胎儿染色体非整倍体基因检测软件产品技术要求华大基因

低深度测序在检测单细胞染色体微小变异中的应用探索陈大洋;甄贺富;刘萍;邱咏;谢林;刘弘泰;陈芳【摘要】The paper aims to study the application of low-coverage whole genome sequencing in detecting chromosome micro variations of single cell. Using 5 cell lines with positive signal and validated by aCGH as research object,the complete genome of single cell amplified by two commercial kits was sequenced by Hiseq2000 ;then,comparing the results by bioinformatics with those validated by aCGH. Results showed that in preliminary tests,the whole genome amplification(WGA)was successful in the 5 single cells. Following the low-coverage whole genome sequencing,they all showed the expected karyotype. While using the GenomePlex® Single Cell WGA Kit,the overlapping rate of the detection results and aCGH results was more than 80%,but there was 1 false positive signal of about 8 Mb(Megabase)in 1 sample. While using PicoPLEX® WGA Kit,the overlapping rate of the detection results and aCGH results also was more than 80%,and there was no false positive signal in detection results. The results confirmed that the method would detect the copy number variations larger than 7 Mb via the low-coverage whole genome sequencing(0.1 X).%旨在探讨低深度测序在检测单细胞染色体微小变异中的应用。

作者简介:马海霞,女,副主任医师,主要从事产前诊断细胞遗传学研究㊂ ә 通信作者,E -m a i l :h e l i 20042008@163.c o m ㊂㊃论 著㊃D O I :10.3969/j.i s s n .1672-9455.2024.04.017染色体核型分析联合C N V -S e q 检测在高龄孕妇产前诊断中的应用马海霞1,冯丽云2,郭苑青2,何丽梅1ә上海市长宁区妇幼保健院:1.检验科;2.产筛中心,上海200051摘 要:目的 探讨染色体核型分析与全基因组拷贝数变异测序(C N V -S e q)技术在高龄孕妇产前诊断中联合应用的意义㊂方法 对2020年1月至2022年12月该院收治的723例高龄孕妇的羊水细胞染色体核型分析㊁C N V -S e q 检测结果进行回顾性分析㊂结果 723例高龄孕妇中检出染色体异常共29例,异常检出率为4.0%㊂723例高龄孕妇中检出核型异常21例,异常检出率为2.9%,其中染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例;染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例;染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,染色体易位2例;检出C N V -S e q 异常24例,异常检出率为3.3%,其中染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例;染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例;致病性染色体拷贝数变异8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例㊂其中染色体非整倍体异常中染色体核型分析和C N V -S e q 检测结果一致㊂结论 染色体核型分析联合CN V -S e q 检测可提高染色体异常检出率,两种方法各自有独特的优势,可以相互验证,互补不足,染色体核型分析可比较直观地检测出染色体结构变异,而C N V -S e q 可检测出染色体微缺失㊁微重复㊂关键词:染色体核型分析; 全基因组拷贝数变异测序; 高龄; 孕妇; 产前诊断中图法分类号:R 446.9文献标志码:A 文章编号:1672-9455(2024)04-0507-04A p p l i c a t i o n o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s c o m b i n e d w i t h C N V -S e q de t e c t i o n i n p r e n a t a l d i a g n o s i s of e l d e r l y p r e gn a n t w o m e n MA H a i x i a 1,F E N G L i y u n 2,G U O Y u a n q i n g 2,H E L i m e i 1ә1.D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ;2.S c r e e n i n g C e n t e r ,S h a n g h a i C h a n g n i n g Di s t r i c t M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i t a l ,S h a n gh a i 200051,C h i n a A b s t r a c t :O b je c t i v e T o e x p l o r e t h e s i g n if i c a n c e o f t h e c o m b i n e d a p p l i c a t i o n o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a -n a l y s i s a n d w h o l eg e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g (C N V -S e q )i n th e p r e n a t a l di a gn o s i s o f a m n i o t i c f l u i d i n e l d e r l y p r e g n a n t w o m e n .M e t h o d s T h e c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n d C N V -S e q de t e c t i o n r e s u l t s of a m -n i o t i c f l u i d c e l l s o f 723e l d e r l y p r eg n a n t w o m e n a d m i t t e d t o Sh a n g h ai C h a n g n i n g D i s t r i c t M a t e r n a l a n d C h i l d H e a l t h H o s p i t a l f r o m J a n u a r y 2020t o D e c e m b e r 2022w e r e a n a l y z e d r e t r o s p e c t i v e l y.R e s u l t s C h r o m o s o m e a b n o r m a l i t i e s w e r e d e t e c t e d i n 29o f 723e l d e r l y p r e gn a n t w o m e n ,w i t h a n a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e o f 4.0%.A -m o n g 723e l d e r l y p r e g n a n t w o m e n ,21c a s e s w e r e f o u n d w i t h a b n o r m a l k a r y o t y pe ,t h e a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e w a s 2.9%,i n c l u d i n g 13c a s e s of c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y ,i n c l u d i ng 7c a s e s o f t r i s o m y 21,1c a s e o f t r i s o m y 18a n d 5c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y .T h e r e w e r e 3c a s e s o f c h r o m o s o m e m o s a i c i s m ,i n c l u d i n g 2c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e m o s a i c i s m a n d 1c a s e o f a u t o s o m a l m o s a i c i s m.T h e r e w e r e 5c a s e s o f c h r o m o s o m e s t r u c t u r ea b n o r m a l i t y ,i n c l u d i n g 3c a s e s o f c h r o m o s o m e i n v e r s i o n a n d 2c a s e s o f c h r o m o s o m e t r a n s l o c a t i o n .C N V -S e qa b n o r m a l i t i e s w e r e d e t e c t e d i n 24c a s e s ,w i t h a n a b n o r m a l d e t e c t i o n r a t e o f 3.3%,i n c l u d i n g 13c a s e s o f c h r o -m o s o m e a n e u p l o i d y ,i n c l u d i n g 7c a s e s o f t r i s o m y 21,1c a s e o f t r i s o m y 18a n d 5c a s e s o f s e x c h r o m o s o m e a n e u -p l o i d y .T h e r e w e r e 3c a s e s o f c h r o m o s o m e m o s a i c i s m ,i n c l u d i n g 2ca s e s o f s e x c h r o m o s o m e m o s a i c i s m a n d 1c a s e o f a u t o s o m a l m o s a i c i s m.T h e r e w e r e 8c a s e s o f p a t h o g e n i c c h r o m o s o m e c o p y n u mb e r v a r i a t i o n ,i nc l ud i n g1c a s e o f c h r o m o s o m e m i c r o d u p l i c a t i o n a n d 7c a s e s o f c h r o m o s o m e m i c r o d e l e t i o n .T h e r e s u l t s o f c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s a n d C N V -S e q d e t e c t i o n i n c h r o m o s o m e a n e u p l o i d y w e r e c o n s i s t e n t .C o n c l u s i o n C h r o m o -s o m a l k a r y o t y p e a n a l y s i s c o m b i n e d w i t h C N V -S e q d e t e c t i o n c a n i m p r o v e t h e d e t e c t i o n r a t e o f c h r o m o s o m a l a b n o r m a l i -t i e s .E a c h m e t h o d h a s u n i q u e a d v a n t a g e s a n d c a n m u t u a l l y v e r i f y c o m p l e m e n t a r y d e f i c i e n c i e s .C h r o m o s o m a l k a r y o t y pe a n a l y s i s c a n i n t u i t i v e l y d e t e c t c h r o m o s o m a l s t r u c t u r a l v a r i a t i o n s ,w h i l e C N V -S e q ca n d e t e c t c h r o m o s o m a l m i c r o d e -l e t i o n s a n d m i c r o d u pl i c a t i o n s .K e y wo r d s :c h r o m o s o m e k a r y o t y p e a n a l y s i s ; w h o l e g e n o m e c o p y n u m b e r v a r i a t i o n s e q u e n c i n g ; e l d e r -l y ; p r e g n a n t w o m a n ; p r e n a t a l d i a gn o s i s ㊃705㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n ,F e b r u a r y 2024,V o l .21,N o .4高龄孕妇是指年龄ȡ35岁的孕妇㊂孕妇高龄是胎儿染色体异常的重要因素之一[1]㊂胎儿染色体异常可引起胎儿组织㊁器官发育异常等㊂高龄可造成卵子老化㊁卵巢功能衰退,从而增加受精卵或生殖细胞减数分裂时染色体不分离的风险[2]㊂一直以来传统的染色体核型分析技术作为实验室产前诊断的金标准,除了可以检测出染色体数目异常外,还可以检测出大片段的结构异常,但同时也存在耗时㊁耗力㊁培养周期长㊁只能检测5M b以上的异常等缺点[3]㊂近年来,随着二代测序技术的快速发展,低深度全基因组拷贝数变异测序(C N V-S e q)被广泛应用于产前诊断领域,与传统的染色体核型分析技术相比,其有检测范围广㊁精准㊁通量高㊁成本低㊁操作简便等诸多优势,为染色体畸变及染色体拷贝数变异(C N V)检测提供了新的手段,但只能检测总体染色体数目的改变而不能检测结构的重排㊂本研究回顾性分析2020年1月至2022年12月本院723例高龄孕妇的羊水细胞染色体核型及C N V-S e q检测结果,探讨二者在高龄孕妇产前诊断中联合应用的意义,以期为临床医生提供参考依据,现报道如下㊂1资料与方法1.1一般资料选取2020年1月至2022年12月本院产前诊断中心就诊的723例高龄孕妇为研究对象㊂纳入标准:(1)孕妇年龄ȡ35岁;(2)均为单胎妊娠㊂排除标准:(1)既往有不良孕产史;(2)孕期接触过有毒㊁有害物质㊂所有孕妇孕周18~26周,年龄35~44岁,孕妇均签署知情同意书后进行羊膜腔穿刺术,同时进行染色体核型分析和C N V-S e q检测㊂1.2方法1.2.1羊膜腔穿刺 B超定位下严格无菌操作,经腹壁进行羊膜腔穿刺术,每例孕妇均抽取3试管羊水,每管10m L,共30m L,其中2管进行细胞培养染色体核型分析,1管进行C N V-S e q检测㊂1.2.2染色体G显带染色体核型分析2管羊水分装于两支15m L无菌离心管中,1500r/m i n离心10 m i n,留取0.5~1.5m L沉淀,加5m L G i b c o培养基混匀后,进行细胞接种,培养7d后观察细胞是否贴壁,如贴壁进行换液,当贴壁细胞生长旺盛可见5~8个大克隆时,加入10μg/m L秋水仙素60μL,作用3.0~3.5h后收获细胞制片并进行G显带,按照人类细胞遗传学国际命名体制(I S C N2016)标准进行分析诊断,嵌合体通常计数100个细胞,必要时做C带分析㊂1.2.3 C N V-S e q检测抽取10m L羊水,送至华大基因公司完成分析㊂实际检测中主要针对染色体非整倍体变异和100k b以上的C N V,方法如下:按照试剂盒说明书从羊水细胞中提取分离并纯化基因组D N A,并以此作为起始模板,构建D N A文库,进行测序㊂使用比对软件将读序信息与人类参考基因组(G R C h37,U C S C r e l e a s e h g19)进行比对分析,并通过检索I S C A㊁D e c i p h e r㊁C l i n v a r等数据库,参照美国医学遗传学与基因组学学会(A C MG)遗传变异分类标准与指南[4]对检测到的C N V的致病性进行评估㊂结果分为5类:致病㊁可能致病㊁临床意义未明㊁可能良性㊁良性㊂1.3统计学处理采用E x c e l2007软件进行数据处理及统计分析㊂2结果723例高龄孕妇中检出染色体异常共29例,异常检出率为4.0%㊂723例高龄孕妇中,染色体核型分析检出核型异常21例,异常检出率为2.9%,C N V-S e q检测结果异常24例,异常检出率为3.3%;核型异常中包括染色体非整倍体13例,染色体嵌合体3例,染色体结构异常5例;C N V-S e q检测结果异常包括染色体非整倍体13例,染色体嵌合3例,致病性染色体拷贝数变异(p C N V s)8例㊂723例高龄孕妇中检出染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例,其中47,X X X2例㊁47,X Y Y2例㊁47,X X Y1例,染色体核型分析结果与C N V-S e q结果均一致㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果在嵌合比例上均不一致㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,染色体易位2例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果均不一致,其中C N V-S e q检测结果均未见异常㊂见表1㊂723例高龄孕妇中检出p C N V s8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例㊂染色体核型分析结果与C N V-S e q检测结果均不一致,其中染色体核型分析结果均未见异常㊂见表1㊂表1723例高龄孕妇中羊水染色体核型分析异常与C N V-S e q检测结果比较类别染色体核型分析结果C N V-S e q检测结果两种检测结果一致性例数(n)染色体数目异常47,X N,+21s e q[G R C h37]d u p(21p13q22.3)48.13M b一致747,X N,+18s e q[G R C h37]d u p(18p11.32q23)78.08M b一致147,X X X s e q[G R C h37]d u p(X p22.33q28)155.27M b一致2㊃805㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4续表1723例高龄孕妇中羊水染色体核型分析异常与C N V-S e q检测结果比较类别染色体核型分析结果C N V-S e q检测结果两种检测结果一致性例数(n)47,X Y Y s e q[G R C h37]d u p(Y p11.32q12)59.37M b一致247,X X Y s e q[G R C h37]d u p(X p22.33q28)155.27M b一致1染色体嵌合45,X[3]/46,X X[52]s e q[G R C h37]d e l(X p22.33q28)155.27M b嵌合比例19%不一致1 46,X,i(X)(q10)[81]/45,X[19]s e q[G R C h37]d e l(X p22.33p11.21)54.26M b不一致147,X Y,+9[45]/46,X Y[55]s e q[G R C h37]d u p(9)(p24.3q34.3)141.21M b,嵌合比例18%不一致1染色体结构异常45,X Y,d e r(13;14)(q10;q10)未见异常不一致146,X X,i n v(10)(q11.2q23)m a t未见异常不一致146,X Y,t(1;11)(q25;q13)p a t未见异常不一致146,X Y,i n v(2)(p11.2q13)未见异常不一致147,X X+21,i n v(2)(q21q44)未见异常不一致1染色体微重复未见异常s e q[G R C h37]d u p(4q22.1q22.1)不一致1染色体微缺失未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q13.2q13.3)不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(16p12.2p11.2)不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q11.2q11.2)550.3k b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(15q11.2q11.2)1.03M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(6)(q27q27)3.87M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(20)(p12.2p12.2),1.44M b不一致1未见异常s e q[G R C h37]d e l(14)(q12q12),4.69M b不一致13讨论近年来,伴随 三孩 政策的落地,高龄孕妇比例不断增多㊂‘低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识“[5]为C N V-s e q技术在产前诊断中的规范应用提供了指导建议㊂本研究通过回顾性分析723例高龄孕妇产前诊断中胎儿染色体核型分析及C N V-S e q异常检出情况,探讨二者联合检测在高龄孕妇产前诊断中的临床应用价值,为临床医生提供参考依据㊂染色体非整倍体异常可引起严重的出生缺陷,是产前诊断中最为常见的胎儿染色体异常,染色体核型分析与C N V-S e q都可提示胎儿染色体非整倍体异常,二者联合应用可相互验证㊂本研究中723例高龄孕妇中检出染色体非整倍体13例,包括21-三体7例,18-三体1例,性染色体非整倍体5例,染色体核型分析和C N V-S e q检测结果一致,提示染色体核型分析和C N V-S e q都可以准确地检测胎儿染色体的非整倍体异常㊂同时使用两种原理不同的检测技术可以相互验证其结果的准确性,以最大限度地降低缺陷儿的出生,减少漏诊㊁误诊㊂本研究中723例高龄孕妇中检出染色体嵌合3例,包括性染色体嵌合2例,常染色体嵌合1例,但嵌合比例核型与C N V-S e q检测结果均不一致㊂性染色体嵌合中1例核型分析结果为45,X嵌合比例为5.5%,而C N V-S e q检测结果为45,X,嵌合比例为19%,1例核型分析结果为45,X和46,X,i(X)(q10)的嵌合比例分别为19%和81%,而C N V-S e q检测结果为X染色体短臂缺失,1例常染色体嵌合中核型分析结果为47,X Y,+9的嵌合比例为45%,而C N V-S e q检测结果为9号染色体,嵌合比例为18%㊂提示由于染色体核型分析和C N V-S e q原理不同,在染色体嵌合体诊断中及嵌合比例分析中存在差异㊂有研究报道,C N V-S e q联合染色体核型分析可弥补单一检测方法诊断嵌合体出现误诊的不足[6],C N V-S e q可检测低至5%的嵌合体[7]㊂染色体核型分析和C N V-S e q检测结果不一致的标本可通过荧光原位杂交(F I S H)㊁多重连接依赖式探针扩增技术(M L P A)等第3种方法进行验证,为临床提供最准确的依据㊂染色体核型分析可以检测染色体倒位㊁易位及罗伯逊易位的类型,C N V-S e q可以检测有无致病性遗传物质的增多或减少,二者联合应用可明确胎儿染色体大片段重排的类型及意义㊂本研究中723例高龄孕妇中染色体核型分析检出染色体结构异常5例,包括染色体倒位3例,易位2例,而C N V-S e q检测结果未㊃905㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4见异常㊂有研究表明产前诊断标本中染色体罗氏易位和相互易位占比约为0.89%和1.82%[8],若胎儿易位或倒位来自父母双亲之一,且没有总遗传物质的丢失或增加,则不影响胎儿的表型和智力发育[9],孕妇可继续妊娠㊂若新发易位或倒位在发生重排的同时发生其他拷贝数变异,涉及致病性遗传物质的增多或减少,则孕妇需进行相应的遗传咨询决定是否继续妊娠㊂因此,倒位或相互易位的胎儿携带者需联合C N V-S e q检测确定染色体在发生重排的同时总体遗传物质是否发生了改变,以提高产前诊断的精准度,减少误诊㊁漏诊㊂C N V-S e q是一项基于高通量测序技术的基因组拷贝数变异检测,可通过改变分辨率㊁调整测序深度检测不同大小的C N V,其优势主要包括操作简便㊁检测范围广㊁分辨率高㊁周期短㊁所需D N A样本量低[10],WA N G等[11]报道该技术与染色体核型分析比较,对致病性或可能致病的C N V检出率由1.8%提高至2.8%,可靠性和准确性较好,且适用性较好㊂本研究中所用的方法分辨率为100k b,可很好地弥补染色体核型分析分辨率低的不足㊂本研究723例高龄孕妇中C N V-S e q检出p C N V s8例,包括染色体微重复1例,染色体微缺失7例,染色体核型分析均未见异常㊂C N V-S e q检测可额外诊断染色体微缺失/微重复综合征,发病率为1/50000~1/400[12]㊂染色体微缺失/微重复综合征会导致一些复杂临床表型,如智力发育异常㊁生长发育迟缓㊁内分泌异常㊁内脏器官畸形等,是染色体疾病中的常见类型,目前已发现67种染色体微缺失/微重复综合征㊂研究证实C N V-S e q 能明显提高致病性染色体微缺失/微重复的检出率,是检测该种染色体畸变的有效方法,因此,对高龄孕妇的产前诊断联合应用染色体核型分析和C N V-S e q 有很重要的临床意义[13-15]㊂综上所述,在对高龄孕妇实施产前诊断时,染色体核型分析和C N V-S e q检测两种方法各自有独特的优势,联合使用可以相互验证,互补不足,染色体核型分析可比较直观地检测出染色体结构变异,而C N V-S e q可检测出染色体微缺失㊁微重复,有效提高染色体异常检出率,减少遗传缺陷患儿的出生,为临床的产前咨询提供有效㊁可靠的依据㊂参考文献[1]林晓娟,唐中锋,宋筱玉,等.甘肃地区1701例高龄孕妇产前诊断结果临床分析[J].中国优生与遗传杂志,2019, 27(10):1196-1198.[2]张娜,颜梅珍,王元白,等.高龄孕妇羊水染色体核型分析及拷贝数变异分析[J].西南医科大学学报,2021,44(2):144-149.[3]修霞,张胜利,曾杰,等.染色体畸变检测在自然流产绒毛组织染色体核型分析中的应用价值[J].中国综合临床, 2016,32(10):950-953.[4]R I C HA R D S S,A Z I Z N,B A L E S,e t a l.S t a n d a r d s a n dg u i d e l i n e s f o r t h e i n t e r p r e t a t i o n o f s e q u e n c e v a r i a n t s:a j o i n t c o n s e n s u s r e c o mm e n d a t i o n o f t h e A m e r i c a n C o l l e g e o f M e d i c a l G e n e t i c s a n d G e n o m i c s a n d t h e A s s o c i a t i o n f o r M o l e c u l a r P a t h o l o g y[J].G e n e t M e d,2015,17(5):405-424.[5]中华医学会医学遗传学分会临床遗传学组,中国医师协会医学遗传医师分会遗传病产前诊断专业委员会,中华预防医学会出生缺陷预防与控制专业委员会遗传病防控学组.低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识[J].中华医学遗传学杂志,2019,36(4):293-296.[6]邓新娥,黄杏玲,王远流,等.拷贝数变异测序在胎儿先天性心脏病产前遗传学诊断中的应用[J].中国生育健康杂志,2020,31(2):137-142.[7]WA N G Y,C H E N Y,T I A N F,e t a l.M a t e r n a l m o s a i c i s mi s a s i g n i f i c a n t c o n t r i b u t o r t o d i s c o r d a n t s e x c h r o m o s o m a l a n e u p l o i d i e s a s s o c i a t e d w i t h n o n i n v a s i v e p r e n a t a l t e s t i n g[J].C l i n C h e m,2014,60(1):251-259.[8]代鹏,孔祥东.355例产前胎儿羊水细胞易位染色体核型分析及遗传咨询[J].中国优生与遗传杂志,2019,27(5): 560-563.[9]K A I HU I Z,Y A N H,R U I D,e t a l.F a m i l i a l i n t e l l e c t u a ld i s a b i l i t y a s a re s u l t of a d e r i v a t i v e c h r o m o s o m e22o r ig i-n a t i n g f r o m a b a l a n c e d t r a n s l o c a t i o n(3;22)i n a f o u r g e n-e r a t i o nf a m i l y[J].M o l C y t og e n e t,2018,11:18.[10]刘洪倩,刘俊涛,邬玲仟,等.低深度全基因组测序技术在产前诊断中的应用专家共识[J].中华医学遗传学杂志, 2019,36(4):293-296.[11]WA N G J,C H E N L,Z HO U C,e t a l.P r o s p e c t i v e c h r o m o-s o m e a n a l y s i s o f3429a m n i o c e n t e s i s s a m p l e s i n C h i n a u-s i n g c o p y n u m b e r v a r i a-t i o n s e q u e n c i n g[J].A m J O b s t e tG y n e c o l,2018,219(3):287.e1-287.e18.[12]WA T S O N C T,MA R Q U E S-B O N E T T,S HA R P A J,e ta l.T h e g e n e t i c s o f m i c r o d e l e t i o n a n d m i c r o d u p l i c a t i o n s y d r o m e s:a n u p d a t e[J].A n n u R e v G e n o m i c s H u m G e n-e t,2014,15:215-244.[13]汪菁,徐晶晶,陈玲,等.C N V-S e q在高龄孕妇产前诊断中的应用[J].安徽医科大学学报,2019,54(10):1659-1662.[14]唐艳,卢守莲,王珏.染色体核型分析联合C N V-S e q检测在高龄孕妇产前诊断中的临床应用[J].系统医学,2022, 7(15):164-168.[15]冯暄,郝胜菊,张庆华,等.C N V-s e q技术在1395例高龄孕妇产前诊断中的临床应用评价[J].临床检验杂志, 2022,40(3):190-193.(收稿日期:2023-08-07修回日期:2023-12-15)㊃015㊃检验医学与临床2024年2月第21卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y2024,V o l.21,N o.4。

探针锚定聚合测序法）、测序反应通用试剂盒（联合 探针 锚 定 聚 合 测 序 法 ）均 购 自 华 大 基 因 公 司。 Ｍ９１２０ 全 自 动 染 色 体 扫 描 系 统 （北 昂 公 司）； ＢＧＩＳＥＱ５００ 测序平台（华大基因公司）。 方法 １．３ １．３．１ 染色体核型分析 抽取孕妇羊水 ４０ ｍＬ，取 其中 ２０ ｍＬ 进行常规羊水细胞培养，另外 ２０ ｍＬ 用 于全基因组测序；于抽羊水当日分别采集胎儿父母 的外周血各 ３ ｍＬ，按照染色体制备常规操作规 程［８９］收获细胞、制片及 Ｇ 显带，采用 Ｍ９１２０ 全自动 染色体扫描系统对已显带的羊水和外周血玻片标本 进行扫描，并用配套的染色体图像分析系统（北昂 公司）对胎儿及父母的染色体核型进行分析，结果 描述 按 照 人 类 细 胞 遗 传 学 国 际 命 名 体 制 （２０１３ ） 进行。 １．３．２ 羊水细胞全基因组测序 另取 ２０ ｍＬ 羊水， 按照 ＭＧＩＥａｓｙ 基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒说明书操作 完成基因组 ＤＮＡ 的提取和建库实验，利用 ＢＧＩＳＥＱ ５００ 测序平台连续单向测序 ３５ 个循环。去除低质 量以及被接头污染的 ，与 ｒｅａｄｓ ＳＯＡＰ 和 Ｈｇ１９ 基因 组序列进行比对。随后通过二项片段化后找到候选 的 ＣＮＶ 片段，经过设定的阈值对于候选的 ＣＮＶ 进 行阈值过滤，得到最终的 ＣＮＶ 结果［１０］。
·临床检验技术研究·
熊进，彭海英，张昌军，刁红录，闫旭（湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心，湖北十堰 ） ４４２０００
摘要：目的
（ ， ） （ ， ） 。 对 例无创产前检测 提示为 的孕妇进行产前诊断 １
ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｔｅｓｔｉｎｇ ＮＩＰＴ
ｄｅｌ ５ｑ１５２１．３ １３．４３Ｍ

2017年无创产前诊断（NIPT）行业分析报告2017年8月出版文本目录1、NIPT 受益测序工具发展，技术不断完善 (4)2、NIPT 市场仍处于高速发展期 (7)2.1、我国 NIPT 市场逐步放开 (8)2.2、产妇年龄上升推动 NIPT 需求 (9)2.2.1、唐氏综合征 (11)2.2.2、爱德华氏综合征 (12)2.2.3、帕陶氏综合征 (13)3、从 NIPT 到大众基因测序 (15)4、国内 NIPT 公司高速发展 (18)4.1、华大基因 (18)4.2、贝瑞和康 (19)图表目录图表 1：NIPT 技术原理 (5)图表 2：NIPT 可以对大片段基因缺陷进行量化分析 (5)图表 3：基因检测成本以指数级别下降 (6)图表 4：NIPT 全球市场仍维持高速增长 (8)图表 5：二胎政策或继续提振国内 NIPT 需求 (9)图表 6：近年我国孕妇死亡率变化 (10)图表 7：唐氏患者预期寿命低于正常人 (11)图表 8：唐氏婴儿风险随年龄增加明显上升 (11)图表 9：三种综合征均与产妇年龄有密切关系 (12)图表 10：美国产妇呈高龄化趋势 (14)图表 11：国际测序仪厂家集中度较高 (15)图表 12：测序业务是 Illumina 高速增长的基础 (16)图表 13：单细胞个体化检测是 Illumina 的新方向 (17)图表 14：华大基因 BGISEQ-500 测序仪 (18)图表 15：华大基因供应商变化 (18)图表 16：贝瑞和康 NextSeqCN500 测序仪 (20)图表 17：贝瑞和康供应商相对集中度较高 (20)表格 1：部分常用孕期检查对比 (4)表格 2：NIPT 诊断基础获得临床追踪认可 (6)表格 3：北美地区主要 NIPT 公司介绍 (7)表格 4：NIPT 相关政策梳理 (9)表格 5：NIPT 效果横向对比 (13)表格 6：Illumina 近年并购情况一览 (16)表格 7：部分国内 NIPT 创新公司一览 (21)。

1.ACT活化凝血时间检测仪技术要求
2.比浊仪技术要求
3.病原体多重核酸基因分析仪技术要求
4.胶体金免疫层析分析仪技术要求
5.脉冲场电泳系统技术要求
6.核酸扩增仪技术要求
7.全自动核酸工作站技术要求
8.全自动核酸提取仪技术要求
9.全自动核酸提取仪技术要求
10.全自动快速核酸提取仪技术要求
11.移液式全自动核酸提取仪技术要求
12.全自动尿液化学分析工作站技术要求
13.全自动糖化血红蛋白分析仪技术要求
14.全自动血型分析仪技术要求
15.全自动血液细胞分析仪技术要求
16.手持式血液分析仪技术要求
17.推片染色机技术要求
18.血沉仪技术要求
19.血球流水线技术要求
20.阴道分泌物分析仪技术要求
21.支原体自动加样仪技术要求
22.智能尿液标本管理系统技术要求。

·综述·《中国产前诊断杂志（电子版）》　２０１６年第８卷第２期孕妇血浆游离核酸高通量测序检测胎儿遗传异常殷旭阳１　陈芳１，２　王威３（１．深圳华大基因研究院，广东深圳５１８０８３；２．哥本哈根大学，丹麦哥本哈根２２００；３：深圳华大临床检验中心，广东深圳５１８０８３）【摘要】　孕妇血浆中胎儿源性的游离ＤＮＡ的发现，为无创产前检测（ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｔｅｓｔｉｎｇ，ＮＩＰＴ）奠定了科学基础。

通过对孕妇外周血中的游离ＤＮＡ进行检测，能够以无创的方式分析胎儿的遗传特征，为产前筛查（ｐｒｅｎａｔａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）和产前诊断（ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ）提供了有效的手段。

新一代高通量测序技术（ｎｅｘｔｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ＮＧＳ）的发展及其在临床的广泛应用，使其在孕妇血浆胎儿游离ＤＮＡ检测中的应用成为必然趋势，并推动无创产前检测技术的迅猛发展。

通过孕妇血浆游离ＤＮＡ的高通量测序，可实现胎儿的染色体非整倍体、单基因遗传疾病、微缺失微重复的检测，也可以对胎儿基因组、ＤＮＡ甲基化组以及转录组等信息进行分析。

【关键词】　孕妇血浆；胎儿游离ＤＮＡ；无创产前检测；产前筛查；产前诊断；高通量测序【中图分类号】　Ｒ７１４．５３ 【文献标识码】　Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０１６．０２．０１２基金项目：出生缺陷筛查工程实验室项目［ＪＺＦＮｏ．（２０１１）８６１］ 通讯作者：王威，Ｅ ｍａｉｌ：ｗａｎｇｗ＠ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｃｎ 孕妇血浆中胎儿源性游离ＤＮＡ的发现，为无创产前检测（ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｔｅｓｔｉｎｇ，ＮＩＰＴ）奠定了科学基础。

通过对孕妇外周血中的游离ＤＮＡ进行检测，能够以无创的方式分析胎儿的遗传特征，为产前筛查（ｐｒｅｎａｔａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）和产前诊断（ｐｒｅｎａ ｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ）提供了有效的手段。

CDTS用户手册V 1.02011.06目录1.概要 (2)2.使用CDTS (2)2.1.网页下载 (2)2.1.1登陆系统 (2)2.1.2.下载数据 (4)2.2.使用FTP工具 (7)2.2.1安装FileZilla (7)2.2.2.使用FileZilla (11)3.技术支持 (15)1.概要CDTS是华大基因研究院的数据传输系统，提供给用户下载商业数据。

深圳CDTS访问，香港CDTS访问http://cdts.genomics.hk。

2.使用CDTS有两种方法可以下载CDTS数据，一种通过网页，另一种通过FTP工具。

2.1.网页下载2.1.1登陆系统温馨提示：CDTS不支持google浏览器，使用google浏览器输入用户名和密码验证时会报以下错误，单用户限制进程数为3个，单进程限速为200k。

即单用户可以同时开启3个下载进程，每个进程最高下载速度为200k。

以深圳CDTS为例，香港CDTS过程一样。

打开浏览器，访问，输入用户名和密码（用户名和密码由项目管理专员提供），点击“登录”进入CDTS系统，如下：登陆系统之后，可以看到该账号里的所有数据，如下：2.1.2.下载数据以下载“Loropetalum_chinense_R.Br_Oliv.var.rubrum_YiehBlush.assembly.tar.bz2”这个文件为例，点击该文件右侧对应的“FTPDownLoad”按钮，如下：在紧接着弹出来的窗口点击“保存”，如下：选择保存的路径，点击“保存”，如下：接着数据就开始下载了。

如果你的文件在子目录里面，那么你可以这么操作，点击“Change directory”进入子目录。

接着再选择你要下载的数据，点击“FTPDownLoad”下载就可以了。

2.2.使用FTP工具CDTS不支持断点续传和目录下载，所以推荐使用支持断点续传和目录下载的FTP工具来下载数据，这里介绍的是FileZilla，下载地址/download.php?type=client，下载版本为FileZilla_3.5.0_win32-setup.exe。

·论著·《中国产前诊断杂志（电子版）》　２０１６年第８卷第１期无创产前检测筛查胎儿微缺失微重复综合征阳性病例的临床分析胡芷洋１　高雅１　郭辉２　林琳华１　任景慧１　苏放明１（１．深圳市人民医院，广东深圳　５１８０２０；２．深圳华大基因研究院，广东深圳　５１８０８３）【摘要】　目的　探索无创产前基因检测（ＮＩＰＴ）微缺失微重复综合征（ＭＤ）阳性病例的产前诊断以及咨询方法。

方法　对ＮＩＰＴ筛查ＭＤ阳性的病例进行产前超声检查、遗传咨询并进行有创性产前诊断，送检核型分析以及基因芯片（ＣＭＡ）或者多重连接探针扩增技术（ＭＬＰＡ）检查，验证ＮＩＰＴ的结果，同时抽取双亲血样进行核型分析以及ＭＬＰＡ。

结果　２０１５年１～５月期间送检１１９１例ＮＩＰＴ检查，９例ＭＤ筛查阳性，其中３例ＭＤ筛查阳性病例完成验证检查。

ＮＩＰＴ提示１８ｑ２１．３１ ｑ２３．２３处２３Ｍ缺失的一例病例，经验证为１８ｑ２２．３ ｑ２３处８．６Ｍ的微缺失；另一例ＮＩＰＴ提示９ｐ２４．３ ９ｐ１３．２处３６Ｍ重复的病例，经验证除了该处有３７Ｍ左右重复外，另外还有两处５Ｍ以下的ＭＤ。

１例证实为假阳性，该假阳性病例母亲血测序发现有微重复。

两名证实ＭＤ病例超声检查均发现异常，孕妇选择引产。

假阳性病例继续妊娠。

结论　ＮＩＰＴ可以筛查较大片段的缺失和重复，但对较小的缺失或重复检出能力欠佳，母体背景可以干扰结果。

应建议筛查阳性的病例接受有创性产前诊断取样进行验证。

【关键词】　无创产前检查；微缺失微重复综合征；产前诊断【中图分类号】　Ｒ３９４．３ 【文献标识码】　Ａ犇犗犐：１０．１３４７０／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｐｄ．２０１６．０１．００６ 通讯作者：苏放明，Ｅ ｍａｉｌ：ｓｆｍｌｘｑ＠１６３．ｃｏｍ【犃犫狊狋狉犪犮狋】　犗犫犼犲犮狋犻狏犲　Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅａｃｌｉｎｉｃａｌｐｒｅｎａｔａｌｍａｎａｇｅｍｅｎｔｆｏｒｃａｓｅｓｗｉｔｈａｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｓｕｌｔｏｆｍｉ ｃｒｏｄｅｌｅｔｉｏｎ／ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ（ＭＤ）ｂｙｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｔｅｓｔ（ＮＩＰＴ）．犕犲狋犺狅犱　ＩｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｗａｓａｒｒａｎｇｅｄｆｏｒｃａｓｅｓｗｉｔｈｐｏｓｉｔｉｖｅＭＤｓｃｒｅｅｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓａｆｔｅｒｄｅｔａｉｌｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｆｅｔａｌａｎｏｍａｌｙｓｃａｎａｎｄｇｅｎｅｔｉｃｃｏｎｓｕｌｔａｔｉｏｎ．Ｂｏｔｈｔｈｅｆｅｔａｌａｎｄｐａｒｅｎｔａｌｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｅｎｔｆｏｒｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅｘｌｉｇａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｂｅａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＭＬＰＡ）／ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｍｉｃｒｏａｒｒａｙａｎａｌｙｓｉｓ（ＣＭＡ）．犚犲狊狌犾狋狊　Ａｔｏｔａｌｏｆ１１９１ＮＩＰＴｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈ９ｃａｓｅｓｓｃｒｅｅｎｅｄｐｏｓｉｔｉｖｅｆｏｒＭＤ．２ｏｆ３ｃａｓｅｓｗｈｉｃｈｕｎｄｅｒｗｅｎｔｔｅｓｔｉｆｙｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｏｈａｖｅＭＤ，ａｎｄｔｗｏｍｏｒｅＭＤｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｏｎｌｙｂｙＣＭＡｉｎｏｎｅＭＤｃａｓｅ，ｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｏｔｈｅｒｏｎｅｗａｓｆａｌｓｅｐｏｓｉｔｉｖｅ．Ｔｈｅｍａｔｅｒｎａｌｓａｍｐｌｅｏｆｔｈｅｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅｏｎｅｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｈａｖｅｍｉｃｒｏｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｂｙｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＴｈｅｔｗｏｃｏｎｆｉｒｍｅｄＭＤｃａｓｅｓｔｅｒｍｉｎａｔｅｄｔｈｅｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓｗｈｅｒｅａｓｔｈｅｆａｌｓｅｐｏｓｉｔｉｖｅｏｎｅｃｏｎｔｉｎｕｅｄ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀狊　ＮＩＰＴｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓａｓｃｒｅｅｎｉｎｇｔｏｏｌｔｏｄｅｔｅｃｔＭＤｗｉｔｈａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｌａｒｇｅｆｒａｇｍｅｎｔｂｕｔｉｔｓａｂｉｌｉｔｙｔｏｄｅｔｅｃｔｓｍａｌｌ ｓｉｚｅｄＭＤｉｓｌｉｍｉｔｅｄａｎｄｃａｎｂｅａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｍａｔｅｒｎａｌｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｏｃｏｎｆｉｒｍｄｉａｇｎｏｓｉｓｉｎｐｏｓｉｔｉｖｅｃａ ｓｅｓ．【犓犲狔狑狅狉犱狊】　ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｔｅｓｔｉｎｇ；ｍｉｃｒｏｄｅｌｅｔｉｏｎ／ｍｉｃｒｏｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ；ｐｒｅｎａｔａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ 新一代测序技术（ＮＧＳ）快速发展，基于产前无创检测技术（ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｐｒｅｎａｔａｌｔｅｓｔｉｎｇ，ＮＩＰＴ）检测胎儿２１ 三体、１８ 三体和１３ 三体综合征已成为临床产前筛查的重要部分，其临床价值受到广泛肯定。

表1.主要体外诊断方法及优缺点
资料来源：长江证券研究部
表3：二代基因测序在生育健康领域的三大应用
表4：非整倍体遗传病常用检测技术比较
表5：国内主要体外诊断实验室对比
资料来源：产业网，长江证券研究部
表6：国内主要检测公司以无创产检及个体化用药基因检测为主 检测公司
婚前&孕前检测
人工受孕植入检查 无创产检
新生儿筛查
个体化用药基因检测 易感基因检
测 贝瑞和康 ●
● ● 诺禾致源 ● ● ● ● ● 千年基因 ● ● ● ● ● 博鳌木华 ● ● 达安基因 ● ● 资料来源：各公司网站，长江证券研究部。

临床基因扩增技术规范指南下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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基因测序仪：生命密码“翻译机”《圣经》中记载道，神用6天创造出了宇宙万物。

第6日，耶和华神用地上的尘土造人，将生气吹在他鼻孔里，他就成了有灵的活人，名叫亚当。

然而，只有单纯性别的人类是无法繁衍后代的，上帝便拿掉男人的一根肋骨，创造了女人夏娃，使人类有了两性，才有了繁衍的可能。

这是西方上帝造人的过程。

同样，在中国上古神话传说的其中一个版本里，也有创世女神女娲。

相传，她以泥土仿照自己抟土造人，创造并构建了人类社会，又替人类立下了婚姻制度，因此被后人奉为“神媒”。

从神话到现实，人类从未停止对生命起源之谜的探索。

关于生命的终极追问是：我们到底从何而来？这也是科学家们最想破解的难题。

1871年，达尔文在《物种起源》中首次提出“生物演化论”，世界上现存的数百万个物种，是从大约30多亿年前的原始生命开始不断演化的结果。

之后，在其另一部伟大著作《人类的由来及性选择》中，达尔文又提出“人猿共祖”的观点。

科学家根据基因序列推算出，人类与现存的最近亲缘物种黑猩猩大约分化于500万年前。

地球上现存70多亿人最近的共同祖先，可以追溯到大约30万年前。

中国民间流传着“同姓的人500年前是一家”的说法。

的确，我们彼此之间都有不可思议的相似之处。

若把我们自己的基因与其他任何人的基因相比较，平均来说，都有99.5%或更高的相似度。

当然，正如我们看到的，除了高度相似的基因以外，人与人之间也会存在一些与生俱来的差别，比如皮肤和眼睛的颜色，这些都是由基因控制的。

司法人员正是利用这一点进行断案。

他们可以根据毛发、血液等痕迹，通过基因检测技术来确认犯罪嫌疑人的身份。

我们之所以能够推算人与黑猩猩的分化时间，司法人员之所以能够鉴别犯罪嫌疑人的身份，实际上都是靠检测一段长长的生物大分子——DNA来实现的。

DNA的基本组成单元含四种核苷酸，分别用A、T、C、G四个字母表示，基因信息的关键就在于DNA序列中A、T、C、G的完整排列顺序。

自20世纪70年代以来，基因测序技术已经成为打开基因宝藏的金钥匙，帮助我们揭开了无数令人惊叹的生命奥秘。

因检 测 手 段 的应 用 ， 可 以更 好地 完 善 中 国出 生 缺 陷 的预 防工 作 。
作者单位 ： ２ ０ １ ２ １ ３ 上 海 华大 基 因科技 有 限公 司 （ 曹建军， 方
深圳华大基因研究院 （ 杨焕 明） 通信作者 ： 杨焕 明． Ｅ — ｍａ ｉ ｌ ： ｙ ａ ｈ ｇ ｈ ｍ＠ｇ ｅ ｎ ｏ ｍｉ ｃ ｓ ． ｏ ｒ ｇ ． ｅ ｎ
Ｎ Ｇ Ｓ （ Ｎ ｅ ｘ ｔ — ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｇ ）
（ ＇ ， Ｉ ｎ ｔ Ｒｅ ｐｒ ｏ ｄＨｅ ａ ｈ ｈ ／ Ｆ ａ ｍＰ ｌ ｎ， ａ ２ ０ １ ３， ３ ２： ４１ ５ — ４１ ８ ）
出生缺陷是指婴儿 出生前发生的身体结构 、 功 能或代谢异常。出生缺陷可 由染 色体 畸变 、 基 因突 变等遗传因素或环境因素引起 ， 也可 由这两种 因素 交互 作用或其他不 明原 因所致 ，通 常包括先天 畸 形、 染 色体异常 、 遗传代谢性疾病 、 功能异常 ， 如盲 、 聋和智力障碍等。基因组学是研究生物基因组的组
Ｈｕ ａ ｎ — ｍ ， Ｂ Ｇ Ｉ － Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ ，Ｓ ｈ ｎｇ ａ ｈ ａ ｉ ２ ０ １ ２ １ ３ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ（ Ｃ Ａ０ Ｊ ｉ ａ ｎ ｊ ｕ ｎ ， Ａ ＮＧ Ｆ Ｋ ｉ） ａ ； Ｂ Ｇ Ｉ — Ｓ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｅ ｎ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｚ ｈ ｅ ｎ
３ 新一 代高 通量 测序技 术推 动 了基 因 组学的 发展
遗传性 出生缺陷的预防中可以发挥重要的作用 。
４ ． １ 基 因 组 学 技 术 在 出 生 缺 陷 一 级 预 防 中 的 应
用 隐性遗传病的基 因性状是隐性 的， 即只有纯合 子时才显示症状。此种遗传病父母双方均为致病基 因携带者 ， 故多见于近亲婚配者的子女 。子代有１ ／ ４

无创和羊水穿刺的区别，不同点主要有这5种
文章导读
无创和羊水穿刺在功能上有些相似，所以有的人经常会搞混淆，实际上，这两
种方法有着诸多不同，比如安全性不同，准确度不同等等，下面请看权威专家的详细介绍。

一、羊水穿刺
羊水穿刺胎儿染色体检查是经腹壁穿刺抽取羊水后，培养羊水细胞，收获羊水细胞，
制备染色体，进而在显微镜下分析胎儿染色体核型，医务人员可以全面的了解胎儿染色体
的数目和明显结构异常。

但该项检查是有创性的，故有一定几率导致胎儿流产等等风险。

二、无创DNA
无创DNA，准确的名称应该是“母血胎儿游离DNA常见非整倍体检测”，抽取孕妇静脉血后，提取母血中微量的胎儿DNA，利用专门技术检测胎儿罹患21-三体综合征、18三
体综合征和13-三体综合征的风险。

该项技术近两年在国内诸多医院用于临床服务，由于
其具有“无创”的特点，越来越多的孕妇及其家属选择该项检查。

三、羊水穿刺和无创DNA的区别
无创DNA与羊水穿刺有什么区别？专家指出，羊水穿刺属于介入性诊断方法，会使流
产风险提高0.5至1%。

而无创DNA检测方法，相较于羊水穿刺等唐氏高危检测方法，具
有无创、安全、早期、准确等优点。

其具体优势为：。

《胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）》行业标准编制说明一、工作简况1、任务来源高通量测序技术已经广泛的应用于胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测中，不同公司在不同的测序技术平台上开发了胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）。

目前尚无相关的标准对试剂盒的性能及使用进行规范。

项目名称定为：“胎儿染色体非整倍体21三体、18三体和13三体检测试剂盒（高通量测序法）”。

标准起草由中国食品药品检定研究院发起，中国食品药品检定研究院、深圳华大生命科学研究院、广州市达瑞生物技术股份有限公司、北京市医疗器械检验所、博奥生物集团有限公司等单位共同参与撰写。

主要起草人：曲守方等。

2、工作过程本标准于2018年3月形成工作组草案，2018年4月11日在北京召开了工作组草案讨论会，5月30日召开标准研讨会，针对工作组草案和验证方案进行了讨论。

会后在2018年月至月组织企业对标准进行了验证，并形成征求意见稿。

二、标准编制原则和确定标准主要内容1、标准制定的意义、原则染色体非整倍体是指相对于人的正常的46条染色体而言，细胞中的某一条或几条染色体数目增加或减少，与婴幼儿期显著的发病率和死亡率有着密切的关系。

我国新生儿中染色体异常的发病率为1/60，其中21三体（唐氏综合征）、18三体（爱德华氏综合征）和13三体（帕陶氏综合征）是三种最主要常染色体非整倍体疾病，在新生儿中发病率分别为1/(600-800)、1/(3500-8000)和1/(7000-20000) 。

临床上对胎儿这几种病变产前诊断方法主要是通过B超引导下的羊水穿刺，再将羊水细胞培养后进行染色体核型分析。

该技术检测结果准确，但所需时间长，检测过程中还可能导致羊水量骤减而造成胎儿宫内窘迫；另外羊水细胞不易培养，不便于大规模的产前普查。

高通量测序的方法是通过检测孕妇外周静脉全血样本中的胎儿游离DNA，然后对测序信号的生物信息学分析，对21、18和13号染色体所属的DNA 片段数量进行统计，将统计的结果与大量正常样本构成的参考集合相比较，从而获得样品中所含的DNA 片段数量是否存在异常，从而实现对21、18和13三体综合征快速的产前辅助诊断。

２０２１年５月第９期综合医学论坛孕妇外周血胎儿游离ＤＮＡ产前检测临床探讨慕晓琼，王光彦，胡玉楚雄彝族自治州人民医院检验科，云南 楚雄 675000【摘要】目的：探讨孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测(无创DNA)的临床应用。

方法：回顾分析2015年6月至2018年4月本院收治的2603例行无创DNA检测孕妇(全部是单胎)为研究对象。

结合孕妇年龄、血清检查结果、超声筛查信息等将孕妇分为五组。

所有孕妇均进行无创DNA检测，结果不正常者需要实施羊水或脐血穿刺，并进行胎儿染色体核型分析，检查结果是(-)者需要实施电访了解新生儿分娩后的具体状况。

结果：所有孕妇都接受无创DNA检测，发现染色体异常儿是26例，其中：唐氏综合征、爱德华综合征、帕陶氏综合征、性染色体及其它异常者分别是4、2、0、11、9例。

对于这26例孕妇而言，共有15例孕妇进行了侵入性产前诊断。

2例确诊为47，XN，+21；1例为47，XN，+18；1例为47，XXY；1例为47，XXX；1例为45，X；1例为45，X/46，Xi(Y)；2例为其他染色体异常，其余6例为46，XN。

无创结果阴性者电访并没有出现染色体异常儿。

结论：孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测针对胎儿染色体异常的筛查率非常高，具备较强的灵敏性与特异性，作为胎儿染色体非整倍体疾病的产前无创辅助检查具有很好的推广价值。

但仍存在一定的假阳性，且对性染色体异常及染色体微缺失/微重复检出的准确性较低，需结合其他产前诊断方法做出正确诊断。

【关键词】无创DNA产前检测；产前诊断；染色体非整倍体；21-三体综合征[中图分类号]R714.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)09-0237-03 Clinical application of Prenatal Detection of Fetal Free DNA in Peripheral Blood of Pregnant Women MU Xiao-qiong, WANG Guang-yan, HU Yu (Medical Laboratory Department, People’s Hospital of Chuxiong Yi Autonomous Prefecture, Chuxiong Yunnan675000, China)[Abstract] Objective: To explore the clinical application of prenatal detection of fetal free DNA in peripheral blood of pregnant women(non-invasive DNA). Methods: 2603 pregnant women (all singletons) with noninvasive DNA detection in our hospital from June 2015 to April 2018 were retrospectively analyzed. The pregnant women were divided into 5 groups according to their age, serum examination results and ultrasound screening information. All pregnant women underwent non-invasive DNA testing. If the results were abnormal, amniotic fluid or cord blood puncture should be carried out, and fetal chromosome karyotype analysis should be carried out. If the examination result is (-), telephone interview should be carried out to understand the specific situation of newborns after delivery. Results: All pregnant women underwent non-invasive DNA testing, and 26 cases of chromosomal abnormalities were found, including 4, 2, 0, 11 and 9 cases of Down’s syndrome, Edwards syndrome, padao’s syndrome, sex chromosome and other abnormalities. For these 26 pregnant women, a total of 15 pregnant women had invasive prenatal diagnosis. 2 cases were diagnosed as 47, xn, + 21; 1 case was 47, xn, + 18; 1 case was 47, XXY; 1 case was 47, XXX; 1 case was 45, X; 1 case was 45, X / 46, Xi (y); 2 cases were other chromosome abnormalities, the remaining 6 cases were 46, xn. No chromosomal abnormalities were found in those with negative results. Conclusion: Prenatal detection of fetal free DNA in peripheral blood of pregnant women has a high screening rate for fetal chromosomal abnormalities, with strong sensitivity and specificity. As a non-invasive prenatal auxiliary examination of fetal chromosomal aneuploidy diseases, it has a good promotion value. However, there are still some false positive, and the accuracy of re detection of sex chromosome abnormality and chromosome microdeletion / duplication is low, so it is necessary to make a correct diagnosis combined with other prenatal diagnosis methods.[Key words] DNA non-invasive prenatal detection; Prenatal diagnosis; Chromosomal aneuploidy; Trisomy 21中国是出生残障胎儿的高发国家之一，其概率一般是5.7 %。

孕妇血浆中胎儿游离DNA测序在无创性产前检测中的应用杨灿锋;吴晓【期刊名称】《实用妇产科杂志》【年(卷),期】2015(031)011【摘要】目的:探讨孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序(DNA测序)在无创产前检测中的应用价值.方法:对7561例唐氏筛查高风险孕妇行DNA测序,并行羊水细胞染色体核型分析确诊.结果:在7561例孕妇中,DNA测序异常40例,羊水细胞核型结果异常37例,DNA测序误诊3例.其中DNA测序检测到21-三体高风险25例,羊水细胞核型确诊24例;18-三体均为12例.DNA测序对于21-三体检测的敏感性和特异性分别为100.00％和99.98％,18-三体检测的敏感性和特异性均为100.00％.DNA测序的假阳性率为0.04％,假阴性率为0.结论:孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序是检测21和18-三体一种敏感性高和特异性强的新方法,在无创产前检测中有重要的实用价值.【总页数】4页(P866-869)【作者】杨灿锋;吴晓【作者单位】南京医科大学附属无锡妇幼保健院,江苏无锡 214002;深圳华大基因研究院,广东深圳518000【正文语种】中文【中图分类】R714.5【相关文献】1.第二代测序技术在检测母血浆胎儿游离DNA中的应用研究 [J], 徐冠英2.孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用 [J], 赵光坚3.应用孕妇血浆胎儿游离DNA进行无创产前检测的研究 [J], 叶燕绸;章钧4.孕妇外周血胎儿游离DNA高通量测序在产前非整倍体核型遗传筛查中的应用[J], 张燕; 王亿; 缑灵山; 王鹏; 方媛; 王传霞; 王娜; 索峰; 顾茂胜5.应用母血浆中胎儿游离DNA进行无创性产前诊断的临床分析 [J], 奉淼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。