rhBMP-2在诱导C3H10T1／2干细胞成骨中对MMP-13、Collagen-2 mRNA表达的影响
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（ ＭＰ属 生 长因 子超 家族 ，ｒＢ 一 为其 中 的一 Ｂ ） ｈ ＭＰ２作 员具有 刺激 成骨 细胞 的作用 【，它 在 鼠胚胎 干 细胞 ４ 】 Ｃ Ｈ１Ｔ ／ｃｏｅ 细 胞 中对 ＭＭＰ １ ３ ０ １２ｌｎ８ 一３的作 用及 对 Ｉ Ｉ 型胶原 的影 响作 用 同样 未见 报道 。 ｒＢ 一作 为 而 ｈ ＭＰ２
［ 关键 词】 ＭＭＰ １ ； ｏｌｇｎ２ ｒＢ 一； ｅ ｌｉ Ｃ 一３ Ｃ ｌ ｅ ；ｈ ＭＰ ２ Ｒ ａ—ｍ Ｐ Ｒ ａ ｔ ｅ
［ Ｉ９类号 】 ５３ ［ ＊源自 ｉ Ｑ９—３ 文献 标 识码 】 【 章编 号】１０ —４ ８２ ０ ） ０ ２—３ Ａ 文 ４８４ （０ ７０ —０ ９０ ０ １
ｔ Ｃ ｉ Ｐ Ｒ法 ［ 察 ＭＭＰ １ 和 Ｃ ｌ ｇ ｎ 在不 同 时间 ｍｅ ６ ７ 观 一３ ｏｌ ｅ ２ ａ
瘤和 关节 炎病 人 的关节 软骨 中呈 高表 达【，国外有 ｌ 】 研 究 者 利 用 肥 大 的 软 骨 细 胞 、 骨 膜 细 胞 研 究
ＭＭＰ ３ １ 降解 Ｃ ｌ ｇｎ 的作用 。发现 ＭＭＰ ３ ｏ ａｅ ２ ｌ １ 降解 Ｉ 型胶原的能力大于 Ｉ Ｉ 型，而 Ｉ 形胶原是软 Ｉ 、ＩＩ Ｉ
ＭＭＰ ３￣胶原酶 ３近来被证实在人类多种肿 １（Ｉ ］ ）
．
故本 实验 以本 身不 具有 转化 成成 骨细 胞功 能 的未成 骨 胚 鼠干 细胞 Ｃ３ ０ ／ｃｏ ｅ 为研 究 对 象【， Ｈ１Ｔ１２ ｌｎ ８作 ５ 】 利 用 ｒＢ 一诱 导其 成 骨 ，在此 过程 中， 用 Ｒ ａ ｈ ＭＰ２ 采 ｅｌ —
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Ｍａ．０ ７２ （） ｒ ０ ，７１ ２
实 验 动 物 与 比较 医 学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ａｄＣｏ ａ ｔ ｅ ｄｃ ｅ ａ ｏａｏｙＡ ｉ ｌｎ ｍｐｒ ｉ ｉｎ ａ ｖ Ｍｅ ｉ
２ ９
ｒ Ｂ ． 在 诱 导 Ｃ Ｈ１ Ｔ ／ 干 细 胞 成 骨 中对 ｈ ＭＰ ２ ３ ０ １２ ＭＭＰ １ 、Ｃｏｌｇ ｎ２ｍＲＮＡ表 达 的 影 响 ．３ ｌ ｅ ． ａ
一
１ 材 料 与 方 法
１１ 试剂 与仪 器 ． Ｃ３ ／ ｌｎ ８ ＡＴ ） ｒＢＭＰ ２Ｒ＆Ｄ Ｈ１ Ｔ１２ ｃｏ ｅ （ ＣＣ ， ｈ ０ 一（ ｓ ｓ ｍ ， ｃ， ｙｔ ｓ ｎ ）ＭＭＰ １ （ ｖｔ ｇｎ， Ｒ Ｚ Ｌ Ｒ ａ ｅ ｔ ｅ Ｉ 一３ｉ ｉ ｏ ｅ ）Ｔ Ｉ Ｏ ｅｇｎ ｎ ｒ （ ｖｔ ｇｎ ， ＮＡｌｔ （ ｉ ｉｏ ｅ ） Ｒ ｎ ｒ ａｅ Ａｍｂｏ ） Ｄ —ｒｅ Ｄ ｓ ｒ ｉｎ ， ＮＡ ｆ Ｎａ ｅ ｅ Ｔ ｅｔ ｎ ｄＲ ｍｏ ａ 试剂 盒（ ｐ ｌ ｄＢ ｏｙｔ ） ｒａ ｍｅ ｔｎ ｅ ｖ ｌ ａ Ａ ｐｉ ｉｓｓ ｍ ， ｅ ｅ ｓ ＤＭＥ Ｍｅ ｉｔｅ ， ｎ ） Ｓ Ｒ Ｇｒｅ ＣＲ试 剂 盒 Ｍ（ ｄａｅ ｈ Ｉ ｃ， ＹＢ ｅｎＰ （ ｐ ｌｅ ｏ ｙ ｔｍｓ ， ａ —ｉ ＣＲ（ ｐｉｄ Ａ ｐ ｉｄ Ｂｉ ｓ ｓｅ ） Ｒｅ ｌｔ ｍｅ Ｐ Ａｐ ｌ ｅ
徐 岚 ， 范 雁 ，周迎会 ，吴士 良
（ 苏州大学医学院生化与分子生物 学教研室， 苏州大学生化工程研 究所， 苏州 ２ ５ ２） １１３
［ 摘要】 目的 研 究基质金属蛋 白酶 １（ ３ＭＭＰ ３、 Ｉ １） Ｉ 型胶原（ ｌ ｇｎ ） Ｃ Ｈ ０ １ 细胞 中的相互 ｃ ｌ ｅ２在 ３ １Ｔ ／ ｏａ ２ 关系，探讨 ｒ ＭＰ２ ｈ Ｂ 一 在诱导 Ｃ Ｈ１Ｔ ／ 成骨的同时对 ＭＭＰ ３ ３ ０１ ２ １ 以及 Ｃ ｌ ｇｎ ｍ Ｎ ｏ ａｅ２ Ｒ Ａ表达水平的 ｌ 影响。方法 取 Ｃ Ｈ１Ｔ ／ 细胞加入 ｒＢ 一 诱导成骨细胞的产生， ｏ ｏｓ 染色观察细胞形 ３ ０１ ２ ｈ ＭＰ２ Ｖ ｎＫ ｓ ａ 态， 同时在不同时间段抽取 总 Ｒ ， ＮＡ 利用 Ｒ ａ ｔ ｅ Ｃ ｅｌｉ Ｒ检测 ＭＭＰ ３ ｏ ａｅ２的表达情况。结 —ｍ Ｐ １ 、Ｃ ｌ ｇｎ ｌ 果 未加 ｒＢ 一 的细胞 中ＭＭＰ ３ Ｃ ｌｇｎ 前 １ｄ ｈ ＭＰ２ １ 、 ｏａｅ２ ０ 表达呈 负相 关； ｈ ＭＰ２ ｌ 而ｒＢ 一 处理后的细胞 中 ＭＭＰ １ 表达水平受抑制，且 ＭＭＰ ３ ｃｌ ｇｎ 前 １ｄ 一３ １ 和 ｏ ａｅ２ ４ 表达呈明显 负相关。结论 ＭＭＰ １ 和 ｌ 一３ Ｃ ｌｇｎ２ Ｒ Ａ表达水平具明显相 关性，ｒ ＭＰ２ ｏ ａｅ－ ｍ Ｎ ｌ ｈ Ｂ 一 在诱导成骨的 同时，具有抑制 ＭＭＰ１ 表达 一３ 的作 用 。
骨 基质 的主 要成 份【 捌。但 ＭＭＰ ３ １ 降解 Ｉ型胶 原 是 Ｉ
段 的表达 情 况 ，同时观 察 未加 入 ｒＢ 一细 胞 自然 ｈ ＭＰ２ 分化 中 它们 两 者 的 相 关 性 。
否存在着一个时间效应 ，或只 是在 正常细胞 中发 生 ， 尚未 见 有 关 报 道 。 此 外 ， 形 态 发 生 蛋 白 骨
箱 （ ｉ ｅ） 倒 置 显微 镜 （ ｋ ｎ 等 。 Ｆｓ ｒ， ｈ Ｎｉｏ ） １ 细 胞 培养 ． ２
苏省高校 自然科学研究基金课题 资助项 目 （４ Ｂ ２ ９； ０ ＫＪ ３ ０ ）苏州大学医学发展基金（０ ７ １ ２ ２０） 【 作者简介】 徐 岚（９ ４）女， １６ － ， 高级实验师， 主要从事生物化学
种成骨 诱导剂 ，是一种新 型的基 因工程药物 。
【 稿 日期】 ０ ６０ ．８ 收 ２ ０ －６２ 【 金 项 目】 防科 工 委 国 防 基 础 科研 项 目（ ｏｏ ０ ｌ０ ）江 基 国 Ｉ ｌ ６ ５ １； （ ２
Ｂｏｙｔ ）紫 外分 光 光度 计 （ｅｈ ｎ）Ｃ ２ ｉｓｓ ｍｓ， ｅ Ｂ ｃｍａ ， Ｏ 培养
［ 关键 词】 ＭＭＰ １ ； ｏｌｇｎ２ ｒＢ 一； ｅ ｌｉ Ｃ 一３ Ｃ ｌ ｅ ；ｈ ＭＰ ２ Ｒ ａ—ｍ Ｐ Ｒ ａ ｔ ｅ
［ Ｉ９类号 】 ５３ ［ ＊源自 ｉ Ｑ９—３ 文献 标 识码 】 【 章编 号】１０ —４ ８２ ０ ） ０ ２—３ Ａ 文 ４８４ （０ ７０ —０ ９０ ０ １
ｔ Ｃ ｉ Ｐ Ｒ法 ［ 察 ＭＭＰ １ 和 Ｃ ｌ ｇ ｎ 在不 同 时间 ｍｅ ６ ７ 观 一３ ｏｌ ｅ ２ ａ
瘤和 关节 炎病 人 的关节 软骨 中呈 高表 达【，国外有 ｌ 】 研 究 者 利 用 肥 大 的 软 骨 细 胞 、 骨 膜 细 胞 研 究
ＭＭＰ ３ １ 降解 Ｃ ｌ ｇｎ 的作用 。发现 ＭＭＰ ３ ｏ ａｅ ２ ｌ １ 降解 Ｉ 型胶原的能力大于 Ｉ Ｉ 型，而 Ｉ 形胶原是软 Ｉ 、ＩＩ Ｉ
ＭＭＰ ３￣胶原酶 ３近来被证实在人类多种肿 １（Ｉ ］ ）
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故本 实验 以本 身不 具有 转化 成成 骨细 胞功 能 的未成 骨 胚 鼠干 细胞 Ｃ３ ０ ／ｃｏ ｅ 为研 究 对 象【， Ｈ１Ｔ１２ ｌｎ ８作 ５ 】 利 用 ｒＢ 一诱 导其 成 骨 ，在此 过程 中， 用 Ｒ ａ ｈ ＭＰ２ 采 ｅｌ —
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Ｍａ．０ ７２ （） ｒ ０ ，７１ ２
实 验 动 物 与 比较 医 学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ａｄＣｏ ａ ｔ ｅ ｄｃ ｅ ａ ｏａｏｙＡ ｉ ｌｎ ｍｐｒ ｉ ｉｎ ａ ｖ Ｍｅ ｉ
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ｒ Ｂ ． 在 诱 导 Ｃ Ｈ１ Ｔ ／ 干 细 胞 成 骨 中对 ｈ ＭＰ ２ ３ ０ １２ ＭＭＰ １ 、Ｃｏｌｇ ｎ２ｍＲＮＡ表 达 的 影 响 ．３ ｌ ｅ ． ａ
一
１ 材 料 与 方 法
１１ 试剂 与仪 器 ． Ｃ３ ／ ｌｎ ８ ＡＴ ） ｒＢＭＰ ２Ｒ＆Ｄ Ｈ１ Ｔ１２ ｃｏ ｅ （ ＣＣ ， ｈ ０ 一（ ｓ ｓ ｍ ， ｃ， ｙｔ ｓ ｎ ）ＭＭＰ １ （ ｖｔ ｇｎ， Ｒ Ｚ Ｌ Ｒ ａ ｅ ｔ ｅ Ｉ 一３ｉ ｉ ｏ ｅ ）Ｔ Ｉ Ｏ ｅｇｎ ｎ ｒ （ ｖｔ ｇｎ ， ＮＡｌｔ （ ｉ ｉｏ ｅ ） Ｒ ｎ ｒ ａｅ Ａｍｂｏ ） Ｄ —ｒｅ Ｄ ｓ ｒ ｉｎ ， ＮＡ ｆ Ｎａ ｅ ｅ Ｔ ｅｔ ｎ ｄＲ ｍｏ ａ 试剂 盒（ ｐ ｌ ｄＢ ｏｙｔ ） ｒａ ｍｅ ｔｎ ｅ ｖ ｌ ａ Ａ ｐｉ ｉｓｓ ｍ ， ｅ ｅ ｓ ＤＭＥ Ｍｅ ｉｔｅ ， ｎ ） Ｓ Ｒ Ｇｒｅ ＣＲ试 剂 盒 Ｍ（ ｄａｅ ｈ Ｉ ｃ， ＹＢ ｅｎＰ （ ｐ ｌｅ ｏ ｙ ｔｍｓ ， ａ —ｉ ＣＲ（ ｐｉｄ Ａ ｐ ｉｄ Ｂｉ ｓ ｓｅ ） Ｒｅ ｌｔ ｍｅ Ｐ Ａｐ ｌ ｅ
徐 岚 ， 范 雁 ，周迎会 ，吴士 良
（ 苏州大学医学院生化与分子生物 学教研室， 苏州大学生化工程研 究所， 苏州 ２ ５ ２） １１３
［ 摘要】 目的 研 究基质金属蛋 白酶 １（ ３ＭＭＰ ３、 Ｉ １） Ｉ 型胶原（ ｌ ｇｎ ） Ｃ Ｈ ０ １ 细胞 中的相互 ｃ ｌ ｅ２在 ３ １Ｔ ／ ｏａ ２ 关系，探讨 ｒ ＭＰ２ ｈ Ｂ 一 在诱导 Ｃ Ｈ１Ｔ ／ 成骨的同时对 ＭＭＰ ３ ３ ０１ ２ １ 以及 Ｃ ｌ ｇｎ ｍ Ｎ ｏ ａｅ２ Ｒ Ａ表达水平的 ｌ 影响。方法 取 Ｃ Ｈ１Ｔ ／ 细胞加入 ｒＢ 一 诱导成骨细胞的产生， ｏ ｏｓ 染色观察细胞形 ３ ０１ ２ ｈ ＭＰ２ Ｖ ｎＫ ｓ ａ 态， 同时在不同时间段抽取 总 Ｒ ， ＮＡ 利用 Ｒ ａ ｔ ｅ Ｃ ｅｌｉ Ｒ检测 ＭＭＰ ３ ｏ ａｅ２的表达情况。结 —ｍ Ｐ １ 、Ｃ ｌ ｇｎ ｌ 果 未加 ｒＢ 一 的细胞 中ＭＭＰ ３ Ｃ ｌｇｎ 前 １ｄ ｈ ＭＰ２ １ 、 ｏａｅ２ ０ 表达呈 负相 关； ｈ ＭＰ２ ｌ 而ｒＢ 一 处理后的细胞 中 ＭＭＰ １ 表达水平受抑制，且 ＭＭＰ ３ ｃｌ ｇｎ 前 １ｄ 一３ １ 和 ｏ ａｅ２ ４ 表达呈明显 负相关。结论 ＭＭＰ １ 和 ｌ 一３ Ｃ ｌｇｎ２ Ｒ Ａ表达水平具明显相 关性，ｒ ＭＰ２ ｏ ａｅ－ ｍ Ｎ ｌ ｈ Ｂ 一 在诱导成骨的 同时，具有抑制 ＭＭＰ１ 表达 一３ 的作 用 。
骨 基质 的主 要成 份【 捌。但 ＭＭＰ ３ １ 降解 Ｉ型胶 原 是 Ｉ
段 的表达 情 况 ，同时观 察 未加 入 ｒＢ 一细 胞 自然 ｈ ＭＰ２ 分化 中 它们 两 者 的 相 关 性 。
否存在着一个时间效应 ，或只 是在 正常细胞 中发 生 ， 尚未 见 有 关 报 道 。 此 外 ， 形 态 发 生 蛋 白 骨
箱 （ ｉ ｅ） 倒 置 显微 镜 （ ｋ ｎ 等 。 Ｆｓ ｒ， ｈ Ｎｉｏ ） １ 细 胞 培养 ． ２
苏省高校 自然科学研究基金课题 资助项 目 （４ Ｂ ２ ９； ０ ＫＪ ３ ０ ）苏州大学医学发展基金（０ ７ １ ２ ２０） 【 作者简介】 徐 岚（９ ４）女， １６ － ， 高级实验师， 主要从事生物化学
种成骨 诱导剂 ，是一种新 型的基 因工程药物 。
【 稿 日期】 ０ ６０ ．８ 收 ２ ０ －６２ 【 金 项 目】 防科 工 委 国 防 基 础 科研 项 目（ ｏｏ ０ ｌ０ ）江 基 国 Ｉ ｌ ６ ５ １； （ ２
Ｂｏｙｔ ）紫 外分 光 光度 计 （ｅｈ ｎ）Ｃ ２ ｉｓｓ ｍｓ， ｅ Ｂ ｃｍａ ， Ｏ 培养
