缓冲液离子强度对电泳速度的影响

R
CH2-CH2 NH (CH2-CH2 NH )n 2-CH2 N CH CH2 CH2
CH2
CH2 COOH
加成度不同的混 合物，分子量大 小不同，胺基和 羧基的比例不同 。
COOH

两性电解质载体是IEF-PAGE中最关键的试剂， 它直接影响pH梯度的形成及蛋白质的聚焦。

因此，要选用优质两性电解质载体，在凝胶中， 其终浓度一般为1％～2％。


3、点样
4、安装装置
5、电泳：电场强度为10~25V/cm,0.5~2h.
6、显色:染色、漂洗、检测
醋酸纤维素薄膜电泳装置
醋酸纤维素薄膜电泳的应用：
医学上，常用于分析血清蛋白、胎盘球蛋白，
其优点是简便迅速，便于保存照相，比纸电
泳分辨率高。
特点：由于介质的孔径度大，没有分子筛效 应，主要靠被分离物的电荷多少进行分离。

2、影响迁移率(电泳淌度)的因素

1）．电场强度 是指每厘米的电位降，也称电位梯度
(电势梯度)。电场强度越高，则带电颗粒泳动越快。根据 电场强度的不同，电泳可分为两种。

(1)常压(100～500 V)电泳 其电场强度为2～10 V／cm。 分离时间较长，从数小时到数十小时，适合于分离蛋白质 等大分子物质。 (2)高压(2000～10000 V)电泳 其电场强度为50～200V／ cm，电泳时间很短，有时只需几分钟。多用于分离氨基酸、 多肽、核苷酸、糖类等小分子物质。

目前，电泳技术已成为生物化学与分子生物学以及与其密 切相关的医学、农、林、牧、渔、制药及某些工业分析中 必不可少的手段。
22.2 电泳过程基础

一、电泳过程原理 1、自由溶液中的电泳过程 当一个球形带电颗粒在黏性介质中受到电场的作用而迁 移时，所受的作用包括电场力和摩擦阻力。在自由溶液 中摩擦阻力服从Stocks定律。当电场力与摩擦阻力达 qE 到平衡时颗粒做恒速迁移，从而导出：v 从上式可知，颗粒电泳迁移速度v与电场强度E和带电 颗粒的净电荷量q成正比，而与颗粒半径r和介质黏度η 成反比。 带电颗粒在电场中迁移速的不同是电泳分离的基础。

实验二醋酸纤维膜凝胶电泳分离血清蛋白质目的：1.掌握醋酸纤维膜电泳的基本原理及其临床意义2.熟悉电泳仪器的使用和操作电泳（一）原理带电的颗粒在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳。

生物分子都带电荷，其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质（溶液）的pH及其组成。

当溶液的pH小于等电点pH时,蛋白质将带有正电荷,在电场中作为一个正离子移动。

当溶液的pH大于等电点pH时,蛋白质将带有负电荷,在电场中作为一个阴离子移动。

COO-COO-COOH ╱+ H +╱+ H +╱Pr ←————→Pr ←————→Pr ╲+ OH-╲+ OH-╲NH 2NH 3+NH 3+PH>PI PH=PI PH<PI电泳用于分离物质的原理：以生物大分子为例阐明电荷来源：（二）电泳的分类按支持介质的不同可分为：⑴纸电泳（Paper electrophorisis）⑵醋酸纤维薄膜电泳（Cellulose Acetate electrophoresis）⑶琼脂凝胶电泳（Agar Gel electrophoresis）⑷聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel electrophoresis）（PAGE）⑸SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）。

按支持介质形状不同可分为：⑴薄层电泳；⑵板电泳；⑶柱电泳（三）电泳的影响因素1.待分离大分子的性质：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大；但是pH过高或过低引起蛋白变性，缓冲液通常要保持一定的离子强度；强度过低，则缓冲能力差，不易维持PH恒定，离子强度过高，在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），降低了蛋白质的带电量，使电泳速度减慢。

一般所用离子强度为0.02-0.2之间。

生物医学实验知识点生物医学实验知识点三篇生物医学实验篇一：生物医学综合实验报告生物医学综合实验报告学院（系）：年级：学号：学生姓名：实验一脉搏信号采集功能I.实验目的1.掌握检测脉搏传感器特性和使用方法。

2.掌握正向、反向放大电路的应用。

3.掌握脉搏测量的硬件电路原理。

4.掌握表征脉搏参数波形及特征点的识别方法。

II.实验内容通过脉搏传感器将信号外接进入本系统，检测人体脉搏信号经单片机处理以后，其信号波形可以LCD上实时显示、或者由PC显示。

拓展内容：对输入的脉搏信号进行处理，计算脉率。

III.实验器材1.示波器2.脉搏传感器IV.实验步骤脉搏功能测试电路布局如下：1.电路的调试：I.第一级运放的调试与计算：把示波器的探头一端与E20连接，另一端接GND。

通电，不接外部传感器，观察示波器显示的信号。

如信号不在“0V”时，通过调节旋转电位器RP5，同时观察示波器显示的信号的变化，直至示波器的信号在“0V”时，停止调节电位器RP5。

之后，关电取下示波器的探头；II.低通的选择与计算：此脉搏功能模块在低通滤波部分设置了“10Hz低通滤波”“1KHz低通滤波”两大部分，可以通过连线选择其中的一种。

选择操作如下：a.10Hz低通滤波：第一、把示波器的探头一端与E21连接，另一端接GND；第二、通过实验导线把P1与P2相连接；第三、通电；第四、脉搏传感器与J1正确连接。

观察示波器显示的波形。

b.1KHz低通滤波：第一、把示波器的探头一端与E22连接，另一端接GND；第二、通过实验导线把P1与P3相连接；第三、通电；第四、脉搏传感器与J1正确连接。

观察示波器显示的波形。

III.放大倍数的调试与计算：此脉搏功能模块的放大倍数是通过旋转电位器RP7来实现的。

在I、II的基础上来实现以下功能。

选择操作如下：第一、把示波器的探头一端与E23连接，另一端接GND；第二、根据低通滤波来决定具体的连线。

选择了“10Hz低通滤波”，通过实验导线把P4与P6相连接；选择了“1KHz低通滤波”，通过实验导线把P5与P6相连接。

DNA电泳常见问题分析DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。

3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。

7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。

8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。

9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。

沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。

10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。

11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。

在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。

12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。

胶聚合时间长可能是TEMED失效了，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。

一个让PAGE胶很快聚合的方法：不要先配AP（过硫酸铵）溶液，因为AP很容易变质。