维生素C含量的测定_百度文库(精)
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实验二维生素C含量的测定
一、原理
维生素C又称抗坏血酸，是所有具有抗坏血酸生物活性的化合物的统称。
结晶抗坏血酸在空气中稳定，但它在水溶液中易被空气和其他氧化剂氧化，生成脱氢抗坏血酸；在碱性条件下易分解，见光加速分解；在弱酸条件中较稳定。
维生素C不仅具有广泛的生理功能,能防止坏血病，关节肿，促进外伤愈合，使机体增强抵抗能力。
而且在食品工业上常用作抗氧化剂、酸味剂及强化剂。
因此，测定食品中维生素C的含量以评价食品品质及食品加工过程中维生素C的变化情况具有重要的意义。
目前测定维生素C的方法很多，常用的有2，6-二氯靛酚滴定法、荧光法、高效液相色谱法等。
紫外测定法是维生素C快速测定的方法，操作简单，不受其它还原性物质等成分的干扰。
其原理是根据维生素C具有对紫外光产生吸收、对碱不稳定的特性，在243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度值之差，并通过标准曲线，即可计算出维生素C的含量。
二、材料、试剂与仪器
材料：各种水果蔬菜、果汁及饮料
试剂：
（1）10%HCl：取133mL浓盐酸，加水稀释至500mL；
（2）1% HCl：取22mL浓盐酸，加水稀释至100mL；
（3）1mol/L NaOH溶液：称取40g 氢氧化钠，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000mL。
仪器：紫外分光光度计，离心机，分析天平，容量瓶（10、25mL），移液管（0.5、
1.0mL），吸管，研钵。
三、操作步骤
（一）标准曲线的制作
1、维生素C标准溶液的配制：在分析天平上准确称取抗坏血酸10mg，加2mL
10%HCl，再蒸馏水定容至100mL，混匀，即为100μg/mL维生素C标准溶液。
2、测定并制作标准曲线：取具塞刻度试管8支，依序加入100μg/mL维生素C标准溶液0.1、0.2、0.
3、0.
4、0.
5、0.
6、0.8、1.0mL，分别补加蒸馏水至10.0mL，摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定标准系列维生素C溶液的吸光度。
以维生素C的量（μg）为横坐标，以对应的吸光度（A243）为纵坐标作标准曲线。
（二）样品中维生素C含量的测定
1、样品的提取：将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。
称取5.00g混匀的样品于研钵中，加入5mL1% HCl，匀浆，转移到25 mL容量瓶中，稀释至刻度。
若提取液澄清透明，则可直接取样测定，若有浑浊、沉淀现象，则需要离心（10000g，10min），再测定。
2、样品提取液的测定：取0.2mL提取液，放入盛有0.4mL10%HCl的10 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
3、待测碱处理液的制备与测定：分别吸取0.2mL提取液、2mL蒸馏水和0.8
mL1mol/L NaOH溶液依次放入10 mL容量瓶中，混匀，15min后加入0.8 mL10%HCl，混匀，加蒸馏水定容至刻度。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
四、计算：
由待测液及碱处理待测液的A243值之差，查标准曲线，并按下式计算样品中维生素C的含量
式中：m—由标准曲线查得的维生素C含量（μg）；
V—样品提取液定容体积（mL）；
V1—测定时吸取样品提取液的体积（mL）；
W—称取样品的质量（g）。
