玉米细菌性枯萎病和玉米内州萎焉病的酶联免疫-实时荧光+PCR检测

香蕉枯萎和细菌性软腐病菌的多重PCR检测蒲小明;张景欣;沈会芳;孙大元;刘平平;林壁润;杨祁云【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2024(50)1【摘要】香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.cubense和细菌性软腐病菌Dickeya zeae的复合侵染为害给香蕉产业发展带来严重挑战,有必要建立相关病害的多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction, multiplex PCR)检测技术。

本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(F.oxysporumf.sp.cubense race 1,FOC1)基因组contig 438区间(35 631-37 693bp)(GenBank:AMGP01000438.1)和4号生理小种(F.oxysporum f.sp.cubense race 4,FOC4)基因组contig 195区间(4 028-6 126bp)(GenBank:AMGQ01000195.1)存在160 bp插入序列差异设计特异扩增引物FOC-F/-R,同时以香蕉细菌性软腐病菌D.zeae的促旋酶B亚单位基因(the subunit B of gyrase gene)(GenBank:JQ284039)序列设计特异扩增引物gyrB-F/-R。

多重PCR检测结果显示:本技术可在一次PCR扩增反应内同时检测香蕉枯萎病菌1号、4号生理小种和细菌性软腐病菌;多重PCR的灵敏度结果表明:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为0.1 ng/μL,细菌性软腐病菌的灵敏度为103cfu/mL;检测结果稳定可靠。

因此,本研究建立的多重PCR检测方法可有效应用于检测香蕉发病组织中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌,也可用于香蕉种苗和田间土壤带病菌的监测,为香蕉种植保驾护航。

【总页数】9页(P211-218)【作者】蒲小明;张景欣;沈会芳;孙大元;刘平平;林壁润;杨祁云【作者单位】广东省农业科学院植物保护研究所【正文语种】中文【中图分类】S436.681【相关文献】1.香蕉细菌性枯萎病菌实时荧光PCR检测方法的建立2.水稻细菌性条斑病菌和白叶枯病菌的多重PCR检测体系开发3.二氧化氯对香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌的消毒效果研究4.香蕉细菌性枯萎病菌荧光LAMP检测体系的建立5.香蕉细菌性枯萎病菌可视化检测体系的建立与探索因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

2. 植物青枯病(Ralstonia solanaceareum)，各 大洲都有发生，但主要在热带、亚热带及 部分温带地区温暖、酷热、潮湿、多雨的 条 件下严重为害。中国的黄河流域及其南 方各省均有发生，但以长江流域以南为害 最重。
番茄青枯病
3. 植物软腐病，由几种欧文氏菌 (Erwinia)引起的病害，主要为害十字 花科作物，也为害禾本科及其它栽培 植物，世界各国及中国南北方都有发 生。
（E. amylovara）是我国的对外检疫对象。
玉米细菌性枯萎病 (Erwinia stewartii)
6. 黄单胞菌属（Xanthomonas）1939，Dowson
菌体直杆状，0.4-0.7x0.7-1.8m, 单极生鞭 毛；绝对好氧；G-；菌落一般为黄色、光滑或 粘稠；产生黄单胞菌色素（Xanthomonadins）； G+C 63-71mol%。
畸形根据症状、侵染和传播特点 •2、接种实验（如利用菟丝子传染长春花） •3、电镜下观察菌原体 •4、分子生物学技术（如PCR） •5、菌原体可以穿过细菌过滤器 •6、注射四环素以后，初期病害的症状可以隐退消 失或减轻；对青霉素不敏感。
A~B：螺旋形；C：球形
菌体短杆状，0.2-0.5x1.0-4.0m, 单生，无 鞭毛；兼性好气性；G-, 无芽孢；营养要求苛刻， 琼脂上不能生长，需要血清蛋白或焦磷酸铁等 （需要可溶性铁），喜欢在木质部中活动故称 为木质部难养菌（Xylem fastidious bacteria, XFB）。
• 已知仅一种：木质部难养菌（X. fastidiosa）,引
大白菜软腐病 Erwinia carotovora subsp. carotovora
4. 梨火疫病
• Erwinia amylovora (Burrill)Winslow et al.引

植物隔离检疫科检验方法一览表
植物隔离检疫科种苗花卉检疫收费标准
根据国家发展改革委、财政部关于印发的《出入境检验检疫收费办法》（发改价格（2003）2357号）精神和要求，将进出口植物及植物产品检验收费标准（参照执行）公示如下：
植物病毒检疫鉴定： 460元/每样每项；
植物真菌检疫鉴定：185元/每样每项
植物细菌病害检疫鉴定：162元/每样每项
杂草检疫鉴定：66元/每样每项
害虫检疫鉴定：167元/每样每项
线虫检疫鉴定：136元/每样每项
辽宁局检验检疫技术中心
植物隔离检疫科。

方法 ， 最初 以薄层层析法为主 ， 发展到高效液相色谱 法、 微柱法 、 酶 联 免 疫 吸 附 法等 多种 方 法普 遍 应 用 ，
其进 展 与 新 的 化学 检 测 手段 和 新 仪器 的 出现 密 不 可 分 。这 些 新 方 法 、 新 手段 的快 速应 用 ， 为 黄 曲霉 毒 素 的检 测 提 供 了更 广 泛 的选 择 余 地 ，适 应 了不 同 的检 测 目的 和要求 。本 文介绍 了食 品 中黄 曲霉毒 素 Ｂ 一 的
分析时间较短 ， 分析结果也 比较准确 ， 最低检出限可 达到 １ ． ０微 克 ／ 千克 。
３ 酶联免疫 吸附法 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 ）
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法测定黄曲霉毒素时 主要采用间接竞争
酶 联免 疫 吸 附法 ，原 理 是将 黄 曲 霉为进一步加强食品中黄曲霉毒素 Ｂ 。 的控 制提供 参 考 。
检 疫 检 验
玉 米 中 黄 曲霉 毒 素 Ｂ 的 检 测 方 法
衣桂华 ， 崔 迪 ２ 刘加娟 杨金凤 徐俊 文
（ １ ． 黑龙 江省 大庆 市绿 色农产 品监 测 中心 １ ６ ３ ３ １ ６ ， ２ ． 黑龙 江省 大庆 市粮 食质 量检 验监 测 站 １ ６ ３ ３ １ ６ ）
使用以 ５ ０ ％水饱和的三氯 甲烷 ： 环己烷 ： 乙腈 ： 乙醇。 反 相 色 谱 固定 相 为 Ｃ １ ８ ， 流 动 相 为 乙酸 ： 乙腈 ： 异 丙
醇： 水（ １： ５－ ５－ ３ ９） 。样 品 中黄 曲霉 毒 素 Ｂ ｔ 经 提 取、 柱层 析 、 洗脱 、 浓缩 、 薄层分离后 ， 在波长 ３ ６ ５纳 米 紫外 灯 光 下 产生 蓝 色 荧光 ，根 据其 在 薄 层 上 显东 荧 光 的最 低 检 出量来 测 定含 量 。该 方 法分辨 率 很高 ，