小分子肽(KP)对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1增殖分化及NF-κB表达的影响
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刘 义 吴 昆鹏 杨 巧珠 李延 平 崔 ， ， ， ， 燎
（ ． 东天然药物研 究与开发 重点实验 室 ；． 东医学院第一临床 学院 ， １广 ２广 广东 湛江 ５４ ２ ） ２ ０ ３
中国图书分类号 ： 一 ２ Ｒ ２ ．４； ３ １６ Ｒ ８ ．２ Ｒ３ ； ３９ ２ Ｒ ４ ． ； ６ １０ ２ ３ 文献标识码 ： 文章编号 ：０ １—１７ （０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ）３—０ ２ ０ ４ ３— ５
・
Ｌ 的Ｋ Ｐ作用 细胞 ９ １ 、５ｄ和 １ 、４ｄ 能分别使 细胞 、２ １ ２ ２ 后
中的碱性磷 酸 酶活性 及 羟脯 氨酸含 量高 于对 照组 ；０ｄ后 ３ Ｋ Ｐ组 出现典 型的矿化骨结节 ； 用 ３ １ 、４ ３ 作 、２ ２ 、０ ｄ后细胞 中
重 点实 验室 提 供 ， 牛 血 清 （ 州 四季 青 公 司 ） 总 胎 杭 ，
关键字 ： 小分子 肽 ； ３ ３Ｅ ； 殖 ； 化 ； ＭＣ Ｔ 一１ 增 分 矿化 ； ＦＫ ５ ； Ｎ －Ｂ ｏ０
ＮＦ— Ｂ ６５ Ｋ ｐ
单克隆抗体、 Ｒ 标记羊抗小 鼠二抗 （ ａｔ Ｃｕ） ＨＰ Ｓｎ ｒｚ ， ａ
Ｄ ｌｅｃｓｍｏｉｅ ａｌｓｍ ｄ ｍ 培 养 基 （ ＭＥ ｕｂｃｏ ｄｉｄＥ ｇ ｅｉ ｆ ｅ ｕ Ｄ Ｍ， ＧｂｏＢ Ｌ ， 硝 基 苯 磷 酸 二 钠 、 唑 蓝 、 蛋 白 ｉｃ．Ｒ ） 对 噻 胰 酶、． Ｂ甘油 磷酸 钠 、 素 红 均 为 Ｓｇ ａ公 司 产 品 ， 茜 ｉ ｍ 其 余 试 剂为 国产 分析 纯 。
ＭＴ 法检测 不 同深 度 Ｋ （ ． １ ０ １ １０ １． 、５ ０ ５ ． ｒ Ｐ ０ ０ 、． 、． 、０ ０ ２ ． 、００、 １０ｍｇ・ ） ＭＣ Ｔ 一 １ ０ Ｌ 对 ３ ３Ｅ 生长的影响 ：Ｎ Ｐ法 检测 Ｋ ＰＰ Ｐ作
用 ９ １ 、５ｄ后碱 性磷 酸酶 活性 ： 、２ １ 紫外 分光 光度 法检 测 Ｋ Ｐ 作用 １ 、４ ｄ 细胞中羟脯氨酸 的含 量 ； 素红染 色检测 矿 ２２ 后 茜
作用研究 ， 除需骨质疏松动物模型作药效评价外 ， 还
需 包含 对 成骨 细胞 形成 促进 有效 或对 破 骨细 胞 吸收
蛋 白提取 试 剂盒 、 ｒｄ ｒ 白定 量 试 剂 盒 、 强 型 Ｂ ａｆ ｄ蛋 ｏ 增
ｐ５及 ｐ０表 达 均 出现 不 同程 度 下 降。结 论 小 分 子 肽 ｆ ； ５
（ Ｐ 可能 是通过抑制 Ｎ —Ｂ活性来促 进 ＭＣ Ｔ 一１细胞增 Ｋ ） ＦＫ ３ ３Ｅ
殖分化 。
Ｅ Ｌ化 学发 光 检测 试 剂 盒 （ ｅｔｉ） Ｓ ＳＰ Ｇ Ｃ Ｂ ｓ ｏ 、Ｄ ．Ａ Ｅ凝 Ｂ 胶配 制试 剂盒 、 上样 缓 冲液 、 预染 蛋 白质分 子量标 准 （ 云天 生物 技 术 研 究 所 ） 小 鼠抗 Ｎ ．Ｂｐ０ ｐ０ 碧 ， ＦＫ ５ 、６
用 机制 还 不 明确 。骨质 疏松 症 防治药 物 临床前 有 效
１３ １ 细胞培养 ． ．
Ｍ ３ ３Ｅ 细胞 复苏后 ， ＣＴ一１ 用含体
积 分 数 为 １ ％胎 牛 血 清 的 Ｄ Ｍ 将 细胞 接种 于培 ０ ＭＥ
养 瓶 中 ， ３ ℃ 、％二 氧化 碳 及饱 和 湿 度条 件 下 培 在 ７ ５ 养 。每 ３ 天 更 换 １次 培 养 液 。 细 胞 长 满 后 ， 用
中国药理 学通报
Ｃ ｉｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃｌ ｕｌｉ ２ １ ｒ２ （ ） ４ ３～ ｈ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌｔ ｎｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ ０ １Ｍａ；７ ３ ：２ ７
・２ ４ ３・
小分 子肽 （ Ｐ 对 小 鼠成骨前体细 胞 ＭＣ Ｔ ．１ Ｋ ） ３ ３Ｅ 增殖 分化及 Ｎ －Ｂ表达 的影响 ＦＫ
化结节 ； ｓ ｒ ｌ 检 测成 骨矿化过程 中细胞不 同阶段 Ｎ — Ｗｅｔ ｎｂｏ ｅ ｔ Ｆ
（ 日本 １立公 司） 恒温震荡培养箱 （ ３ ， 哈尔滨东联仪
器 厂 ） Ｄ ０６ ，ＨＧ９３ Ａ干燥 箱 （ 海精 宏实 验设 备 仪器 上
Ｋ Ｂ亚基 ｐ ５和 ｐ ０的表达 。结果 ６ ５
Ｋ Ｐ在发挥防治骨质疏松中促成骨作用的分子机制 。
１ 材料 与 方 法
摘 要 ： 的 研 究 小 分 子 肽 （ Ｐ） 小 鼠成 骨 前 体 细 胞 目 Ｋ 对
ＭＣ Ｔ 一 １ 殖 分 化 及 Ｎ —Ｂ ｏｏ、６ 达 的 影 响 。 方 法 ３ ３Ｅ 增 ＦＫ ５ ｐ５表
１ １ 仪 器 二 氧 化 碳 培 养 箱 （ Ｅ Ａ ｅｌ１０， ． Ｈ Ｒ ｃｌ ５ ｉ Ｕ Ａ） Ｅ Ｘ ０ 酶 标 仪 （ ｉ－ ｋ ｎｔ ｍ ｎｓＩｃ Ｓ ， Ｌ ８０ Ｂｏｔ ｉｓｕ ｅｔ ｎ ， ｅ ｒ Ｕ Ａ） Ｍｉｉ １ Ｓ ， ｌ Ａ ０超 纯 水 器 （ ｌｐｒ Ｉｅ Ｕ Ａ） ｌＱ Ｍｉｉｏｅ ｎ ， Ｓ ， ｌ 恒 温水浴 锅 （ 上海 实验 仪 器厂 ）５ Ｐ７ ，５ ２超速 离 心机
浓度 为 ２ ． 、０ ０ １０ ５ ０ ５ ． 、０
厂） 垂直板 电泳仪 （ ， 北京六一厂） 转移 电泳槽 （ ， 美 国伯乐） 。 １２ 药 物和 制剂 ．
Ｋ Ｐ由广东 天然 药物 研究 与 开发
ｍ Ｌ 的Ｋ ｇ・ Ｐ能促进 ＭＣ Ｔ ． １细胞 增殖 生长 ；０ １０ｍｇ ３ ３Ｅ ５ 、０
１ ３ 实验 方 法 ．
小分 子 肽 （ Ｐ 是 应 用本 实验 室 的 中 国发 明专 Ｋ ） 利技 术 （ 开 号 ： Ｎ ０ ０５ ８ ） 公 Ｃ １１ １５ ０ 制备 其相对分子质量为 １９～ １ｕ 具有水溶 ８ ５２ ， 性强 、 生物活性 强 、 结肠 吸收率 高的等特点 。体 Ｊ 内实验 显 示 Ｋ Ｐ能很 好 地 预 防 骨 质 疏 松 ｊ但 其 作 ，
（ ． 东天然药物研 究与开发 重点实验 室 ；． 东医学院第一临床 学院 ， １广 ２广 广东 湛江 ５４ ２ ） ２ ０ ３
中国图书分类号 ： 一 ２ Ｒ ２ ．４； ３ １６ Ｒ ８ ．２ Ｒ３ ； ３９ ２ Ｒ ４ ． ； ６ １０ ２ ３ 文献标识码 ： 文章编号 ：０ １—１７ （０ １ ０ Ａ １０ ９ ８ ２ １ ）３—０ ２ ０ ４ ３— ５
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Ｌ 的Ｋ Ｐ作用 细胞 ９ １ 、５ｄ和 １ 、４ｄ 能分别使 细胞 、２ １ ２ ２ 后
中的碱性磷 酸 酶活性 及 羟脯 氨酸含 量高 于对 照组 ；０ｄ后 ３ Ｋ Ｐ组 出现典 型的矿化骨结节 ； 用 ３ １ 、４ ３ 作 、２ ２ 、０ ｄ后细胞 中
重 点实 验室 提 供 ， 牛 血 清 （ 州 四季 青 公 司 ） 总 胎 杭 ，
关键字 ： 小分子 肽 ； ３ ３Ｅ ； 殖 ； 化 ； ＭＣ Ｔ 一１ 增 分 矿化 ； ＦＫ ５ ； Ｎ －Ｂ ｏ０
ＮＦ— Ｂ ６５ Ｋ ｐ
单克隆抗体、 Ｒ 标记羊抗小 鼠二抗 （ ａｔ Ｃｕ） ＨＰ Ｓｎ ｒｚ ， ａ
Ｄ ｌｅｃｓｍｏｉｅ ａｌｓｍ ｄ ｍ 培 养 基 （ ＭＥ ｕｂｃｏ ｄｉｄＥ ｇ ｅｉ ｆ ｅ ｕ Ｄ Ｍ， ＧｂｏＢ Ｌ ， 硝 基 苯 磷 酸 二 钠 、 唑 蓝 、 蛋 白 ｉｃ．Ｒ ） 对 噻 胰 酶、． Ｂ甘油 磷酸 钠 、 素 红 均 为 Ｓｇ ａ公 司 产 品 ， 茜 ｉ ｍ 其 余 试 剂为 国产 分析 纯 。
ＭＴ 法检测 不 同深 度 Ｋ （ ． １ ０ １ １０ １． 、５ ０ ５ ． ｒ Ｐ ０ ０ 、． 、． 、０ ０ ２ ． 、００、 １０ｍｇ・ ） ＭＣ Ｔ 一 １ ０ Ｌ 对 ３ ３Ｅ 生长的影响 ：Ｎ Ｐ法 检测 Ｋ ＰＰ Ｐ作
用 ９ １ 、５ｄ后碱 性磷 酸酶 活性 ： 、２ １ 紫外 分光 光度 法检 测 Ｋ Ｐ 作用 １ 、４ ｄ 细胞中羟脯氨酸 的含 量 ； 素红染 色检测 矿 ２２ 后 茜
作用研究 ， 除需骨质疏松动物模型作药效评价外 ， 还
需 包含 对 成骨 细胞 形成 促进 有效 或对 破 骨细 胞 吸收
蛋 白提取 试 剂盒 、 ｒｄ ｒ 白定 量 试 剂 盒 、 强 型 Ｂ ａｆ ｄ蛋 ｏ 增
ｐ５及 ｐ０表 达 均 出现 不 同程 度 下 降。结 论 小 分 子 肽 ｆ ； ５
（ Ｐ 可能 是通过抑制 Ｎ —Ｂ活性来促 进 ＭＣ Ｔ 一１细胞增 Ｋ ） ＦＫ ３ ３Ｅ
殖分化 。
Ｅ Ｌ化 学发 光 检测 试 剂 盒 （ ｅｔｉ） Ｓ ＳＰ Ｇ Ｃ Ｂ ｓ ｏ 、Ｄ ．Ａ Ｅ凝 Ｂ 胶配 制试 剂盒 、 上样 缓 冲液 、 预染 蛋 白质分 子量标 准 （ 云天 生物 技 术 研 究 所 ） 小 鼠抗 Ｎ ．Ｂｐ０ ｐ０ 碧 ， ＦＫ ５ 、６
用 机制 还 不 明确 。骨质 疏松 症 防治药 物 临床前 有 效
１３ １ 细胞培养 ． ．
Ｍ ３ ３Ｅ 细胞 复苏后 ， ＣＴ一１ 用含体
积 分 数 为 １ ％胎 牛 血 清 的 Ｄ Ｍ 将 细胞 接种 于培 ０ ＭＥ
养 瓶 中 ， ３ ℃ 、％二 氧化 碳 及饱 和 湿 度条 件 下 培 在 ７ ５ 养 。每 ３ 天 更 换 １次 培 养 液 。 细 胞 长 满 后 ， 用
中国药理 学通报
Ｃ ｉｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃｌ ｕｌｉ ２ １ ｒ２ （ ） ４ ３～ ｈ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌｔ ｎｅ ｏ ａ Ｂ ｅｎ ０ １Ｍａ；７ ３ ：２ ７
・２ ４ ３・
小分 子肽 （ Ｐ 对 小 鼠成骨前体细 胞 ＭＣ Ｔ ．１ Ｋ ） ３ ３Ｅ 增殖 分化及 Ｎ －Ｂ表达 的影响 ＦＫ
化结节 ； ｓ ｒ ｌ 检 测成 骨矿化过程 中细胞不 同阶段 Ｎ — Ｗｅｔ ｎｂｏ ｅ ｔ Ｆ
（ 日本 １立公 司） 恒温震荡培养箱 （ ３ ， 哈尔滨东联仪
器 厂 ） Ｄ ０６ ，ＨＧ９３ Ａ干燥 箱 （ 海精 宏实 验设 备 仪器 上
Ｋ Ｂ亚基 ｐ ５和 ｐ ０的表达 。结果 ６ ５
Ｋ Ｐ在发挥防治骨质疏松中促成骨作用的分子机制 。
１ 材料 与 方 法
摘 要 ： 的 研 究 小 分 子 肽 （ Ｐ） 小 鼠成 骨 前 体 细 胞 目 Ｋ 对
ＭＣ Ｔ 一 １ 殖 分 化 及 Ｎ —Ｂ ｏｏ、６ 达 的 影 响 。 方 法 ３ ３Ｅ 增 ＦＫ ５ ｐ５表
１ １ 仪 器 二 氧 化 碳 培 养 箱 （ Ｅ Ａ ｅｌ１０， ． Ｈ Ｒ ｃｌ ５ ｉ Ｕ Ａ） Ｅ Ｘ ０ 酶 标 仪 （ ｉ－ ｋ ｎｔ ｍ ｎｓＩｃ Ｓ ， Ｌ ８０ Ｂｏｔ ｉｓｕ ｅｔ ｎ ， ｅ ｒ Ｕ Ａ） Ｍｉｉ １ Ｓ ， ｌ Ａ ０超 纯 水 器 （ ｌｐｒ Ｉｅ Ｕ Ａ） ｌＱ Ｍｉｉｏｅ ｎ ， Ｓ ， ｌ 恒 温水浴 锅 （ 上海 实验 仪 器厂 ）５ Ｐ７ ，５ ２超速 离 心机
浓度 为 ２ ． 、０ ０ １０ ５ ０ ５ ． 、０
厂） 垂直板 电泳仪 （ ， 北京六一厂） 转移 电泳槽 （ ， 美 国伯乐） 。 １２ 药 物和 制剂 ．
Ｋ Ｐ由广东 天然 药物 研究 与 开发
ｍ Ｌ 的Ｋ ｇ・ Ｐ能促进 ＭＣ Ｔ ． １细胞 增殖 生长 ；０ １０ｍｇ ３ ３Ｅ ５ 、０
１ ３ 实验 方 法 ．
小分 子 肽 （ Ｐ 是 应 用本 实验 室 的 中 国发 明专 Ｋ ） 利技 术 （ 开 号 ： Ｎ ０ ０５ ８ ） 公 Ｃ １１ １５ ０ 制备 其相对分子质量为 １９～ １ｕ 具有水溶 ８ ５２ ， 性强 、 生物活性 强 、 结肠 吸收率 高的等特点 。体 Ｊ 内实验 显 示 Ｋ Ｐ能很 好 地 预 防 骨 质 疏 松 ｊ但 其 作 ，
