培养基的质量控制

培养基的质量控制
●正确进行培养基质量控制，并作为一项经常性的工作，建立完整的检验资料，是实验
室今后通过相应级别的认证，在整个检验质量控制体系中所必须具备的文件资料。
 现有的依据：卫生部1993年发布的食品检验用干燥培养基生产质量控制。但这个标
准不完善。
培养基的分类
 按其成分分类：有天然培养基和合成培养基。
 按用途分类：基础培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基及厌氧培养基。
 按培养基的形态分类：液体培养基、流体培养基、半固体培养基及固体培养基。
 根据培养基的剂型不同分类：新鲜配制培养基和干燥培养基两种。
检验中常用培养基
水质检测用培养基：7种
化妆品检验用培养基 ：8种
食品检验用培养基 ：常用的有3 7 种，110种被列入了GB4789中，其中生化试验培
养基23种，一般和专用培养基89种。
食品、化妆品及涉水产品等产品微生物检验常规项目中所用的增菌分离培养基有所不
同，对于菌种鉴定所用的培养基，各类产品分离的菌种其鉴定所用的培养基基本相
同。
常用培养基的质量控制（一）
 检验项目与方法：对新批号的干燥培养基物理、化学及生物学指标鉴定
A：感官（外观）研细程度和颜色（溶解前后），透明度，杂质等；
B：PH测定，按各种培养基要求的PH±0.2，蒸馏水的PH应在6.4-7.0之间。
C：生物学指标检定，被检培养基相应细菌生长率测试；菌落大小及特征的检测。
 生长率测试：适用与液体和固体培养基：将菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，取
合适稀释度进行平板计数或接种被检的培养基试管，同时以按相关的培养基国标配
方新鲜配制的培养基进行对照。不低与10%。
 菌落大小测试：划线分离测试菌，取10个菌落测量直径大小，其直径均值与新鲜配
制的培养基无统计学差异。
常用培养基鉴定用标准菌株
甲型副伤寒沙门菌50002 伤寒沙门菌 50096
乙型副伤寒沙门茵 鸭沙门茵50083
鼠伤寒沙门氏菌 痢疾志贺菌1型5157O
 福氏志贺菌2 大肠埃希菌25922（ATCC）
金黄色葡萄球菌25923（ATCC ） 普通变形杆菌
肺炎克雷伯菌肺炎亚种 弗劳地枸橼酸杆菌4197
 绿脓杆菌27853（ATCC） 副溶血性弧菌
常用培养基质量标准
 外观和理化标准：
 干粉颜色：淡黄色粉末或呈现本培养基特有的颜色
 溶解后培养基色泽：清晰透明（含琼脂除外）淡黄色或特有的色泽；
 灭菌后的培养基PH：7.2±2℃为多；个别弧菌检验用培养基pH值偏高为：8.0 ±2℃
 生物学指标：菌落特征及菌落大小 。
常用培养基保存环境
 制成的培养基保存环境为4℃冰箱，如制成平板则用塑料袋包装置冰箱保存，
 干燥培养基干粉含有活性物质、遇热易分解的物质应仔细查看存放条件，多数也须
放在2-8 ℃条件保存。
 有的培养基则以存放于10-15 ℃条件为易。如含有高浓度胆盐的培养基。
培养基制备的控制程序
 培养基配制所用的仪器设备培养基配制所用的仪器设备必须经过相应的鉴定 。
 配制培养基所用的用具及容器配制培养基所用的用具及容器必须是清洁或是灭菌
的，一些特殊不易洗刷清洁的玻璃器皿，必要时可用重铬酸钾硫酸清洁浸泡后，取
出置5%氢氧化钠溶液浸泡数分钟，再用3%盐酸溶液进行中和，然后用清水冲洗，
烘干后备用。
 培养基配制原料，试剂质量控制
培养基的配置程序（一）
 不同的培养基配制的程序有所不同，但一般培养基配制程序主要有以下7个步骤、
调配、融化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及鉴定 。
 注意点：配制时注意各类成分的用途。
 pH测定干燥培养基在工厂生产时，对培养基PH进行了一定的调试，在实际工作中，
由于配制的环境、配制所用的溶剂（蒸馏水）PH等条件有所不同，都会对所用的培
养基PH要有所影响。因此对于干燥培养基配制，同样需要进行PH测验。
培养基的配置程序（二）
 配制好的培养基（尤其是糖发酵管）不宜久放。，因为培养培养基吸收空气中的二氧
化碳，会使培养基变酸，从而影响细菌的生长。
 培养基中的抑制剂及指示剂一定要精确称量，抑制剂要注意合理配伍。
培养基主要原料的质量控制
 配制培养基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、胆盐、无机盐和琼脂等，
这些主要原料的有劣，直接影响到培养基的质量，由此也将影响检验质量。
 指标有感官、理化、物理、生物学。
培养基相关试剂的质量控制
 培养基相关试剂的质量控制及阴、阳性对照菌株试验。对做生化反应的各类试剂，
在配就后均应进行各项必要的鉴定。用已知阴、阳性菌株进行对照试验。对于其它
如氧化酶、触酶、染色液等也同样需要经鉴定后用于试验。
不合格培养基可能的原因（一）
 干燥培养基结块
 培养基过于陈旧
 培养基处于潮湿环境中
 培养基生产时水分过高
 PH偏离规定值
 培养基过于陈旧
 配制时所使用的蒸馏水非中性
 培养基过度灭菌
不合格培养基可能的原因（二）
 培养基不清澈
 使用了劣质水
 培养基PH不对
 使用了不同的容器制备
 生产原料精度不够
 培养基过度灭菌
 凝固温度过高
 培养基干粉用的太多
 琼脂质量发生了变化
不合格培养基可能的原因（三）
 凝胶强度过低
 培养基干粉用的太少
 培养基未完全溶解
 培养基过度灭菌
 倾注前未振摇培养基瓶
 琼脂粉凝固强度较低
 颜色不对
 PH不正确（带指示剂的培养基）
 培养基过度灭菌
 使用了不洁的容器制备
不合格培养基可能的原因（四）
 培养基被污染
 培养基灭菌不彻底
 灭菌后存放不当而污染
 实验时使用了污染的器皿
 生长不良
 可能由制备容器设备、水或样品带入抑制物
 样品中含有亚致死性损伤的微生物
 PH不正确
 添加物（抑制剂）等浓度不当
 培养基过度灭菌
 实验时培养基或溶解样品时温度过高
不合格培养基可能的原因（五）
 过分生长
 培养基过度灭菌，选择性物质受到了破坏
 添加物浓度不当
 菌落蔓延
 琼脂表面过湿
 使用了过多的接种体积
 培养基过度灭菌
 非典型生长
 培养基制备不当
 干燥培养基存放陈旧
 制备成的培养基存放时间过长
 生长条件不当（温度、时间、气体）
检验质量保证
 定期使用有证标准物质和次级标准物质（参考物质）进行内部质量控制。
 实验室间的比对或能力验证
 利用相同或不同方法进行重复检测
 对留存的样品进行在检测。
微生物检验质控方法（一）
 菌落计数精密度控制直接计数
 选择同一标本，要求检验人员进行菌落计数。
 将大肠菌（25922）或经检定标化的菌片，通过合适的梯度稀释，选择合适的稀释度
进行菌落计数实验操作。36±1℃培养24h进行菌落计数。
微生物检验质控方法（二）
 菌落计数精密度控制重复计数法
 选择十个平板，每个平板具有合适的菌落数（100以内）。将平板编号，由实验人员
进行计数并记录结果。去掉平板编号，将平板置冰箱保存过夜，次日取出，重新给
予编号，由实验人员重复计数并记录。计算每位实验人员每对结果的平均数（X）。
X=（a+b）/2；相对误差（rd）计算：rd=|a+b|/X×100%。其它实验人员间的相对误
差范围计算：先计算所有实验人员的平均菌落数，X=[Σx]/n，要求每一结果均应在
X±18.2%范围内。
重复计数要求
 自身同一平皿重复计数误差 小于7.7%
 实验人员之间同一平皿重复计数误差 ±18 .2%
 自身同一梯度平行加样两皿间相对误 小于7.7%
 实验人员之间同一梯度计数误差X±18 .2%范围
 不同梯度间菌落计数最终误差 小于7.7%
菌种鉴定质控
 菌种鉴定质控要求，对所给的微生物菌种，按有关的方法及指标进行生化、血清等
方面的鉴定。
 鉴定质量评价：鉴定程序是否正确；鉴定方法是否正确；具体操作技术是否熟练，
结果报告是否正确。每一项设立分值为25分。总分为100分。
内部质量控制的推荐频率
 菌落计数精密度控制： 1次/3月；
 菌种鉴定控制： 1次/半年或1年
 盲样测定丢失的对照 1次/半年