下载文档原格式
酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunoassay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。
根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主，以下为各种方法之介绍.三明治法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:1.将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体2.加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结3.洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结4.洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结5.洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。
间接法间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：1.将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原2.加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结3.洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结4.洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗原的含量。
竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：1.将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体2.加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结3.加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
酶联免疫分析法生工121 徐娜酶联免疫分析法是目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，特别是在食品和饲料中有毒有害物质的检测应用极为广泛。
酶联免疫分析法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。
该技术的原理主要有三点：第一、抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍具有其免役活性；第二、抗体或抗原与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性；第三，结合物与相应的抗原或抗体反应后，结合的酶仍能催化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。
酶联免疫法在医药、食品加工业、农牧渔业等领域有着广泛的应用：如乙型肝炎、莱姆病，急性心肌梗死的早期诊断，定量检测内毒素，HIV抗体初筛，SARS 病毒的快速检测；检测食品中的病毒，残留农药，微生物及其其它成分；检测香蕉有关病毒，小麦黄花叶病毒，检测水产品中氯霉素的残留量，禽脑脊髓抗体等。
一、医学临床中的应用医学中，检测各种抗原和抗体，为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提供了特异性、敏感性强的试验基础。
1、乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测：用血清学方法检测肝炎病毒的抗原或抗体，一直受到各级医疗卫生机构检验科室的高度重视。
尤其是对乙型肝炎，甲型肝炎，丙型肝炎的血清学检测，更因为试剂盒的推出而得到广泛开展。
上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检测方法，绝大部分都是酶联免疫分析法。
2、简化莱姆病的诊断：由于在作出博氏疏螺旋体感染诊断前要进行双重测试，因此莱姆病的测试可能花费很长时间。
采用由关键的疏螺旋体抗原决定簇构成的重组蛋白开发出一种新的酶联免疫测定方法。
该测试比最常用的商业全细胞酶联免疫测定法特异，而敏感性相同，并且在20分钟就会产生结果。
3、急性心肌梗死的早期诊断：急性心肌梗死为一多发病，病情严重。
目前对此病的策略是尽早的确诊并迅速积极的治疗。
约有四分之一或更多的患者，在初诊时心电图并不显示典型心肌梗死心电图异常，无Q波。
光度酶联免疫分析法（ELISA）的基本类型及原理1.双抗体夹心法基本原理：①将特异性抗体吸附到固相载体上；②孵育后封板洗涤；③加入含有待测抗原样品，孵育后洗涤；④加入酶标抗体；⑤加入底物显色；⑥测量吸光度。
该法的灵敏度高，特异性强，但提纯免疫球蛋白和制备酶标记物要求技术性强，成本较高。
2.间接法基本原理：①将特异性抗原与固相载体结合；②洗涤；③加待检样本；④洗涤；⑤加酶标抗抗体；⑥洗涤；⑦加底物显色；⑧测量吸光度。
本法制药更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相对应的抗体。
3.竞争法基本原理：①将特异性抗体与固相载体结合；②洗涤、封板；③加待检样本和酶标抗原混合液；④洗涤；⑤加底物显色；⑥测量吸光度。
4.异种动物双抗体夹心法基本原理：①将第一种动物制备的特异性抗体吸附于固相载体上；②加入待测样品；③孵育后洗涤；④加入第二种动物制备的特异性抗体；⑤孵育后洗涤；⑥加入酶标抗体；⑦孵育后洗涤；⑧加入底物显色；⑨测量吸光度。
此法可以用通用的酶标记抗体检验多种病毒，它不仅免去了标记每种抗体，而且灵敏度有所提高。
5.竞争抑制法基本原理：①制备抗体包被的固相、酶标记物和纯化抗原；②待测样本中无特异性抗体时，通过固相抗体-抗原-酶标抗体的反应顺序使底物显色；③待测样本中有特异性抗体时，它和加入的抗原结合，使最终结合到固相上的酶标抗体减少，酶活性减少50%以上便是抑制试验阳性，判定待测标本中有特异性抗体。
6.双夹心法原理:①用抗人IgM包被固相载体②封板洗涤；③加入底物反应。
该法可以排除IgG类抗体的干扰，并避免类风湿因子对检测的影响。
7.抗酶抗体法①基本原理：②用抗原包被固相载体；③孵育后洗涤；④加入待测样本；⑤孵育；⑥加入第二抗体，发生第二次抗原抗体反应；⑦加入抗酶抗体，发生第三次抗原抗体反应；⑧加入酶，发生第四次抗原抗体反应；⑨加入底物显色；⑩测量吸光度。
8.抗原直接包被法原理：①将待测抗原直接包被到固相载体上；②孵育后洗涤；③加入酶标抗体；④孵育后洗涤；⑤加入底物显色；⑥测量吸光度。
