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2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与D owexXG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用What man 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液100mmo l/L Tris·HCl(6.8)200mmo l/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
2．测序凝胶加样缓冲液98%去离子甲酰胺10mol/L EDTA(pH8.0)0.025%二甲苯青FF0.025%溴酚蓝甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。
不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
3．常用的电泳缓冲液说明：①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。
但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。
目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
4．2×SDS凝胶加样缓冲液100mmol/L Tris·HCl(6.8)200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2%溴酚蓝20%甘油不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
5．凝胶加样缓冲液使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。
溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2. 2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。
在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
电泳缓冲液的配制和琼脂糖凝胶的配制常见的电泳缓冲液为TAE缓冲液（三乙酸-乙酰胺-乙酸缓冲液）和TBE缓冲液（硼酸-三乙酸-乙酰胺缓冲液）。
下面以TAE缓冲液为例，介绍一种常见的配制方法：所需试剂及材料：1.TAE缓冲液粉末2.蒸馏水3.磷酸氢二钠（NaH2PO4）4. 乙酸（Acetic acid）5. 乙酰胺（Amp-urea）6.称量器具7.搅拌器8.常温（25°C）高精度pH计配制步骤：1.根据实验需要，计算所需配制的缓冲液的体积。
2.准备用于配制的容器，并将其清洗干净。
3.称取相应质量的TAE缓冲液粉末，加入到容器中。
4.加入适量的蒸馏水，将粉末溶解均匀。
5.将NaH2PO4（磷酸氢二钠）溶解在蒸馏水中，搅拌至溶解均匀。
6.加入乙酸和乙酰胺，搅拌均匀。
7.使用pH计测量溶液的pH值。
8.如果pH值不在所需范围内（通常为8.0），可以加入适量的乙酸或乙酰胺进行调节，直到达到所需pH值。
9.最后，使用蒸馏水将溶液体积补足至所需配制的总体积。
琼脂糖凝胶的配制方法：琼脂糖凝胶是一种常用的电泳试剂，用于分离DNA、RNA或蛋白质等生物大分子。
它的主要成分是琼脂糖（Agarose），其配制方法如下：所需试剂及材料：1.琼脂糖粉末2.TAE或TBE缓冲液3.电泳仪4.中性漂洗液（例如盆子中洗涤剂）5.温度计6.凝胶模具7.干净容器配制步骤：1.准备用于配制琼脂糖凝胶的容器，并将其清洗干净。
2.根据实验需要，计算所需配制的琼脂糖凝胶的质量。
3.将琼脂糖粉末称取出来并加入容器中。
4.加入适量的TAE或TBE缓冲液，使其覆盖住琼脂糖粉末。
5.将容器密封，并放入微波炉中加热,或者可以使用传统的加热方法，将容器放进加热水浴中进行加热。
6.加热至琼脂糖完全溶解，通常需要3-5分钟。
7.轻轻摇晃或用棒子搅拌溶液，确保溶液均匀混合。
8.将溶液冷却至约55-60°C。
在冷却过程中，可以使用温度计不断监测温度。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl , ,组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
PH值浓HCl约70ml约60ml约42ml4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer , ,组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
1M Tris－HCl Buffer（，，）100ml20ml 500mM EDTA2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
4)3 M 醋酸钠组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至3.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
双向电泳所需试剂配方及器材清单附录Ⅰ溶液配制1. 100 mmol/L PMSF母液PMSF 0.087g异丙醇5ml使用前配制，4℃保存。
2. 10%（w/v）TCA/丙酮提取液TCA 10 g丙酮100 mlPMSF 1mmol/L 1ml母液（用前现加）DDT 0.1%（w/v）0.1g （用前现加）TCA和丙酮使用前配制，棕色瓶中-20℃预冷至少2h。
3. 80%丙酮洗液丙酮80mlddH20 20mlPMSF 1mmol/L 1ml母液（用前现加）DDT 0.1%（w/v）0.1g （用前现加）丙酮和ddH20使用前配制，棕色瓶中-20℃预冷至少2h。
4.水化液尿素7mol/L硫脲2mol/LCHAPS 4%（w/v）DDT 65mmol/L （用前现加）Biolyte (pH3-10) 0.3%（v/v）（用前现加）用容量瓶定容后分装后在-20℃保存，用前室温溶解。
5.蛋白浓度测定（1）1mg/ml BSA配制在1ml水化液中加入0.01g BSA为10x浓缩液，再将其稀释10倍。
（2）考马斯亮蓝G-250溶液100mg G-250溶于50ml 95%乙醇，再加入120ml 85%磷酸，于容量瓶中定容至1L。
室温保存，用前过滤。
（3）标准曲线建立按下表中数值配制建立标准曲线所需的各个溶液对照 1 2 3 4 5 6 BSA水化液（μl）0 10 20 40 60 80 100 水化液（μl）100 90 80 60 40 20 0 BSA浓度（μg/μl）0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1 G-250染液（ml） 5 5 5 5 5 5 56. 1%溴酚蓝母液溴酚蓝1%Tris 50mmol/L用容量瓶定容后在4℃保存。
7. SDS-PAGE 12%分离胶的配制试剂体积（volume）（reagent）30%（w/v）丙烯酰胺（acrylamide）66.7ml和0.8%（w/v）甲叉双丙烯酰胺（bisacrylamide）1.5 mol/L Tris-HCl,pH8.8 40.0mL去离子水（ddH2O）50.1mL10%十二烷基磺酸钠（SDS） 1.6mL四甲基乙二胺（TEMED）35.0μL10%过硫酸氨（APS） 1.6mL共计(Total) 160.0mL8. 12.5% 丙烯酰胺凝胶配制ddH20 62.7ml30% 丙烯酰胺83.3ml1.5M Tris- HCl pH8.8 50ml10% SDS 2ml10% APS 2mlTEMED 35.6μl共计200ml其中APS在加入前配制成溶液后再加入到全部溶液中。
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称量下列试剂，置于1 L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法l.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
4.再向溶液中加入下列试剂。
5.用DEPC处理水将溶液定容至1 L。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺（Spermidine）: 溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺（Spermine）：溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）：将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于9.5ml水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇（DTT）：在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。
1mol/L氯化钾（KCl）：溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至5.2，再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA•2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。
1mol/L HEPES：将23.8gHEPES溶于约90ml的水中，用NaOH调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl：加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCI (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCI配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
4•将溶液定容至1 L。
5.咼温咼压火菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大, 温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10 开E Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量：1 L配制方法：1.量取下列溶液，置于1 L烧杯中。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3) 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 咼温咼压火菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大, 温度每升高1C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
4) 3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M醋酸钠配制量：100ml配制方法：1•称量40.8g NaAc 3H2O (或者24.6g无水NaAc)置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2•加入冰醋酸调节pH值至5.23•加去离子水将溶液定容至100ml4咼温咼压火菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量：1 L配制方法：2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
双向电泳的全套实验步骤及其注意事项本手册向您提供双向电泳实验过程中从样品制备、IEF电泳、胶条平衡、SDS-PAGE、凝胶染色脱色、胶内蛋白质点的切取、胶内胰酶消化以及质谱样品的制备等全部实验步骤，为您的实验提供全流程的帮助。
细胞样品的一般处理步骤1. 吸出培养液，用胰酶消化或细胞刮子收获细胞。
2. 加入PBS溶液，1500ｇ离心10分钟，弃上清。
重复3次。
3. 加入5倍体积裂解液，或按1×106细胞悬于60～100ｕｌ裂解液中混匀。
4. 液氮中反复冻融3次。
5. 加50ug/ml RNase及200ug/ml DNase，在4℃放置15分钟。
6. 15,000转，4℃离心15分钟。
7. 收集上清，分装分装后冻存于－70℃。
组织样品的一般处理步骤1. 碾钵碾磨组织，碾至粉末状。
2. 将适量粉末状组织转移至匀浆器，加入适量裂解液，进行匀浆。
3. 加50ug/ml RNase及200ug/ml DNase，在4℃放置15分钟。
4. 15,000转，4℃离心20分钟。
5. 收集上清，分装后冻存于－70℃。
双向电泳中溶液配制水化上样缓冲液（I）：尿素8M 4.805gCHAPS 4% 0.4gDTT 65mM 0.098g（现加）Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50μl（40%）（现加）溴酚蓝0.001% 10μl（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml；分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。
水化上样缓冲液（II）：尿素7M 4.2g硫脲2M 1.52gCHAPS 4% 0.4gDTT 65mM 0.098g（现加）Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50μl（40%）（现加）溴酚蓝0.001% 10μl（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml；分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。
水化上样缓冲液（III）：尿素5M 3.0g硫脲2M 1.52gCHAPS 2% 0.2gSB 3-10 2% 0.2gDTT 65mM 0.098g（现加）Bio-Lyte 0.2%(w/v) 50μl（40%）（现加）溴酚蓝0.001% 10μl（1% 溴酚蓝）MilliQ水定容至10ml；分装成10小管，每小管1ml，-20℃冰箱保存。
双向电泳实验过程及相关溶液配置一、实验过程1、蛋白质干粉的制备（酚抽法）约1g材料置于液氮中研磨，向研钵中加入4ml提取液，待其熔化后，继续研磨数分钟，转移至离心管中（离心管容量依具体情况而定），加入等体积的pH8.0Tris-饱和酚，涡旋，离心（10000r/min，4℃）10min。
取酚层，加入6倍体积0.1mol/L乙酸铵甲醇溶液，－20℃沉淀2h以上。
离心（15000r/min，4）20min，弃上清液，沉淀用－20℃预冷甲醇洗涤1次，再以丙酮（含2％β－巯基乙醇，－20℃预冷）洗涤2次，－20度干燥，所得干粉置－20度保存待用。
2、样品的溶解取蛋白干粉10mg于1.5ml的离心管中，加入200－250ml裂解液（先加100-200ul左右，用小棒研磨后，再逐次加入余量裂解液，冲洗小棒），振荡1min左右，于35℃水浴2.5小时，15000rpm离心15min，取上清液作为实验备用。
3、Bradford法测蛋白含量1)、将牛血清白蛋白(BSA)配成1mg/ml的溶液贮存于4℃冰箱2)、设7个浓度梯度制作标准曲线，每个梯度设3个重复，依下表加入1mg/ml BSA、Lysis buffer、ddHO。
(均使用10ml离心管)2管号 1 2 3 4 5 6 71mg/ml BSA(ul) 0 10 20 30 40 50 60 Lysis buffer(ul) 20 20 20 20 20 20 20 ddHO(ul) 980 970 960 950 940 930 920 2BSA含量(ug) 0 10 20 30 40 50 603)、每管加入5ml Bradford工作液，摇匀，5min后测波长595nm下的吸光值。
测定过程中，每测完1管，比色皿用95%乙醇冲洗后再用蒸馏水冲洗3次，然后取少量下1管的溶液润洗比色皿2次。
关系的标准曲线方程式：4)、制作BSA含量与OD595Y= aX+b.其中Y为 OD值，X为蛋白含量。
实验常用试剂缓冲液的配制方法实验室中经常使用各种试剂和缓冲液进行实验。
下面我将介绍一些常用试剂和缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液一般有三种类型的配方：PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）、PBST（含Tween-20的磷酸盐缓冲盐溶液）和TBS（三氯甲烷缓冲盐溶液）。
配制PBS缓冲液：-加入适量的8.0g/L氯化钠和0.2g/L磷酸氢二钠到1L去离子水中。
-调整pH值至7.4，采用10M氢氧化钠（NaOH）或者盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xPBS。
配制PBST缓冲液：-配制1xPBS。
- 加入0.1%（v/v）Tween-20。
-混合均匀。
配制TBS缓冲液：-加入2.42g/L三氯甲烷到1L去离子水中。
-加入20g/L三甲基氯化胺到溶液中。
-调整pH值至8.0，采用盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xTBS。
2.毛细管电泳缓冲液毛细管电泳缓冲液的配制方法取决于电泳类型，一般包括凝胶和毛细管电泳。
配制凝胶电泳缓冲液：-加入8g/L琼脂糖和0.4g/L硼酸到1L去离子水中。
-用热板搅拌器加热，搅拌至溶解。
-冷却至室温后，调整pH值至8.3，采用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）。
-用去离子水稀释至所需浓度。
配制毛细管电泳缓冲液：-加入10mM氢氧化钠（NaOH）和1mM二硼酸氢钠到500mL去离子水中。
-调整pH值至9.2，采用盐酸（HCl）。
-加入1mM十二烷基硫酸钠。
-用去离子水稀释至所需浓度。
3.蛋白质含量测定蛋白质含量测定一般采用BCA法、Lowry法或Bradford法。
BCA法配制试剂：-在15mL玻璃试管中加入BCA试剂（提取液A）。
-加入0.1M硫酸（提取液B）。
-混合提取液A和提取液B，即得到试剂。
Lowry法配制试剂：-加入白蛋白标准品和Na2CO3/NaOH缓冲液（A液）到250mL锥形瓶中。
-混合硫酸/磷酸/酒精试剂（B液）。
-将A液倒入B液中混合，待用。
Bradford法配制试剂：-加入试剂A到450mL去离子水中。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
值。
4.将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
3)1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调节pH值至。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低个单位。
4)3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法：1.称量40.8g NaAc·3H2O〔或者NaAc〕置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。
5)PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
实验二凝胶电泳和PCR实验一．凝胶电泳实验器材：电泳槽，电泳仪，制胶板，胶带，微波炉，凝胶成像系统，移液枪实验试剂：琼脂糖，Tris.base，冰乙酸，EDTA，DNA MAKER（D2000 PLUS），实验步骤：1.配电泳液（TAE缓冲液）：称量Tris 24.2g，Na2EDTA.2H2O 1.86g于烧杯中；向烧杯中加入约80ml去离子水，充分搅拌均匀；加入5.71ml的冰乙酸，充分溶解；用NaOH调pH至8.3，加去离子水定容至100mL后，室温保存。
使用时稀释50倍即1×TAE Buffer。
2. 配胶：先用胶带将制胶板两头封严，称量0.9%琼脂糖（即30ml胶加0.27g琼脂糖）凝胶（用电泳液配），一个制胶板约30ml凝胶。
用微波炉溶胶，待冷却一阵加入荧光染料2ul混匀，倒胶，立即插上梳子。
约20分钟后即可用，轻轻拔出梳子，将板放入电泳槽。
3. 点样：将待跑样品加1ul loading buffer点入点样孔，最后点2ul DNA Marker4. 跑胶：连接电泳槽，注意正负极，DNA从负极向正极跑，110V跑30分钟.5. 成像：将胶小心从胶版上拿起，放在紫外灯下照射拍照二．PCR实验PCR体系（20ul）：模板：0.5ul引物：上下游各0.3uldNTP: 2ulbuffer: 2ulrTaq酶：0.25ulddH20：14.7ulPCR条件：94°3min94°30s60°30s 30次72°45s72°10min4°forever实验三. PCR产物纯化：实验试剂：TE缓冲液( 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA(pH 8.0))，酚氯仿异戊醇，NaAc，无水乙醇实验步骤：1. 加约5倍体积的TE缓冲液，混匀2. 加等体积酚氯仿异戊醇，混匀，室温12000rpm离心5min3. 取上清，加1/10体积的3mol/L的NaAc(PH5.2)和2.5倍的冰冷无水乙醇4. -20°冰箱，放置30min以上5. 4°，12000rpm离心5min6. 弃上清，加1ml冰冷的70%乙醇。
双向电泳实验过程及相关溶液配置A．实验过程一、实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。
这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。
二、实验步骤：1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul 裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。
其中每隔10～15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，—80oC保存。
2. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。
取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul, 5ul, 10ul, 15ul, 20ul 的BSA溶解液，另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水（总体积为80ul），然后，各管中分别加入4ml的Bradford液（原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用），摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。
(测量过程要在一个小时内完成)。
例如：编号蛋白量（ul） Buffer(ul) Bradford(ml) OD595值1 0 80 4 02 5 75 4 0.0243 10 704 0.0614 15 65 4 0.0915 20 60 4 0.116Bt4 2 78 4 0.079Bt4 4 76 4转Bt4 2 78 4 0.075转Bt4 4 76 4标准曲线方程式：Y= aX+b.其中Y为 OD值，X为蛋白含量。
a、b通过作图输入数据可知相关系数通过输入数据，作图，软件分析可得OD值测量过程：比色皿用70%的乙醇保存，待用时用双蒸水冲洗，再用无水乙醇冲洗，双蒸水冲洗，再加入待测样品溶液润洗，然后，加入样品，测定OD值。
常用电泳试剂配制方法电泳试剂是在蛋白质或核酸电泳实验中使用的一系列化学试剂。
常用的电泳试剂包括缓冲液、凝胶、加载缓冲液、电泳盐溶液等。
以下是常用电泳试剂的配制方法。
一、缓冲液的配制方法：1.TAE缓冲液TAE缓冲液配方：0.04M缩醛酸，0.001M乙酸，0.001MEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，加入乙酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
2.TBE缓冲液TBE缓冲液配方：0.089M缩醛酸，0.089M硼酸，0.002MEDTA，pH8.3配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.3，加入硼酸和EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
3. Tris-EDTA缓冲液 (TE缓冲液)TE缓冲液配方：10mM缩醛酸，1mMEDTA，pH8.0。
配制方法：将缩醛酸溶解在适量的蒸馏水中，调节pH值为8.0，然后加入EDTA，再用蒸馏水稀释至适量。
二、凝胶的配制方法：1.聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶配方：30%丙烯酰胺，0.8%季铵盐，1M缓冲液，10%过硫酸铵。
配制方法：将丙烯酰胺溶解在适量的蒸馏水中，加入季铵盐，搅拌均匀后加入缓冲液，最后加入过硫酸铵，混合均匀后注射到凝胶板中，等待凝固。
2.熔融琼脂糖凝胶熔融琼脂糖凝胶配方：1%琼脂糖，1×TAE缓冲液。
配制方法：将琼脂糖溶解在适量的蒸馏水中，加热至完全融化，冷却至60-70°C后加入TAE缓冲液，混合均匀后倒入凝胶板中，等待凝固。
三、加载缓冲液的配制方法：1.6×加载缓冲液6×加载缓冲液配方：40%甘露醇，0.25%溴酚蓝，一定量的TAE或TBE缓冲液。
配制方法：先将甘露醇溶解在适量的蒸馏水中，加入溴酚蓝，搅拌均匀后加入适量的TAE或TBE缓冲液，混合均匀后即可。
四、电泳盐溶液的配制方法：1.DNA电泳盐溶液DNA电泳盐溶液配方：1×TAE缓冲液。
三、核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法50×TAE Buffer (pH8.5)组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。
4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×TBE Buffer (pH8.3)组份浓度890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA配制量 1 L配制方法3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。
10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer组份浓度200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA配制量 1 L配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。
2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。
3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。
6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。
7.室温避光保存。
注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。
变黄时也可使用，但变黑时不要使用。
溴乙锭(10 mg/ml)组份浓度10 mg/ml溴乙锭配制量100 ml配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。
2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。
3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。
4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。
Agarose凝胶配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。
2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。
3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。
加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。
小心摇动锥形瓶。
使琼脂糖充分均匀熔化。
此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
