江苏省郑集中学2009—2010学年度高一生物学案
1 与酶有关的实验
（一）、实验操作评价表： 班级____________姓名______________
实验一：探究酶的高效性
试管编号 1号试管 2号试管 评价
H2O2溶液 2ml 2ml
FeCl3溶液 2滴 /
肝脏研磨液 / 2滴
观察气泡释放量
卫生香燃烧情况
结论:
实验二:探究酶的特异性(专一性)
序号 项目 试管 评价
1 2
1 注入可溶性的淀粉溶液 2ml /
2 注入蔗糖溶液 / 2ml
3 注入新鲜的淀粉酶溶液 1ml 1ml
4 注入新配制的斐林试剂 2ml 2ml
5 观察现象
6 结论
实验三:探究温度对酶活性(酶促反应速率)影响
步骤 项目 试管1 试管2 试管3 评价
1 加等量可溶性淀粉溶液 2ｍｌ 2ｍｌ 2ｍｌ
2 控制不同温度条件
（5分钟） 60℃ 沸水 冰水
3 加等量新鲜淀粉酶溶液（各自保温过的） 1ｍｌ 1ｍｌ 1ｍｌ
4 加等量的碘液 1滴 1滴 1滴
5 观察现象
实验四：探究PH对酶活性（酶促反应速率）影响
步骤 项目 试管1 试管2 试管3 评价
1 注入等量的新鲜淀粉酶溶液 1ｍｌ 1ｍｌ 1ｍｌ
2 注入等量不同PH溶液 1ｍｌ蒸馏水 1ｍｌNａOH 1ｍｌHCｌ
3 注入等量的可溶性淀粉溶液 2ｍｌ 2ｍｌ 2ｍｌ
4 在60℃水浴中保温 5分钟 5分钟 5分钟
5 加等量的斐林试剂 2ｍｌ 2ｍｌ 2ｍｌ
6 沸水浴 1分钟 1分钟 1分钟
7 观察实验结果
江苏省郑集中学2009—2010学年度高一生物学案
2 （二）、实验思考讨论题：
⒈在实验一中为什么一定要用新鲜的肝脏研磨液，实验一的自变量是什么？因变量是什么？无关变量有哪些？
⒉如果实验一的两支试管产生的气泡都很少，可能的原因是什么？
一、实验目的
1. 了解酶提取的基本原理和方法。
2. 掌握酶提取过程中的操作技巧。
3. 学习酶活性检测的方法。
二、实验原理
酶是一种生物催化剂，具有高度的专一性和活性。酶提取实验的目的是从生物材料中提取酶，并对其进行纯化和活性检测。酶提取的基本原理是利用生物材料中的酶具有特异性的结合位点，通过合适的溶剂、温度、pH等条件，使酶从生物材料中释放出来。
三、实验材料
1. 生物材料：新鲜菠菜、酵母粉、淀粉酶等。
2. 试剂：Tris-HCl缓冲液、SDS、DTT、EDTA、蛋白酶抑制剂等。
3. 仪器：高速冷冻离心机、低温冰箱、水浴锅、电子天平等。
四、实验步骤
1. 酶提取
（1）取适量新鲜菠菜，用剪刀剪碎，加入适量Tris-HCl缓冲液（pH 7.0），搅拌均匀。
（2）将混合物放入高速冷冻离心机，以4℃、12,000 rpm离心10分钟，取上清液。
（3）加入适量SDS、DTT、EDTA和蛋白酶抑制剂，混匀。
（4）将混合物置于低温冰箱中保存。
2. 酶活性检测
（1）取适量酶提取液，加入适量底物，混匀。
（2）将混合物置于水浴锅中，在特定温度下反应一定时间。
（3）终止反应，加入适量显色剂，混匀。
（4）在特定波长下测定吸光度值，计算酶活性。 五、实验结果与分析
1. 酶提取结果
通过离心分离，成功提取了菠菜中的酶。酶提取液在低温冰箱中保存，待后续实验使用。
2. 酶活性检测结果
通过酶活性检测，得到了酶提取液的活性值。根据实验数据，计算出酶的活性单位。
六、实验讨论
1. 酶提取过程中，选择合适的溶剂、温度、pH等条件对酶的提取效果至关重要。在本实验中，我们选择了Tris-HCl缓冲液作为溶剂，pH 7.0为酶提取的最佳pH值。
2. 酶提取过程中，添加SDS、DTT、EDTA和蛋白酶抑制剂等试剂，可以保护酶的活性，防止酶在提取过程中被破坏。
3. 酶活性检测是评价酶提取效果的重要指标。在本实验中，我们通过测定酶活性单位，对酶提取效果进行了评价。
影响酶活性的因素实验报告
一、实验目的
本实验旨在探究温度、pH 值、底物浓度以及酶浓度等因素对酶活性的影响，从而深入理解酶的作用机制和特性。
二、实验原理
酶是生物体内具有催化作用的蛋白质或 RNA 分子。它们具有高度的特异性和高效性，能够在温和的条件下加速生物化学反应的进行。酶的活性受到多种因素的影响，这些因素通过改变酶的构象或与酶的活性中心结合，从而影响酶与底物的结合以及催化反应的速率。
三、实验材料与设备
1、 实验材料
唾液淀粉酶
3%淀粉溶液
碘液
缓冲溶液（pH 分别为 4、6、8、10）
不同温度的水浴锅（0℃、20℃、37℃、60℃、100℃）
2、 实验设备 试管
移液器
恒温水浴锅
计时器
分光光度计
四、实验步骤
1、 温度对酶活性的影响
取 5 支洁净的试管，编号为 1、2、3、4、5，分别加入 2ml 3%淀粉溶液。
将 5 支试管分别放入 0℃、20℃、37℃、60℃、100℃的水浴锅中预热 5 分钟。
向每支试管中加入 1ml 唾液淀粉酶溶液，摇匀后，在相应温度的水浴锅中保温 5 分钟。
每隔 1 分钟，从各试管中取出 1 滴反应液，滴入碘液中，观察颜色变化，记录反应完全所需的时间。
2、 pH 值对酶活性的影响
取 4 支洁净的试管，编号为 6、7、8、9，分别加入 2ml 3%淀粉溶液。
向 4 支试管中分别加入 1ml pH 为 4、6、8、10 的缓冲溶液。 向每支试管中加入 1ml 唾液淀粉酶溶液，摇匀后，在 37℃的水浴锅中保温 5 分钟。
每隔 1 分钟，从各试管中取出 1 滴反应液，滴入碘液中，观察颜色变化，记录反应完全所需的时间。
3、 底物浓度对酶活性的影响
取 5 支洁净的试管，编号为 10、11、12、13、14，分别加入 1ml、2ml、3ml、4ml、5ml 3%淀粉溶液。
向每支试管中加入 1ml 唾液淀粉酶溶液，摇匀后，在 37℃的水浴锅中保温 5 分钟。
生物化学实验四：酶的激活和抑制作用
指导教师：张继红
一、目的和要求：
① 让学生初步认识酶的性质，了解酶促反应的激活剂与抑制剂；
② 学习检定激活剂和抑制影响酶反应的方法和原理；
二、实验原理：
酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。 某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。
三、实验材料及用具
1、1%淀粉溶液
2、1%氯化钠溶液
3、碘化钾-碘溶液：将碘化钾20g和碘10g溶解在100ml水中，使用前稀释10倍。
4、稀释100倍~200倍的新鲜唾液
5、0.1%硫酸铜溶液
6、0.1%Na2SO4溶液
四、主要步骤：
激活剂和抑制的认识：取4支试管，按下表加试剂：
五、注意事项：
1、激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？） 管号 1 2 3 4
0.1%淀粉（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5
1%CuSO4（ml） 0.5 / / /
1%NaCl（ml） / 0.5 / /
1%Na2SO4（ml） / / 0.5 /
水 / / / 0.5
稀淀粉酶（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5
保温（37℃）10分钟后
KI-I2 2-3d 2-3d 2-3d 2-3d
现 象 2、加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛，使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。
六、作业：
1、试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl-和Cu2+各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？
2、为什么温度对酶的活性具有双重影响？
