处理，以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用多因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验法。

取P=0.05作为检验水准，以P<0.05作为差异有统计学意义的标准。

2结果各组大鼠浸润白细胞数，结果见表1。

由表1可以看出，正常组、假手术组均未见白细胞浸润及神经细胞损伤。

针刺留针组与不留针组白细胞浸润水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。

模型组浸润白细胞数升高，其浸润主要集中在缺血梗死灶的周围。

两组针刺组浸润白细胞数均低于模型组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论缺血性脑血管病是目前严重危害人类健康与生命安全的主要疾病之一，其发病率、病死率、致残率和复发率高。

目前临床上在缺血早期广泛应用溶栓药物治疗，使闭塞血管再通，恢复脑组织的血液供应，给患者带来了希望，但同时也带来了再灌注损伤，研究显示再灌注阶段的损伤占整个损伤的70%以上［5］。

脑缺血再灌注过程中，白细胞与血管内皮细注：与正常组比较，1）P<0.05；与假手术组比较，2）P<0.05；与模型组比较，3）P<0.05组别n浸润白细胞数正常组80假手术组80模型组8 6.75±1.281）2）针刺留针组8 5.38±1.061）2）3）针刺不留针组8 4.38±1.411）2）3）表1各组大鼠浸润白细胞数（x±s）实验中医药学212012Vol.13No.2胞黏附及白细胞穿出血管壁，随后浸润入缺血区，引起一系列的炎症反应，从而使神经细胞损伤进一步加重。

一方面白细胞聚集阻塞微血管，导致脑循环重建后“无再流”现象，缺血区因再次缺氧和缺营养而影响缺血半暗带的血液供应。

另一方面黏附于血管内壁的白细胞和浸润于脑组织的白细胞通过释放神经毒性物质如氧自由基、溶酶体酶和毒性细胞因子而加重缺血区神经元损伤，最终使神经细胞缺血、缺氧，甚至死亡。

针对再灌注损伤，目前尚无真正有效的治疗方法。

有学者试图应用药物进行脑缺血预处理，以减轻随后发生的致死性脑缺血再灌注所造成的损伤，产生脑保护作用［6-7］。

针刺作为一种传统的医疗手段，在脑血管疾病中的疗效得到了肯定，并逐渐应用于防治缺血再灌注损伤的基础研究中［8-10］。

本实验研究显示，在脑缺血再灌注早期，大鼠脑组织中白细胞浸润明显增加，经针刺干预治疗后，大鼠脑组织中白细胞浸润明显降低；经针刺的大鼠神经组织损伤程度也较轻。

说明针刺在减轻缺血再灌注损伤所致的炎症反应和脑组织损伤程度，改善受损的脑神经功能方面有一定的疗效。

本研究结果同时显示，在脑缺血再灌注早期针刺留针与否对大鼠脑组织中白细胞浸润水平的影响无显著差异，神经组织缺血程度亦无明显区别。

说明在缺血再灌注早期，针刺留针与否可能对脑缺血再灌注损伤的保护作用并无差异，最终结论尚需通过更深入的研究论证。

参考文献［1］张国瑾，赵增荣.国外脑血管疾病研究进展［M］.北京：中国医药科技出版社，2000：117.［2］Gao H，Guo J，Zhao P，et al.The neumprotective effects of electroa-cupuncture on focal cerebral ischemia in monkey［J］.Acupunct Electrother Res，2002，27（3）：45-57.［3］Zausinger S，Hungerhuber E，Baethmann A，et al.Neurological impairment in rats after transient middle cerebral artery occlusion：a comparative study under various treatment paradigms［J］.Brain Res，2000，863（1）：94.［4］李忠仁.实验针灸学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：327-329.［5］程敏，郭淮莲.大鼠脑缺血再灌注后梗死体积的动态变化［J］.中风与神经疾病杂志，2005，22（6）：536-537.［6］朱红灿，孙圣刚，李红戈.3-硝基丙酸预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受与海马星形胶质细胞的激活［J］.中国临床药理学与治疗学杂志，2003，8（9）：139-142.［7］陈娟.红花注射液预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国民康医学，2011，23（3）：263-265.［8］蔡志顺，刘志顺，王顺，等.电针经穴对脑缺血再灌注损伤大鼠血清白细胞介素的影响［J］.上海针灸杂志，2010，29（2）：119-121.［9］田岳凤，李雷勇，靳聪妮，等.针刺手厥阴心包经穴对心肌缺血再灌注损伤大鼠ET和NO的影响［J］.山西中医学院学报，2005，6（4）：7-8.［10］郭永明，梁宪如.针刺对局灶性脑缺血大鼠缺血脑组织及血清IL-6的影响［J］.天津中医药，2010，27（6）：469-471.Influence of Retained Needling and Non-retained Needling on Leukocyte Infiltration in Brain Tissue of Cerebral Ischemia and Reperfusion Model Rats Yang Jing1，Zhang Shiyuan2，Zhang Tiansheng3，Han Runxia1（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi030024； 2.Shanxi Province People′s Hospital，Taiyuan Shanxi030012； 3.Shanxi Institution of Acupuncture，Taiyuan Shanxi030006）Abstract Objective：To observe the influence of retained needling and non-retained needling on leukocyte infiltration and ischemia extent of nerve tissue in brain tissue of rats with cerebral ischemia and reperfusion.Methods：40male SD rats were randomly divided into normal group，sham operation group，model group，retained needling group and non-retained needling group.Rats in retained needling group were acupunctured at Sanyinjiao，Neiguan and Renzhong2hours and24hours after models were constructed，then the needles were retained for30minutes.Rats in non-retained needling group were acupunctured at the same point.48h after models were constructed，brain of rats were taken out and fixed，then were underwent HE staining.At last，numbers of leukocyte infiltration and ischemia extent of nerve tissue were observed.Results：Compared with model group，numbers of leukocyte infiltration were decreased（P＜0.05）and ischemia degree of nerve tissue in acupuncture groups was decreased，too（P＞0.05）.Difference of leukocyte infiltration and ischemia extent of nerve tissue between retained needling group and non-retained needling group was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusions：Acupuncture can significantly decrease leukocyte infiltration of surrounding area of cerebral ischemia，and reduce ischemia extent of nerve tissue.Key words acupuncture；retained needling；cerebral ischemia and reperfusion；leukocyte实验中医药学22。