高效液相色谱分析 高效毛细管电泳仪

用于水体、土壤、空气等环境 样品中污染物和农药残留的检 测，有助于环境保护和治理。
其他领域
毛细管电泳还应用于食品分析 、冶金、地质等领域，可用于 金属离子、矿物成分等的分离
和检测。
02 毛细管电泳技术
CHAPTER
进样技术
压力进样
通过施加压力使样品进 入毛细管，适用于大体
积样品。
电动进样
利用电场力驱动样品进 入毛细管，适用于低粘
电解质浓度
影响电场强度和离子迁移率。
温度
影响分子热运动和扩散系数。
毛细管材料和内壁处理
影响样品在毛细管内的吸附和分离效 果。
03 毛细管电泳实验
CHAPTER
实验流程
安装毛细管
选择合适的毛细管，将其插入 仪器，确保密封良好。
运行实验
设定合适的实验参数，如电压、 温度、检测波长等，开始实验。
准备毛细管电泳仪
进系统
用于将样品注入到毛细管中。
实验材料
毛细管
具有微米级内径的玻璃或石英管，是电泳的分离通道。
电解质溶液
用于提供电泳所需的离子环境。
样品
待测物质，需进行适当预处理。
清洗液
用于清洗毛细管和仪器，保持实验的准确性。
04 毛细管电色谱简介
CHAPTER
定义与原理
定义
毛细管电色谱（CEC）是一种将高效电泳分离与高效液相色谱的固定相相结合 的分离技术。
亲和电泳
利用特异性亲和作用进行分离 ，如抗体-抗原、酶-抑制剂等
。
检测方法
紫外可见光谱
利用紫外可见光谱检测分离出的组分。
电化学检测
利用电化学方法对分离出的组分进行检测。
荧光检测
利用荧光物质标记待测组分，通过荧光信号 进行检测。

氯化胆碱含量的检测方法
氯化胆碱含量的检测方法可以通过以下几种常用方法进行：
1. 高效液相色谱法（HPLC）：使用高效液相色谱仪进行分析，常用色谱柱为反相C18柱，流动相为甲醇和水的混合物，检
测波长为230-270nm。

2. 毛细管电泳法（CE）：利用毛细管电泳仪进行分析，使用
芳香醇作为外标物，运行缓冲液为硼酸-牛磺酸缓冲液，检测
波长为甲氧基化氯化胆碱的220nm。

3. 气相色谱法（GC）：氯化胆碱经酯化后，使用气相色谱仪
进行分析，常用色谱柱为聚硅氧烷柱，检测器为火焰离子化检测器。

4. 质谱法（MS）：将氯化胆碱溶液进行电喷雾或化学电离后，通过质谱仪对其荧光进行检测和分析。

以上方法可以根据实验室设备和分析要求选择合适的方法进行氯化胆碱含量的测定。

• 后来，Mikkers等首先从理论上研究了电 场聚焦现象及其对分离区带扩展的影响， 随后在实验上用200μm内径的聚四氟乙烯 管实现了高效电泳分离，这项研究成为 CZE发展史上的第一个重大突破。
• 从二十世纪八十年代初开始，Jorgenson 等使用更细的毛细管及内径为75μm的熔 融石英管做CZE，在30kV电压下每米毛 细管的效率高达4×105的理论塔板数， 这一开创性的成果成为毛细管电泳发展
3．应用领域的不断扩展
• 与传统电泳一样，CE的主要应用领域是生命科 学，分离对象涉及氨基酸，多肽，蛋白质，核 酸等生物分子，对蛋白质结构分析具有重要意 义的肽图，对人体基因工程具有决定性作用的 DNA测序等许多当代生命科学中分离分析难题， CE都已涉及。
• 在应用于生命科学的同时，CE近年来已迅速扩 展到其它领域，包括食品化学，药物化学，环 境化学，毒物学，医学和法医学等，特别是在 手性分子和生物大分子的分离方面，CE具有独 特的优势。
以电场力驱动产生的EOF，与HPLC 中靠外部泵压产生的液流不同。EOF 的流型属扁平流型或称“塞流”。扁 平型的塞子流不会引起样品区带的增 宽，是毛细管电泳高效的重要原因 。
HPLC的流型则是抛物线状的 层流，它在壁上的速度为零，中心 速度为平均速度的2倍。
Van Deemter方程：
HAB/u Cu
• 目前，CE的研究热点包括：DNA的高速 测序，蛋白质的高效分离，糖类分析， 细胞分析，手性拆分等等。此外，毛细 管电泳还可用于物理化学常数的测定， 生产工程控制等。
历史的简单回顾
• 瑞典科学家Tiselius在1937年首先提出电泳，创 造了Tiselius电泳仪，并建立了移动界面电泳方 法。1948年他获得了诺贝尔化学奖。

青霉素发酵液的高效毛细管电泳图
1. 青霉素G钠 ；2. 6-氨基青霉烷酸； 3. 对羟基苯乙酸 ；4. 邻羟基苯乙酸 ；5. 苯乙酸
2. 中药成分分析 如：黄酮及其苷类分析
HPCE条件
毛细管40cm×50μm (Bio-Rad) 检测波长：UV275nm 进样：10psi × sec 操作压力：20KV(+)→(-) 柱温：20℃ 缓冲液：50mmol/L磷酸二氢钠-12.5mmol/L硼 砂(pH8.0)
北沙参供试品溶液的毛细管电泳图
1. 补骨脂素; 2. 花椒毒素; 3. 异茴芹内酯; 4. 佛手柑内酯; 5. 东莨菪内酯。
复方生脉散的毛细管电泳指纹 图谱研究
利用毛细管电泳(CE)方法建立中药复方 生脉散(红参、麦冬、五味子)的指纹图谱。
采用序贯式均匀设计的方法优化CE分离 条件，确定生脉散指纹图谱 电泳条件为:以pH为9.5、44 mmol/L硼砂、 34 mmol/L SDS为缓冲溶液体系， 运行电压25 kV，温度25℃， 压力进样50 mbar×100 s， 检测波长200 nm。
3. 毛细管凝胶电泳 凝胶的网络结构对溶质具 有分子筛的作用，可分离质荷 比相同但分子大小不同的组分。 在分子生物学和蛋白质化 学上有着十分广泛的应用。
4. 毛细管等电聚焦
根据蛋白质的等电点不同 而进行分离。
E B B F A B D A C F C A B A A E D D D E AE D C C E B B AA BB AA BB CC DD CC DD EE EE FF FF
低
pH梯度
高
毛细管电泳的操作
将运行缓冲液充满毛细管柱 移去进样端缓冲液池，用样品池代替 用电动或压力进样方式进样 将进样端缓冲液放回 毛细管两端加操作电压进行电泳分离 分离样品迁移至检测窗检测，数据记录 和处理