人表皮生长因子(EGF)酶联免疫分析(ELISA)

人表皮生长因子的原理
人表皮生长因子（hEGF）是一种由53个氨基酸组成的小分子多肽，分子量约为6000道尔顿。

它具有稳定的理化性质，如对酸、碱、热等理化因素均较稳定，这与其分子内的三对二硫键有关。

hEGF的作用原理是通过促进创面修复过程中的RNA、DNA和羟脯氨酸的
合成，加速创面组织的生长和上皮细胞的增殖，从而促进上皮的生长。

因此，它能够促进创面快速愈合，尤其对于难愈型创面如糖尿病足、慢性窦道或经久不愈的创面有着独特的效果。

在临床上，表皮生长因子有水剂和凝胶剂两种形式，具体使用要根据患者不同的创面情况来决定。

对于表浅的创面，水溶剂的效果会更好；对于窦道性的创面，建议使用凝胶剂的表皮生长因子。

在过去30年中，有关hEGF及hEGF受体（EGFR）的研究揭示了其在控制正常细胞生长和伤口愈合中的分子机理。

这使得hEGF成为一种新型的治疗手段，具有很好的临床治疗效果。

表皮细胞生长因子生物学及临床应用表皮细胞生长因子（epidermal growth factor，EGF）是一种单链多肽分子，由肝、胃、胰、唾液腺等多种组织分泌，可促进细胞生长、分化及增殖。

EGF的发现者是美国的斯坦利·科恩，他在1978年获得了诺贝尔生理学或医学奖，因为他发现了EGF的结构、功能和生物学机制。

EGF是一种强大的生长因子，其结构以17个氨基酸残基的多肽为基础单元。

EGF的活性位点在C末端的6个氨基酸序列，其特定的3个氨基酸是形成了一个螺旋结构的环，这种环可与其受体结合并诱导某些生物过程。

EGF受体是一种跨膜蛋白，分子量为170 kDa，由核心区、外部区和胞内区三部分组成。

胞外区与EGF结合后，形成受体激活，MAPK信号通路被激活，从而促进了EGF受体与细胞内底物的结合，导致细胞生长分化。

EGF在生物体内具有许多生理作用。

在肝脏、胰腺和胃黏膜上皮中分泌的EGF，能够保持上皮层的完整性，促进上皮细胞的再生和修复；而在淋巴细胞、单核细胞和平滑肌细胞中分泌的EGF能够促进细胞增殖和分化，参与了机体的免疫和炎症反应。

同时，EGF还是神经系统中神经营养因子，能够促进神经细胞的生长和分化，有重要的神经保护作用。

在临床上，EGF的应用范围也越来越广泛。

临床研究表明，EGF能够促进上皮细胞生长和修复，可预防和治疗上皮层损伤、创伤、烧伤等，加速创面愈合、预防瘢痕形成。

EGF的应用还包括消化系统疾病、皮肤病、神经系统疾病、某些癌症等。

以消化系统疾病为例，EGF可促进胃肠道上皮细胞的再生和修复，在治疗消化性溃疡、胃肠炎、炎症性肠病等方面有良好的疗效。

在皮肤美容方面，EGF可以提高皮肤弹性，增加皮肤光泽度，减少皱纹和色素沉着等，越来越被人们所重视。

EGF可以通过各种方式进行应用，其主要分为外服和内服。

外服的应用，包括患处涂敷和注射，主要是在局部直接促进创面愈合和皮肤美容；而内服的应用，主要是口服或静脉注射的方式，可传递EGF到整个人体内，可应用在更多的疾病治疗中。

表皮生长因子及其作用机制1962年，CohenS用羧甲基纤维素从雄性小鼠颌下腺腺管分离出纯化神经生长因子（NGF）后发现另一类物质可使新生小鼠眼睑早开、牙齿早萌、体重减轻和毛发生长延迟，他提纯了这种由53个氨基酸构成的单链多肽称之为表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）[1-3]1979年，Carpenter等人报道了人表皮生长因子（hEGF）的氨基酸残基组成同年，Gregory从人尿中发现了能够抑制胃酸分泌的抑胃素，称之为尿抑胃素（Urogastrone，UG），并发现EGF与UG的化学结构与生物活性极为相似，于是人们把EGF和UG这两种多肽看成同一物质，一般称之为上皮生长因子—尿抑胃素（EGF—UG）随后，在大白鼠、猪等生物体中均发现了表皮生长因子mEGF和pEGF 这之后关于EGF的生物学功能开展了大量研究经研究发现EGF 具有促进细胞分裂、与某些癌性病变密不可分，除此之外，对呼吸系统、生殖系统也有很重要的作用尤其是EGF可以促进上皮细胞分裂增殖，Imanish J，Kamiyama K Iguchi等人在2021年发现应用EGF可以明显增加创面的内胶原和细胞DNA含量，加速创面愈合随后EGF 不论在临床应用还是美容领域都得到广泛应用近年来，对EGF及其受体（EGF receptor，EGFR）的研究成为生物化学研究的热点之一，对于其作用机制、影响因子和如何提高其生物学功能进行了广泛的研究1表皮生长因子家族、分子结构及其生物学效应11表皮生长因子家族在发现EGF后的40多年时间里，又先后发现了一些与EGF密切相关的生长因子，大小都在50～80个氨基酸之间，被称为EGF家族包括1976 年Todaro和Delareo在肉瘤病毒转化的3T3成纤维细胞培养介质中发现一种具有EGF活性的生长因子，命名为转化生长因子α（transforming growth factor α，TGF α）、之后又发现了牛痘病毒生长因子（vaccinia growth factor，VGF）、休普氏纤维瘤生长因子（shope fibroma growth factor，MGF）、粘液瘤生长因子（myxoma growthfactor，MGF）、两性调节蛋白（ampiregulin）、双向调节素（arnphireguli，AR）、betacellulin（BTC）、epiregulin（EPl）、结合肝素的EGF样生长因子（heparin-bingingEGF-likegrowth factor，HB-EGF）、痘苗病毒生长因子（vaccinia virus growth factor，VVGF）等12表皮生长因子的分子结构特点EGF是最早确立结构的生长因子1986年Bell等人通过基因克隆及重组分析，阐明了EGF 的基因位点及其编码序列，小鼠和人的EGF 基因均为单拷贝基因编码小鼠和人EGF的基因分别位于第3号和第4号染色体的长臂上hEGF 以hEGF-β和hEGF-γ两种形式存在，hEGF-β和hEGF-γ两者有98%的同源性和相似的分子结构，而且它们作用于同一个受体，并产生相同的生物学效应EGF的mRNA序列由4871bp组成，编码一个1217个氨基酸残基的大分子蛋白前体，有一个长3621bp的开放阅读框，编码1207个氨基酸残基EGF前体有两个类似疏水袋的序列，一个位于前体的N 末端，作为生物合成时的信号肽，在转录后很快被除去；另一个在前体的C端附近的成熟EGF序列之后，由于这一疏水序列后又跟有一个含大量碱性氨基酸的短序列，因而这段序列可能是固定在膜上的跨膜蛋白，类似于一个跨膜受体，被广泛的认为EGF就是在膜表面通过蛋白酶水解后由前体加工而来hEGF前体除具有产生成熟hEGF外，其可能本身也具有生物活性，如hEGF分子的C结构域可能与受体结合来刺激细胞增殖，也有人推测它可能作为一种膜蛋白，在离子转运及细胞识别中起识别作用EGF家族的成员在一级结构上相差甚大，有30%的同源性，但在空间结构上具有一定的保守性，EGF家族内存在着11个保守的氨基酸残基，其中完全保守的6个半胱氨酸残基，在分子内部形成3对二硫键，使得这些分子具有相似的空间构象，因而都能够与EGF受体结合，并且在生物学的功能上也表现出一定的相似性，因此把它们归为一个家族，称为EGF家族EGF 家族的结构特征可以从两方面来认识：一是它的一级结构，从中人们发现了多种吸引广大学者的序列；二是它的空间结构，借助高分辨率的核磁共振（NMR）分析技术已对EGF 的空间构象有了更深刻的了解和认识成熟的hEGF是具有53个氨基酸残基的不可透析的单链多肽，等电点（PI）为46，分子量为6045Da，对热稳定，含3个链内二硫键，从而在6～20、14～3l和33～42之间分别形成三个环，这些环状结构使EGF对蛋白酶具有较高的稳定性，活性中心位于48～53个氨基酸残基之间，该二硫键对EGF生物学活性的发挥起重要作用成熟的小鼠表皮生长因子（mEGF）是一种水溶性、低分子量、对酸对热稳定、不可透析的单链多肽，由53个氨基酸组成，不含丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸，含有3个链内二硫键，分子量约为6040Da，等电点为46，消光系数（280nm）为309，沉淀常数125s早期圆二色谱分析表明，mEGF的二级结构是致密的球状结构，其中约25%为β-片层结构，75%为无规则的螺旋卷曲，无α-螺旋后经核磁共振（NMR）研究证实其肽骨架中仅存在反平行的β-片层[19-20]mEGF在盐酸胍中的伸展动力学研究表明，mEGF是已知的最稳定的蛋白之一EGF对热稳定，在-20 ℃中能保持长期稳定；在中性溶液中100 ℃煮沸30 min仍保持稳定，但在100℃的01NNaOH或02NHCI中失活耐胰蛋白酶、糜蛋白酶和胃蛋白酶的消化EGF分子中不含丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸第53位精氨酸和第52位亮氨酸常被蛋白酶去除，因此EGF氨基端40多个氨基酸即具有该因子的全部活性EGF分子的空间结构可分为相对独立的N段和C段，这两部分较为刚性，分别由两对和一对相对柔性的二硫键相连，因此两部分的空间位置相对可变，整个分子较为柔性13表皮生长因子的生物学效应EGF对表皮、间皮、内皮细胞在体内外都起作用，还影响组织器官的生长和分化人们首次发现的EGF作用是能使乳鼠眼睑早开6～7 d，牙齿早萌5～6 d，并伴有牙齿体积减小现象此外，EGF还可促进心包膜、肾被膜、胆管和肺的发育（1）促进上皮细胞分裂增殖EGF具有促进细胞的增殖和上皮再生的功能，可以促进细胞有丝分裂以及糖、蛋白质、DNA、RNA合成，在临床上与很多疾病，如免疫性皮肤病、创面组织修复及牙周炎等的治疗密切相关，而在毛发囊泡细胞、鳞癌细胞中EGF却有抗增殖效应；EGF可以明显的增加创面的内胶原和细胞DNA含量，具有促进创面愈合作用，如促进外伤、手术、烧烫伤及各种激光损伤等引起的皮肤创伤愈合中有明显的效果；促进角膜上皮细胞的增殖，用来治疗角膜损伤EGF强烈的表达于角膜上皮的深层细胞和角膜缘上皮细胞、部分结膜上皮细胞和结膜下结缔组织内成纤维细胞等眼表层组织以自分泌或（和）旁分泌的方式与EGFR相结合，促进角膜损伤修复；EGF是组织修复和细胞保护作用的内源性物质，在人类胃肠道、十二指肠粘膜溃疡愈合过程中起着十分重要作用，在治疗肿瘤方面，最近国外用大量hEGF与毒素结合治疗神经胶质瘤、乳腺瘤、皮肤瘤，已取得一定疗效同时临床上还可以应用EGFR单克隆抗体拮抗EGF对人牙龈上皮细胞的促增殖作用，为防止牙周炎提出了新的思路及其理论依据EGF促进组织修复的功能越来越受人们的重视，已被用于角膜、胃、肠道、肝脏、骨骼、神经等多种组织创伤的研究其研究和技术的进展即将在临床上广泛应用（2）EGF与某些癌性病变密不可分研究表明EGF与肿瘤有三方面的关系：①某些肿瘤细胞可以自分泌EGF 直接作用于胞膜上EGF受体，加速其无抑制地异常增殖②EGF受体的氨基酸排列和组成，与某些癌基因的产物具有高度的同源性，如EGF受体与病毒致癌基因src家族的产物有同源性，因此EGF受体不依赖EGF也能被激活，这种受体的持续激活可导致细胞不断生长，这可能是导致细胞恶变的原因之一③多种肿瘤细胞的EGF受体有过度表达现象，如鳞癌、多形性脑胶质细胞瘤、喉乳头状瘤等（3）EGF调节内分泌腺EGF与多种内分泌腺之间有密切的相互调节的关系，可直接或间接影响多种内分泌腺的分泌EGF可以促进GnRH、CRF、GH、ACTH、LH、hCG、hCS、PRL、皮质醇等的分泌，抑制翠酮、雌二醇、甲状腺素等的分泌另外，EGF可刺激人骨肉瘤细胞分泌甲状旁腺激素样肽（PTH-like peptide），并刺激成骨细胞合成前列腺素E2（PGE2），促进胃泌素、胆囊收缩素、促胰酶素等胃肠道激素的分泌，并参与消化机能的调节（4）对呼吸系统的作用EGF可经自分泌或旁分泌方式对气道上皮细胞的功能进行调控作为一种肺内调节肽，具有抗氧化保护作用它可以上调γ-谷氨酰转肽酶的表达、加速外源性谷胱甘肽（GSH）向细胞内转运和促进GSH 合成、提高细胞的抗氧化能力及清除活性氧等EGF还可通过细胞内信号转导来调控原癌基因bcl-2的转导水平此外，EGF对肺泡Ⅱ型细胞增生有明显的调控作用，如加速肺泡Ⅱ型细胞结构和功能分化，从而合成表面活性物质，促进胎肺成熟，进而参与肺损伤修复过程（5）EGF在糖尿病及糖尿病肾病（DN）的发生发展中起重要作用其检测对DN的早期诊断、病情分析及临床治疗有一定的理论价值对EGF与糖尿病性腺轴的损伤关系的研究表明，胰岛素的作用部分由EGF调节；胰岛素或睾酮不足可导致EGF缺乏，而EGF缺乏可能是直接引起生精障碍的重要原因（6）EGF对生殖系统的主要作用①影响睾丸发育和精子发生②调节卵巢的发育与生殖功能刺激卵母细胞发育、抑制人绒毛膜促性腺激素诱发的排卵效应、刺激颗粒细胞增殖、影响颗粒细胞的甾体激素分泌与肽类因子的分泌③促进合子发育④ 作为胚胎营养因子调节早期胚胎发育既可通过EGFR提高早期胚胎卵裂率和囊胚发育率；又可活化Na/KaATP酶，加快囊胚腔内液体的积聚，促进囊胚腔的形成与扩展；还可间接地使肌动蛋白发生磷酸化，引起细胞粘着性以及胚胎卵裂球的分化发生改变⑤ 通过激活胚泡和调节子宫接受性等途径启动胚泡植入（7）EGF作为具有神经营养活性的因子，在神经损伤后可以保护相应的背根神经节感觉神经元此外，EGF还是一种脑肠肽神经递质2EGF作用机制EGF通过与其细胞膜受体结合，在细胞内传递中构成一个复杂的代谢网络，诱导受体自身磷酸化，激活受体酪氨酸蛋白激酶活性，催化多种底物蛋白酪氨酸残基（Tvr）磷酸化，启动、催化、维持与细胞生长、增殖有关的一系列生化过程21基本作用机制Ullrich 等人[30-31]提出二聚体学说，即EGF与EGFR结合后相邻受体相互靠近形成二聚体，聚集的受体相互进行催化，使自身酪氨酸磷酸化，从而使受体的激酶区激活的观点，该学说已得到了证实EGF首先与EGFR的胞外结合部位结合，导致受体分子发生二聚化，促使EGFR羧基末端的三个酪氨酸残基（Tyr）自身磷酸化位点发生磷酸化，使受体酪氨酸激酶活化，从而磷酸化受体本身及下游的信号分子；磷酸化的受体通过其磷酸化酪氨酸残基可与蛋白质的SH2结构域相互作用，结合胞内的信号转导分子已知EGFR的活化可以使细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油增多，结果引起细胞内游离钙离子增多，激活磷酸蛋白激酶c和磷酸蛋白激酶A，从而介导各种信号转导途径，使细胞增殖和功能发生改变诱导EGFR自身磷酸化的位点是在其羧基端1068、148、1173和氨基端一个位点的四个Tyr残基关于信息传递的过程，目前认为这种信息传递是以逐级放大形式来进行的即被激活的一级信息分子去激活下一级信息分子，以此类推，每一次传递都是激活过程而磷酸化的受体激酶区一方面能特异地与配体结合被磷酸化，另一方面又启动另外的信息分子，依次将信息传递到效应分子，使细胞内第二信使三磷酸肌醇和二乙酰甘油增多，引起细胞内游离Ca2+增多，激活蛋白激酶C和腺苷酸环化酶，改变细胞的骨架结构，使细胞分化、分裂和增殖等但时至今日，有关EGF的作用机理仍有许多问题有待进一步阐明22三种蛋白酶的激活（1）酪氨酸蛋白激酶（TPK）的激活：EGF受体的第三结构区具有特异性的TPK活性对此酶底物的研究是了解EGF如何刺激细胞增殖的信号传导过程的关键所在，EGF与受体结合诱导受体磷酸化，激活*****不仅能自身磷酸化，而且还使依赖于Ca2+离子的蛋白质或磷脂酰肌醇的磷酸化利用定位突变的方法已经证明：TPK磷酸化与否对酶活性有重要调节作用，高活性的TPK可促使细胞增殖或癌变（2）C激酶（PKC）的激活：EGF与受体结合从而诱导受体结构产生变化，通过G蛋白降低受体TPK活性，从而导致EGF与受体复合物的高亲合性结合快速下降，使受体受到功能上的下降调节，说明PKC活性与EGF密切相关，EGF表现的促细胞增殖、促癌作用有可能都是通过激活PKC来表现的，也可说明通过下降调节的反馈作用抑制了EGF受体促进细胞增殖的力可能正是由于PKC这种反馈抑制作用才使得正常细胞中EGF受体不会导致细胞异常增生（3）CAPK的激活：可能核内EGF受体或OAG（1-油酰-2-乙酰-消旋甘油）以外的其它第二信使来增强NC3H/10的染色体蛋白激酶（CAPK）的活性，EGF对CAPK的活性的影响有助于说明核内EGF的作用过程以上三种蛋白激酶的激活，从而保障了EGF受体复合物的一系列生理功能EGF的发现和研究的历史十分短暂，但其特殊的生物学效应决定了它的广泛应用随着研究的深入和临床上的广泛应用，一些疑难病症，如重度烧伤、大面积创伤、消化道溃疡、角膜严重损伤等，均有望迅速治愈甚至目前的一些不治之症：如神经损伤、恶性肿瘤、AIDS 病等，也可能通过EGF 的使用而有所缓解和恢复可以预言，EGF 的应用必将为今后生命科学研究带来重大的飞跃。

鼻咽癌患者血清IFN-γ、PTX3及EGF水平对放疗效果的预测价值程建刚;袁炜;谷贺【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2022(14)9【摘要】目的探讨鼻咽癌患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、血清穿透素3(PTX3)、表皮生长因子(EGF)水平对放疗效果的预测价值。

方法选取2015年3月至2018年7月于石家庄平安医院就诊的112例鼻咽癌患者作为研究对象(NPC组),选取同期112名健康体检者作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组血清中的IFN-γ、PTX3、EGF水平。

根据实体瘤的疗效评价标准将NPC患者分为有效组和无效组,比较两组血清中的IFN-γ、PTX3、EGF水平。

根据随访结果将NPC组分为生存组和死亡组,比较两组血清中的IFN-γ、PTX3、EGF水平。

分析IFN-γ、PTX3、EGF对放疗效果的评价及诊断预后的预测价值。

结果 NPC组IFN-γ水平显著低于对照组,PTX3和EGF水平显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。

放疗后有效组IFN-γ水平显著高于无效组,PTX3和EGF水平显著低于无效组,差异均有统计学意义(P<0.05)。

放疗后生存组IFN-γ水平显著高于死亡组,PTX3和EGF水平显著低于死亡组,差异均有统计学意义(P<0.05)。

根据AUC选取IFN-γ、PTX3和EGF的最佳诊断截点,ROC曲线分析显示,IFN-γ、PTX3、EGF联合预测的AUC为0.936,高于三者单独检测(P<0.05)。

结论鼻咽癌患者中血清IFN-γ表达降低,PTX3和EGF表达升高,三指标对鼻咽癌患者放疗效果的评价和诊断预后具有重要的价值。

【总页数】5页(P1498-1501)【作者】程建刚;袁炜;谷贺【作者单位】石家庄平安医院耳鼻喉科;石家庄平安医院血液内科;石家庄平安医院肿瘤科【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.鼻咽癌患者血清EA-IgA、VCA-IgA抗体水平与放疗效果分析2.奥沙利铂联合放疗治疗鼻咽癌患者的效果及对血清Bcl-2、Bax蛋白水平的影响3.血清IFN-γ、IL-2、EGF预测鼻咽癌患者放疗敏感性和预后的相关性分析4.血清PTX3、Cav-1水平对急性脑梗死溶栓治疗患者近期预后的预测价值5.血清PTX3联合CHA2DS2-VASc评分对OSAHS合并房颤患者发生脑梗死的预测价值因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

临床中常用的检查英文缩写临床中常用的检查英文缩写！肝病常用医学名词缩写AFP 甲胎蛋白ALP 碱性磷酸酶ALD 酒精性肝病ALT 丙氨酸转氨酶AST 天门冬氨酸转氨酶ATP 三磷酸腺苷CIV IV型胶原DNA-P 乙型肝炎病毒DNA多聚酶EGF 表皮生长因子ELA 酶免疫分析法ELISA 酶联免疫吸附法GGT r-谷氨酰转肽酶HA 透明质酸HAV 甲型肝炎病毒抗-HAV-IgM 甲型肝炎病毒IgM型抗体抗-HVA-IgG 甲型肝炎病毒IgG型抗体HVA-RNA 甲型肝炎病毒核糖核酸HAAg 甲型肝炎病毒抗原抗-HVA 甲型肝炎病毒抗体HBV 乙型肝炎病毒HBeAg 乙型肝炎e抗原HBcAg 乙型肝炎核心抗原HBsAg 乙型肝炎表面抗原Anti-HBc 乙型肝炎核心抗体Anti-Hbe 乙型肝炎e抗体Anti-HBs 乙型肝炎表面抗体HBxAg 乙型肝炎x抗原抗-HBx 乙型肝炎x抗体抗-HBc-IgM 乙型肝炎病毒IgM型核心抗体抗-HBc-IgG 乙型肝炎病毒IgG型核心抗体HBV-DNA 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸HCC 肝细胞肝癌HCV 丙型肝炎病毒HCV-RNA 丙型肝炎病毒核糖核酸HCAg 丙型肝炎病毒抗原抗-HCV 丙型肝炎病毒抗体HDV 丁型肝炎病毒抗-HDV-IgM 丁型肝炎病毒IgM型抗体抗-HDV-IgG 丁型肝炎病毒IgG型抗体HDV-RNA 丁型肝炎病毒核糖核酸HDAg 丁型肝炎病毒抗原（Delta抗原）抗-HDV 丁型肝炎病毒抗体HEV 戊型肝炎病毒HEV-RNA 戊型肝炎病毒核糖核酸HEAg 戊型肝炎病毒抗原抗-HEV 戊型肝炎病毒抗体HGF 肝细胞生长因子HGV 庚型肝炎病毒IFN 干扰素IG 免疫球蛋白IL 白细胞介素LC 肝硬化LDH 乳酸脱氢酶LN 层粘连蛋白MRI 磁共振成像PBMC 外周血单个核细胞PCⅢⅢ型前胶原PCR 聚合酶链反应PGI 前列环素PHC 原发性肝癌PIIIP 血清前胶原肽RIA 放射免疫法TBil 总胆红素Tcho 总胆固醇TG 甘油三脂TGFβ1 转化生长因子β1TNF 肿瘤坏死因子TTV 经血传播病毒ULN 肝功检查的正常值乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半）横向排列顺序为：序号HBsAg 表面抗原抗-HBs HBsAb 表面抗体HBeAg E抗原抗-HBe HB eAb E抗体抗-HBc HBcAg 核心抗体临床意义出现率9种常见模式1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。

一种重组人表皮生长因子生产工艺表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）是一种生长因子蛋白质，可以刺激细胞的增殖和分化，促进伤口愈合和皮肤再生。

由于其重要的生物学功能，EGF广泛应用于医药和美容领域。

本文将介绍一种重组人表皮生长因子的生产工艺。

1. 选择宿主细胞：选择高效的宿主细胞是生产重组人表皮生长因子的关键步骤。

常用的宿主细胞包括大肠杆菌（E.coli）和哺乳动物细胞（如CHO细胞）。

相比而言，CHO细胞更适合于生产复杂的蛋白质，因为它们能够正确折叠蛋白质并产生活性的重组蛋白。

2.克隆表达载体构建：将表皮生长因子的基因序列克隆到表达载体中。

表达载体通常包含启动子、选择标记基因和终止子等功能元件，以确保基因的稳定表达和高产量的重组蛋白。

3. 细胞培养和表达：将重组表达载体转染入选择的宿主细胞中，通过细胞培养使其扩增和表达。

CHO细胞通常在有血清的培养基中生长，而E.coli则在含有适当的培养基和抗生素的培养基中生长。

4.优化培养条件：调查培养条件对表皮生长因子表达的影响，并进行优化。

例如，调整温度、培养基成分和培养时间等因素来提高重组蛋白的产量和纯度。

5.重组蛋白的提取和纯化：通过离心甩液、细胞破裂和蛋白质的高效柱层析等技术，将重组蛋白从细胞培养上清液中提取和纯化。

这些步骤可以去除杂质和其他细胞组分，提高重组蛋白的纯度和活性。

6.表皮生长因子的活性测定：使用细胞增殖试验、细胞分化试验或酶联免疫吸附试验等方法，来评估提取的重组表皮生长因子的活性。

7.产品的灭菌和填充：将活性的重组表皮生长因子经过灭菌处理，然后填充到适当的容器中进行储存和销售。

灭菌可以采用热灭菌或无菌过滤等方法。

8.质量控制和分析：对生产的重组表皮生长因子进行质量控制和分析，包括蛋白质含量分析、纯度测定、重组蛋白的活性测定和微生物检测等。

这些步骤可以确保生产的产品符合质量标准和规定。

重组人表皮生长因子的生产工艺需要仔细的操作和严格的质量控制，以确保蛋白质的高产量和纯度。

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二磷酸腺苷（ADP）甲胎蛋白（AFP）获得性免疫缺陷综合征/艾滋病（AIDS）白蛋白（Alb）碱性磷酸酶（ALP）丙氨酸转氨酶（ALT）一磷酸腺苷（AMP）天冬氨酸转氨酶（AST）三磷酸腺苷（ATP）身体质量指数（BMI）糖链抗原（CA）共价闭合环状DNA（cccDNA）四氯化碳（CCl4）癌胚抗原（CEA）胆固醇（CHO）二氧化碳（CO2）C反应蛋白（CRP）计算机断层扫描（CT）二氨基联苯胺显色（DAB显色）直接胆红素（DBil）酶联免疫分析法（EIA）酶联免疫吸附试验（ELISA）3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）γ-谷氨酰转肽酶（GGT）球蛋白（Glo）推荐意见分级的评估、制定和评价系统（GRADE甲型肝炎病毒（HA V）乙型肝炎病毒（HBV）乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）乙型肝炎病毒e抗体（抗-HBe）乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）血红蛋白（Hb）丙型肝炎病毒（HCV）慢加急性肝衰竭（ACLF)自身免疫性肝炎（AIH）酒精性肝病（ALD）急性肝衰竭（ALF）抗线粒体抗体（AMA）抗核抗体（ANA）抗原递呈细胞（APC）载脂蛋白（Apo）抗平滑肌抗体（ASMA）受试者工作特征曲线下面积（AUC）血压（BP）尿素氮（BUN）Ⅳ型胶原（CⅣ）趋化因子（CCL）疾病预防控制中心（CDC）慢性乙型肝炎（CHB）慢性丙型肝炎（CHC）胆碱酯酶（ChE）肌酸激酶（CK）巨细胞病毒（CMV）细胞毒性T淋巴细胞（CTL）细胞色素P450（CYP）直接抗病毒药物（DAA）树突状细胞（DC）药物性肝损伤（DILI）EB病毒（EBV）细胞外基质（ECM）表皮生长因子（EGF）表皮生长因子受体（EGFR）经内镜逆行胰胆管造影（ERCP）超声内镜（EUS)食管静脉曲张（EV)早期病毒学应答（EVR）纤维蛋白原（Fb）胎牛血清（FBS）美国食品药品监督管理局（FDA）空腹血糖(FPG)粒细胞集落刺激因子（G-CSF）肾小球率过滤（GFR）估算肾小球率过滤（eGFR）粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）透明质酸（HA）组织学活动指数（HAI ） 随机对照试验（RCT ） 受试者工作特征曲线（ROC 曲线） 活性氧（ROS ） 快速病毒学应答（RVR ） 亚急性肝衰竭（SALF ） 严重急性呼吸综合征（SARS ） 血清肌酐（SCr ） 铁蛋白（SF ） 全身炎症反应综合征（SIRS ） 平滑肌抗体/平滑肌肌动蛋白（SMA ） 超氧化物歧化酶（SOD ） 持续病毒学应答（SVR ） 经肝动脉化疗栓塞术（TACE ） 附：a. 药类就写中文全称和英文缩写b. 所有学会均写中文全称和英文缩写c. 精品文章简介里面的名词不用英文全称，有需要的就用中文全称和缩写，或者直接缩写建议：1. 没有出现的缩写可以按照规则类推，比如病毒学应答类，血常规类的指标等。

人胎盘生长因子（PLGF）ELISA试剂盒操作步骤试剂盒本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块（48T）塑料膜板盖1块半块标准品1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对比1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素HRP 1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）停止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自备料子：1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

样品收集、处置及保管方法：1、血清操作过程中躲避任何细胞刺激。

使用不含热原和内毒素的试管。

收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。

2、血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。

1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。

1000×g离心10分钟，取上清液5、保管假如样品不立刻使用，应将其分成小部分70 ℃保管，躲避反复冷冻。

尽可能的不要使用溶血或高血脂血。

假如血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。

不要在37℃或更高的温度加热解冻。

人胎盘生长因子（PlGF）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、尿液, 细胞培养物上清或其它相关液体中胎盘生长因子,PlGF含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中PlGF水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PlGF抗原、生物素化的抗人PlGF抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PlGF呈正相关。

用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000 pg/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释成1,000 pg/mL，500 pg/mL ，250 pg/mL，125 pg/mL，62.5 pg/mL，31.25 pg/mL，15.6 pg/mL，其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL，临用前15分钟内配制。

如配制500 pg/mL标准品：取0.5ml 1,000 pg/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

·论著·有氧运动通过增加神经调节蛋白１水平对精神分裂症患者认知功能的影响陈秋莹，张琪，周锦，温冬华 摘要：　目的：探索有氧运动对精神分裂症患者认知功能和血清神经调节蛋白１（ＮＲＧ １）水平的影响。

　方法：纳入２０２２年１０月期间住院于上海市浦东新区精神卫生中心的４７２例精神分裂症患者，最终１０６例患者按性别进行随机分组，对照组保持原有的治疗和生活方式，有氧运动组在原有治疗基础上进行有氧运动。

应用ＭＡＴＲＩＣＳ共识认知成套测验评估认知功能，酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）法测定ＮＲＧ １。

每组干预前后的认知功能及ＮＲＧ １的变化采用配对ｔ检验，干预后两组认知功能及ＮＲＧ １的差异采用独立ｔ检验。

　结果：与基线相比，干预后１２周有氧运动组总认知功能及７项认知维度明显进步（Ｐ均＜０．０５），血清ＮＲＧ １水平升高（Ｐ＜０．００１）；干预后两组总认知功能，７项认知维度及血清ＮＲＧ１差异均存在统计学意义（Ｐ均＜０．０１）。

有氧运动组ＮＲＧ １变化与认知各维度的改善呈正相关（Ｐ均＜０．０５）。

　结论：本实验采用的有氧运动可广泛改善精神分裂症患者认知功能障碍，可能是通过上调ＮＲＧ １水平进行调控，为精神分裂症患者认知功能的治疗提供新靶点。

关键词：　精神分裂症；　有氧运动；　血清神经调节蛋白１；　认知功能中图分类号：　Ｒ７４９．３ 文献标识码：　Ａ 文章编号：　１００５ ３２２０（２０２３）０６ ０４３５ ０４Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｂｙｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ １ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ　ＣＨＥＮＱｉｕ ｙｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＱｉ，ＺＨＯＵＪｉｎ，ＷＥＮＤｏｎｇ ｈｕａ．ＴｏｎｇｊｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈｏｆＴｏｎｇｊｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＰｕｄｏｎｇＮｅｗＡｒｅａＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈＣｅｎｔｅｒ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００１２４，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｒｕｍｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ １（ＮＲＧ １）ｌｅｖｅｌｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．　Ｍｅｔｈｏｄ：４７２ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａｐａｔｉｅｎｔｓｈｏｓｐｉｔａｌｉｚｅｄｉｎＳｈａｎｇｈａｉＰｕｄｏｎｇＮｅｗＡｒｅａＭｅｎｔａｌＨｅａｌｔｈＣｅｎｔｅｒｉｎＯｃｔｏｂｅｒ２０２１ｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ，ａｎｄ１０６ｐａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｉｎｃｌｕｄｅｄｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙ，ｗｈｏｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｓｓｉｇｎｅｄｂｙｇｅｎｄｅｒ．Ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｋｅｐｔｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｌｉｆｅｓｔｙｌｅ，ａｎｄｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐｒｅｃｅｉｖｅｄａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＴｈｅｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｂｙＭＡＴＲＩＣＳｃｏｎｓｅｎｓｕｓｃｏｇｎｉｔｉｖｅｓｕｉｔｅｔｅｓｔａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＮＲＧ １ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）．ＣｈａｎｇｅｓｉｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＮＲＧ １ｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｐａｉｒｅｄｔ ｔｅｓｔ，ａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＮＲＧ １ａｆｔｅｒｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔ ｔｅｓｔ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａｆｔｅｒ１２ｗｅｅｋｓ，ｔｏｔａｌｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｖｅｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｄ（ａｌｌＰ＜０．０５），ａｎｄｓｅｒｕｍＮＲＧ １ｌｅｖｅｌｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．００１）ｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｏｔａｌｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｓｅｖｅｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓａｎｄｓｅｒｕｍＮＲＧ １ｗｅｒｅａｌｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（ａｌｌＰ＜０．０１）ｉｎｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐ．ＮＲＧ １ｃｈａｎｇｅｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙ（ａｌｌＰ＜０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅａｄｏｐｔｅｄｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙｃａｎｗｉｄｅｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ，ｍａｙｂｅｔｈｒｏｕｇｈｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＮＲＧ １，ａｎｄｉｔｐｒｏｖｉｄｓａｎｅｗｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：　ｓｃｈｉｚｏｐｈｒｅｎｉａ；　ａｅｒｏｂｉｃｅｘｅｒｃｉｓｅ；　ｓｅｒｕｍｎｅｕｒｅｇｕｌｉｎ １；　ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｆｕｎｃｔｉｏｎ 认知功能障碍是精神分裂症患者三大核心症状之一，在精神分裂症的其他症状之前出现，贯穿于疾基金项目：上海市浦东新区医学临床高原学科建设项目（ＰＷＹｇｙ２０２１ ０２）作者单位：２００１２４　同济大学医学院，同济大学附属精神卫生中心，上海市浦东新区精神卫生中心（陈秋莹，张琪，周锦）；同济大学附属东方医院南院（温冬华）通信作者：温冬华，Ｅ Ｍａｉｌ：ｗｄｈａｌａｎ＠１６３．ｃｏｍＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００５ ３２２０．２０２３．０６．００４病发生、发展［１］，严重地影响患者的日常生活和治疗的依从性，导致疾病的复发和长期失能［２］。