基于短毛细管的高速毛细管电泳系统的研究进展
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基于短毛细管的高速毛细管电泳系统的研究进展
作者:李启 张婷 方群
来源:《分析化学》2013年第05期
摘要:概述了基于短毛细管的高速毛细管电泳系统的研究进展。重点介绍了适用于基于短毛细管的高速毛细管电泳系统的各种进样方法及其在生物分离分析领域的应用,包括光门进样、流动门进样、电动进样、自发进样、流体动力进样和扩散进样等方法。
关键词:高速毛细管电泳;短毛细管;进样方法
1引言
20世纪90年代,Jorgenson和Monnig[1]在传统常规毛细管电泳(CE)系统的基础上建立了高速毛细管电泳(High speed capillary electrophoresis, HSCE)系统。常规CE系统通常使用20~100 cm长的石英毛细管作为分离通道,分离场强一般小于500 Vcm,进样体积为1~10
nL。在小于30 min的分析时间内,可以获得每米数十至数百万塔板数的高分离效率。HSCE系统则通过缩短毛细管长度(500 Vcm),将分析时间缩短至秒级甚至毫秒级(
按分离装置的不同,HSCE系统分为两类: 基于短毛细管的系统[1]和基于微流控芯片的系统[3]。其中芯片系统通过微加工技术在相对短的分离通道内实现样品的高速和高效分离,然而芯片的加工制作通常需要昂贵的微加工设备,芯片结构也较复杂,操作较为繁琐。短毛细管系统则无需昂贵的微加工设备和复杂的加工步骤,具有结构简单、操作方便等优点。本文将主要介绍基于短毛细管的HSCE系统的研究进展,重点介绍短毛细管HSCE系统的核心技术——皮升级至亚纳升的进样方法及其在生物分离分析中的应用。目前文献报道的短毛细管HSCE系统所使用的进样方法大致可分为光门进样、流动门进样、电动进样、自发进样、流体动力进样法和扩散进样等。
2基于短毛细管的高速毛细管电泳系统的进样方法
2.1光门进样
2.2流动门进样
Jorgenson研究组于1993年提出了流动门进样法[9],原理如图1b所示。引样毛细管和分离毛细管共轴排列且相距一小段空隙,其垂直方向连接流动泵。首先关闭流动泵,使引样毛细管流出的样品充满空隙,加电使一段样品区带进入分离毛细管;接着开启流动泵,将空隙内剩余样品冲走。利用此法进样,进样时间5 s,以甲酰胺为样品,连续 20次进样,得到的迁移时龙源期刊网
间、峰面积和峰高的RSD分别为0.18%, 1.9%和3.1%,重现性良好。此后,他们还进一步将引样毛细管的出口端和分离毛细管的进样端打磨成圆锥形,以减小进样后需要冲洗的毛细管表面积,从而获得更短的样品区带。通过对进样条件和电泳分离条件的优化,在分离场强1.2
kVcm、有效分离距离15 cm条件下,35 s内实现了苯丙氨酸和谷氨酸的基线分离,2 h内完成了400次连续进样分离,分离效率为4.8×105 m_Symbolm@@_1[10]。
2007年,Yang等[11]将流动门进样法与短毛细管HSCE系统结合,研究了3种SH2功能蛋白质Src、SH2B夂虵yn与多肽的结合作用,毛细管有效分离距离为3.8 cm,8 s内完成了上述3种蛋白质多肽结合物和自由多肽的分离。加入抑制剂则可同时考察其对3种蛋白质的抑制作用,实现选择性和非选择性等多种抑制剂的高速筛选,如图2所示。Yang等[12]进一步将反相高效液相色谱系统与在线亲和毛细管电泳系统联用,色谱分离后的产物通过流动门进样方式被引入毛细管进行二维电泳分离。实验以Fyn与多肽的结合作用为模型体系,二维分离筛选了多肽混合物中的影响上述结合作用的多种抑制剂,检出限达2~11 靘olL。总之,采用流动门进样法的CE系统装置较为简单,可与各种检测器联用,但由于流动泵的开闭需要消耗一定时间,导致总的分析时间会相应增加。
可以预计,随着研究的不断深入及相关技术的不断发展,短毛细管HSCE系统将日趋丰富和成熟,以其高速、高效的特点在生化分析、临床诊断和食品安全等研究领域发挥越来越重要的作用。如在生物分子间相互作用研究和高通量药物筛选或催化剂筛选中,短毛细管HSCE系统具有明显的优越性,在不损失分离效率的前提下,可明显提高分离速度和筛选通量。同时,短毛细管HSCE系统具有结构简单、易于实现微型化等特点,经过进一步发展和完善,有望实现系统的产业化和市场化。