肾活检病理组织染色
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、常规染色技术（ HE 染色）
苏木素 -伊红染色简称 HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞 核和细胞
内核糖体染成蓝紫色， 伊红是一种酸性染料， 能将细胞质染成红色或淡红色。 HE 染 色可以显示肾
小球的细胞增生、 炎细胞浸润。 还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间 质水肿情况。
（一）需要试剂
①苏木素染液；②1%盐酸乙醇液；③氨水；④ 1%伊红液。
（二） 具体染色步骤
1. 切片常规脱蜡入水。
2. 苏木素染细胞核1〜2 min，水洗。
3. 入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。
4. 氨水返蓝数秒。
5. 流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。
6.1% 伊红染数秒，水洗。
7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，
其他成分呈深浅不同红色。
（三） 注意事项
1. 组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。
2. 伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。
3. 染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
二、特殊染色技术
（一）过碘酸 - 希夫氏染色（ PAS 染色）
PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是 显示糖原和
糖蛋白的基本染色。
1. 需要试剂 ①1%过碘酸；②schiff氏液染；③苏木素染液；④氨水。
2. 具体染色步骤
（1 ）切片常规脱蜡入水。
（2）入 1% 过碘酸氧化 10 〜 15 min ，水洗。
（3）入schiff氏液染10〜30 min，水洗。
（ 4）苏木素染细胞核 1 〜 2 min ，水洗。
（ 5）入 1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。
（ 6）氨水返蓝数秒。
（ 7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。
（ 8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3. 染色结果 PAS 阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。
4. 注意事项
（ 1 ）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
(2) Schiff 氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深，时间过短标本基 底膜着色
淡。
(3) 入 1% 盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本退色。
(4) 染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
(二)六胺银 - 马松染色( PAM-Masson 染色)
PAM-Masson 染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更 为精确。
1. 需要试剂
①1%过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水；⑤ Mass on液；⑥1%亮绿液。
2. 具体染色步骤
(1 )切片常规脱蜡入水。
(2 )入1% 过碘酸氧化10〜15 min，水洗5 min。
(3)入六胺银液72C染30〜50 min，以显微镜下见基底膜呈黑色即可。
( 4)加 2% 氯化金数滴于组织， 5% 硫代硫酸钠洗。
( 5)苏木素染细胞核 1 〜 2 min ， 1% 盐酸乙醇分化，氨水返蓝。
( 6)入 Masson 液约 10 min ， 1% 醋酸洗。
(7)入1% 亮绿5 〜 8 min， 1% 醋酸洗。
( 8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3. 染色结果 基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。
4. 注意事项
( 1 )组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
(2)染色时间与室温和切片厚度有关， 室温低、 切片厚需染色时间长， 反则需染色时间短。
入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。
( 3) 2% 氯化金分化时间要短，时间长容易使银染退色。
( 4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
(三)马松染色( Masson 染色)
Masson 染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾间质纤维化程度。
1. 需要试剂 ①苏木素染液；②氨水；③ Masso n液；④1%亮绿液。
2. 具体染色步骤
( 1 )切片常规脱蜡入水。
(2) 媒染剂(10%重铬酸钾、10%三氯醋酸等量混合)染10〜30 min，水洗。
(3) 苏木素染细胞核1〜2 min，水洗。
( 4)入 1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。
(5 )入Mass on液约10 min，水洗，1% 醋酸洗。
(6) 入2.5%磷钨酸约30 s,水洗，1%醋酸洗。
(7) 入2%橘黄G约2 min，水洗，1%醋酸洗。
(8) 入1% 亮绿5 〜 8 min, 1% 醋酸洗。
( 9)入 100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3. 染色结果 细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。
4. 注意事项
（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（2）入 Masson 液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。
（3）入 1% 亮绿染色时间需要镜下控制，时间长容易覆盖 Masson 液红色。
（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
（四）刚果红染色
在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样
变肾 病的常用染色方法之一。
1需要试剂 ①高锰酸钾一硫酸液；②苏木素染液；③氨水；④碱性刚果红液。 2．具体染色步骤
（ 1）切片常规脱蜡入水。
（2） 高锰酸钾-硫酸混合处理3 min，水洗。
（3） 5%草酸处理3 min，水洗。
（4） 苏木素染核2 min，水洗，蓝化。
（5） 碱性刚果红液染10〜30 min。
（ 6）入 100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3．染色结果 细胞核蓝色，淀粉样物质呈砖红色（图 3-12）。
4．注意事项
（ 1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（ 2）碱性刚果红液染色时间应该镜下控制，染色液现配现用着色好。
（ 4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
