版中国药典微生物培训培养基的配制及质量控制34页PPT

摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)

2 选择性培养基
添加抗生素或抑菌剂，选择性培养特定的微生。
3 固体培养基
用于在培养皿中培养微生物，便于观察和分离。
培养基的消毒方法
1 高温灭菌
2 化学消毒
通过高温蒸汽或干热处理， 将细菌、病毒等微生物杀 灭。
使用化学物质如酒精、次 氯酸钠等消毒培养基。
3 辐射消毒
利用紫外线或电离辐射对 培养基进行消毒处理。
3 研究工具
培养基在微生物学和细胞 学等领域中广泛应用，是 研究的重要工具。
培养基的配制方法
1
添加营养物质
2
根据细胞需要，在基质中添加有机或无
机营养物质。
3
消毒处理
4
通过高温、辐射等方法对培养基进行消 毒，以杀灭潜在的微生物。
选择基质
根据实验需求选择适当的基质作为培养 基的基础配方。
调整pH值
使用酸碱溶液调整培养基的pH值。
培养基的主要组分及其功能
营养物质
提供细胞生长所需的碳水化合物、氮源和无机盐 等。
生长因子
促进细胞分裂和增殖，维持细胞的正常功能。
胺基酸
作为蛋白质的组成单元，参与细胞代谢。
染色剂
用于观察和分析细胞的形态和结构。
常用培养基类型及适用领域
1 富养基
提供丰富的营养物质和生长因子，适用于细胞的扩增和生物制剂的生产。
《培养基及其配制》PPT 课件
欢迎来到《培养基及其配制》的PPT课件！本课件将带你深入了解培养基的定 义、配制方法以及常用类型和适用领域。让我们开始学习吧！
培养基的定义和作用
1 定义明确
了解培养基的具体定义和 主要作用，为后续内容提 供基础。
2 支撑细胞生长
培养基为细胞提供营养和 环境条件，促进其正常生 长和分裂。

概述
一、微生物的概念及种类
（一）什么是微生物？
是存在于自然界的一群体积微小、结构简单、肉眼看不见， 必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才 能观察到的微小生物。
（二）微生物有什么特点？
个体微小、结构简单、繁殖迅速、分布广泛、种类繁多、 容易变异等特点
在整堂课的教学中，刘教师总是让学 生带着 问题来 学习， 而问题 的设置 具有一 定的梯 度，由 浅入深 ，所提 出的问 题也很 明确
二、微生物与人类的关系
• 绝大多数微生物对人和动植物是有益的，有些则是必需 的。
自然界中N、C、S等 元素循环
有少数微生 物能引起人 类和动、植 物的病害
工业,微生物应用于食 品、皮革、纺织、石油、 化工、冶金等
污水处理,利用微生物 降解有机磷、氰化物等
农业,以菌造肥, 以菌催长,以菌 防病,以菌治病
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• 抑制剂
培养基的类型（作用）
• 作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的 检出率
• 种类：
• 盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）。
• 染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、玫瑰红。
回顾
• 微生物培养基的类型 • 微生物培养基配制原则、配制步骤 • 常用的几种培养基的适用微生物 • 牛肉膏蛋白胨培养基中琼脂的作用
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培养基的类型
按物理性状划分：
• 固体培养基：适合于菌种和孢子的培养和保存，也用于有子 实体的真菌类（香菇、白木耳）的生产

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3、培养基的促生长和抑制性能试验
⑴无菌检查用培养基 适用性试验 无菌性检查和灵敏度检查
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灵敏度检查
参照 2010年版《中国药典》中培养基灵 敏度检查试验
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微生物限度检查(计数培养基)
培养基的适用性检查
促生长、抑制及指示能力检查
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菌种
大肠埃希菌 [CMCC（B）26003] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌「CMCC(B)63501」 白色念珠球菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（F）98003]
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二、培养基的质量控制
目前，许多实验室为了操作方便，多使用脱水 培养基进行配制或购买已制备好的分装于培养皿 或玻璃容器的商业培养基。 经实验室配制或由生产厂生产的培养基的质量高 度依赖于其如何制备，采用不适宜方法制备的培 养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验 结果的可靠性。
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所有配制好的培养基均应进行验证，验证 方法参照《中国药典2010年版》附录无 菌检查或微生物限度检查项下有关规定进 行。实验室配制的培养基的常规监控项目 是外观、性状、pH、促生长试验、定期 的稳定性检查以及培养基有效期的确定。
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一些用于进一步鉴定微生物的诊断试剂， 如革兰染色、氧化酶试验试剂等。它们与 培养基相似点可能是质量控制试验。在试 剂用于未知样品鉴定前，选择正确的标准 质控菌，按使用说明上的要求进行质控试 验。
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用于环境监控的培养基应特别小心防护。 20
1、测定PH值 2、一般性状
⑴制成平板或分装于试管的培养基应检查 ⑵固体培养基 ⑶液体培养基 ⑷ ⑶其他
曙红亚甲蓝琼脂 或麦康凯琼脂 培养基
促生长能力+指示能力 乙型付伤寒沙门菌

氯是光合作用水光解的活化剂 微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢
的调节。
第11页，共50页。
缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片 失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落 叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。
桃 树
第12页，共50页。
缺铜症状：
新梢顶端叶片的叶尖失绿 变黄，叶片出现褐色斑点至扩 大变成深褐色，引起落叶。
◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素
◆常用维生素有VB1和VB6
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5、肌醇
◆环己六醇
◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理 活动 ◆促进活性物质发挥作用
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6、氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源
◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸
❖ 所谓母液是欲配制液的浓缩液。
❖ 意义: ①保证各物质成分的准确性 ②配制时的快速移取 ③便于低温保藏。
第33页，共50页。
母液的配制方法： 单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓
度的母液。一般用mg/ml 。
混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍
数称量，分别溶解后再混合成母液。
第42页，共50页。
化合物名称
NH4NO3 KNO3 (NH4)2SO4 NaNO3 KCl CaCl2•2 H2O
Ca(NO3)2•4H2O MgSO4•7H2O Na2SO4 KH2PO4 K2HPO4 FeSO4•7 H2O Na2-EDTA Na-Fe-EDTA FeCl3•6H2O Fe(SO4) 3 MnSO4•4 H2O ZnSO4•7 H2O Zn (螯合体) NiCl2•6H2O CoCl2•6 H2O CuSO4•5H2O AlCl3 MoO3

化學藥劑消毒滅菌： 微生物實驗室中常用的化學殺菌劑有升汞、甲醛、高錳酸鉀、酒 精、碘酒、龍膽紫、石炭酸、漂白粉、新潔爾滅、煤酚皂溶液， 它們有的是殺菌劑，有的是抑菌劑，詳見表6—4。
實驗程式18
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
思考題
固體培養基加瓊脂後加熱溶化時要注意哪些問 題？ 培養基中加瓊脂的作用是什麼？ 幹熱滅菌、高壓蒸汽滅菌和間歇滅菌的場合有 何不同？ 如何檢查培養基滅菌是否徹底？
實驗程式16
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
實驗程式17
（培養基和玻璃器材的滅菌方法）
紫外線滅菌法： 一般30W燈管，9m3空間，距地面2m每次打開紫外線照射0.5h， 就使室內空氣滅菌。若照射紫外線時先噴灑石炭酸等化學消毒劑， 可增強滅菌效果。紫外線雖有較強的殺菌力，但穿透力弱，即使 一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除，因此只適用於空氣 及表面殺菌。
實驗程序
培養基的配製 分離培養微生物常用器皿的準備 培養基和玻璃器材的滅菌方法
實 驗 程 序1
（培養基的配製）
培養基的種類 培養基的配製方法和步驟 三種培養基的配方及配製 無菌水的製備
實 驗 程 序2
（培養基的種類）
據組成成分可分為:
1.合成培養基：由各種純化學物質按一定比例配製而成。 2.半合成培養基：有一部分純化學物質和另一部分天然物質配製 而成。 3.天然培養基：利用天然來源的有機物配製而成。
實 驗 程 序9
（三種培養基的配方及配製）
澱粉瓊脂培養基（高氏一號Gause´1），用於分離 和培養放線菌，是一種合成培養基。配方如下：
可溶性澱粉
KNO3 K2HPO4 MgSO4• 7H2O NaCl FeSO4• 7H2O 瓊脂 自來水

适用菌种
病毒 支原体 各类细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌 蓝藻 动物细胞
液体石蜡覆盖保存法
传代保存的变相方法 能够适当地延长保存时间 优质石蜡121℃高压灭菌2小时，160℃
干燥箱中灭菌1—2小时，放冷备用 液体石蜡的深度以1cm左右 保存期通常6个月至一年
适用菌种
霉菌、酵母菌、放线菌、部分细菌。如： 大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌 等需氧性细菌
目标菌的生长指标G大于6时，培养基可
接受
定性测试方法
用3mm接种环取测试菌培养物，在测试 培养基表面划平行直线。可同时在一个 平板上接种多个菌株，但划线不能交叉
按标准中规定的培养时间和温度对接种 后的平板进行培养
结果解释
培养后按以下方法计分：
0表示无生长 1表示微弱生长 2表示生长良好
不能用于低温冷冻保存的微生物（如孢 子形成能力极差的丝状菌）
不适于用菌种：固氮菌、乳酸杆菌、明 串珠菌、分枝杆菌、沙门法：菌种悬浮在10％(体积分数)甘油蒸 馏水中。置于低温(-70)保藏。
注意事项：所要保藏的菌种，最好先培养至对 数期；使用液体培养基时，可直接加到已灭过 菌的甘油中，并使甘油的终浓度在l0％～30％ 左右。为避免反复冻溶，可分装于小离心管中， 置低温保藏。
性能评价 所用测试菌株
实验室验收：
产品标签：
名称和批号 有效期
接收日期 包装及其完整性
SN/T1538.1-2005中4.1;对应 CNAS/CL01 4.6.2内容,通常要 记录(采购服务和供给)
储存要求
例行常规检查内容:
容器密闭性复查 首次开封日期 内容物的感官检查
使用前检查(即用型培养基):
方法和螺旋平板涂布法效果较好。

无菌操作台 (Laminar flow)
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培养基的配制 – 装水
1. 以量筒装取适当量蒸 馏水于玻璃容器中
2. 于玻璃容器上标示培
养基名称
精选课件
36
培养基配制 – 秤药
精选课件
1. 放上秤药纸
並归零
2. 以秤药匙舀 出适当量药 品 (请看培 养基配方上 說明)
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培养基配制 – 溶解培养基
安全吸球隨意放置桌面，菌 液容易流出至桌上
灭菌
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注意事項 – 杀菌锅的使用
放东西
调整温度时间
加水盖过铁板
精选关课门件
关紧泻压伐42
注意事項 – 杀菌锅使用
灭菌结束后，等
压力降回零
时才可打开门
进入杀菌锅 之物 品，盖子不可关 太紧或太松
精选课件
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注意事項 – 杀菌锅使用
拿灭菌后物品请记得带耐热手套
精选课件
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培养基配制 – 平板培养基
用途
沙门氏和志贺氏菌属分离
志贺氏菌分离鉴别
大肠杆菌、产气杆菌分离鉴别
肠道致病菌分离
绿脓杆菌分离鉴别
志贺氏、沙门氏菌分离
肠道菌分离鉴别
霍乱弧菌分离
真菌、酵母菌分离
精选课件
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3、鉴别培养基
在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区 分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助 开快速鉴别某种微生物。这样的培养基称之为鉴 别培养基。
盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
精选课件
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无菌操作
斜面接种时的无菌操作
(1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)
接种 (6)塞好棉塞

回收率测定法（定量和定性）
➢例1：XLD培养基
回收率测定法
选取适宜的3-4个连续稀释度接种于9mL待检测培养基中，每个稀释度3管，35℃-37 ℃培养3d。
➢ 例2：沙门氏菌显色培养基 分类：物理状态、功能和制备工艺
养基质量控制应该形成的记录 C：斜面变碱/大量H2S/气体+
• 沙门氏菌：紫红色菌落 定义：按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需要的各种营养物质，由人工配置的营养基质，专供微生物培养及分离鉴别、研究和保
菌种鉴定记录
菌毒株入库登记表
菌毒株使用记录
食品检测记录
分培用制类养于备： 基 鉴 工物定别艺理义革：状、兰自态组氏行、成阴配功与性置能分肠、和类杆干制菌燥备，培工该养艺培基养和基即含用有型三培种养可基发。酵的碳源即葡萄糖0. 培 C培保培另从1计回保E微培2注养为为适孵目1选例保制 E例从单容为选 D从选单1B技DC选为 例接选选孵培1E用微2另E此物适WC弗孵I微从例为 例1适E选培另用适选将单 培C2例适孵 制生保S--------：：：：：：：：：：22222222OS养养质养外菌数收质生养意基获获用育标取1质备1菌增器获取菌取增术择获：种择择育养于生外类理择用氏育生菌3获：用择养外于用取沙增养取：用育备化质00000000： ： ：/斜斜斜斜斜斜 斜 斜 斜斜/T基基 期 基 某 落 类 率 期 物 基 ： 质 得 得 于 1菌 适 期 工落 和 密 得 适落 适 和 验 性 得脑 管 性 性 1基 鉴 物 某 培 状 性 于 志 1物 落 得脑 于 性 基 某 鉴 于 适 门 和基 适 脑 于 1工 性 期T000000002888西800000373S面面面面面面面面面 面KK定 定：定些数培测：学的一量准准选的宜：艺 数绵闭准宜 数宜绵收分准 心2分（定别学些养态（选贺学数准 心选增定些别选宜氏绵 定宜心选艺状：3食--：-食-食食食食 食2222II/蒙12变变变变变变变变变 变AA3义 义一义菌量养定一指保次控确确择回的一： 量羊不确的 量的羊记离确 浸离半义革指菌基：半择氏指量确 浸择义菌革择的菌羊 义的浸择：典一44441品培品-品品品品 品生（（21氏hhhh酸酸碱酸酸酸碱碱碱碱碱 碱、 、般、能上基法般标存垂制、、性收3般自 上李适、3上3李录培、 液培定兰标能含液定性菌标上、 液性液、能兰性3和李 、3液性自型般03和，，养，和，和和和和 和长TT枸-----03//////////44444底底底底底组 组未组还判（（未的条直应可可增率未行 判斯应可判斯及养可 肉养量组氏的还有体量增：的判可 肉增（组还氏增大斯 组肉增行的未大底大大 大SS动基动先先先先2.动动动动 动的个个 个个个橼II：部部部部部成 成开成原断生定开质件穿该靠靠菌要开配 断特带靠断特评基靠 汤基方成阴质原目培方菌无质断靠 汤菌生成原阴菌肠特 成汤菌配强开量部量量 量））物性物观观观观物物物物 物最连连 连连连酸商变变变变变与 与封与分长量封量：刺形的的培求封置 分氏来的分氏估（的 培（法与性量标养法培色量分的 培培长与性培埃氏 与培培置阳封HNHNHNH变饲能饲察察察察饲饲饲饲 饲高续续 续续续盐22a2aa2业酸酸酸酸酸分 分的分离率和的控避接成数数养在的、 离菌的数离菌报定数 养定和分肠控菌基和养菌控离数 养养率分肠养希菌 分养养、性的酸料测料动动动动SS2S22S料料料料料稀稀稀 稀稀稀培性SSS/////////类类培类培、定培制光种的据据基培干培：影据培：告性据基性定类杆制生、定基落制培据基基、类杆基氏：类基基干质培7/的试的力力力力气气气 气的的的的 的释释释 释释释222HHHHH少养H0微养养选性养方保，记，，：养燥 养蓝响，养蓝方， （方性菌方长固性：方养， （：选菌：菌蓝 （：燥控养OOO微实微%、、、、体体体 体222222微微微微 微度度度 度度度量基生SSSSSS333基基择）基法存离录只只基培 基色只基色法只 法方，法需体方法基只 择，的色 培菌基BBB以生用生，，，，++++生生生生 生即产产产接接 接接接-----H-HHH物//////可对性可于底有有可养 对菌有对菌）有 ）法该要培法对有 性该新菌 养株可上大大大大大物指物气气然然然然2物物物物 物III为生生生种种 种种种）））培S保目和保阴部对对保基 目落对目落对 ）培的养）目对 ）培鲜落 基保，量量量量量学南学体体后后后后学学学学 学该HHH于于 于于于/气养质标特质凉培培质和 标培标培 养特基标培 养肉和质1,,,并气气气气气222--加加加加周周周培培培99（9（99c培培培培 培SSS体基３菌异３干养养３即 菌养菌养 基殊和菌养 基汤即３mmmmm具m体体体体体入入入入围围围，，，养养养福福养养养养 养-质LLLLL处年的性年燥基基年用 的基的基 含营半的基 含培用年有（（（（（KKKK有有有与与与基基基待待 待待待氏氏基基基基 基量oooo停，选），处进进，型 选进选进 有养固选进 有养型，典大大大大大伤白白白vvv硫硫硫v制制的检检 检检检志志制制制制 制检aaaa止已择已，行行已培 择行择行 三物体择行 三物培已型肠肠肠肠肠寒色色色酸酸酸备备cccc灵测测 测测测贺贺备备备备 备验ssss，开效开使有有开养 效有效有 种质培效有 种按养开菌埃埃埃埃埃沙不 不 不亚亚亚和和’’’’敏培培 培培培菌菌和和和和 和规不封果封用效效封基 果效果效 可，养果效 可照基封落希希希希希门透透透铁铁铁生生度养养 养养养））试试试试生生生生 生程可的，的后的的的。 ，的，的 发及基，的 发。的1特菌菌菌菌菌明明明铵铵铵产产基基 基基基：剂剂剂剂产产产产 产多可以可，监监可以监以监 酵抑。以监 酵可征）））））晕晕晕中中中指指中中 中中中9检检检检导导导导 导次保及保拧控控保及控及控 的制及控 的保。9圈圈圈的的的南南，， ，，，测测测测则则则则 则进穿质对质紧，，质对，对， 碳非对， 碳质亚亚亚每每 每每每吲吲吲吲第第行刺第第第第 第半非半瓶才才半非才非才 源目非才 源半铁铁铁个个 个个个哚哚哚哚22混，11111年目年盖能能年目能目能 即标目能 即年部部离离离稀稀 稀稀稀部部部部 部的的的的合或，标，，从从，标从标从 葡菌标从 葡，分分子子子释释 释释释分分分分 分产产产产，接在菌在避根根在菌根菌根 萄生菌根 萄在：：反反反度度 度度度生生生生接实实实实 实种瓶的瓶免本本瓶的本的本 糖长的本 糖瓶培培应应应33333种验验验验 验针管管 管管管体抑体吸上上体抑上抑上 的抑上 体00养养生生生..于室室室室 室有，， ，，，注制注潮保保注制保制保 抑制保 注基基成成成S培培培培 培弯33333明性明、证证明性证性证 制性证 明性性黑黑黑C55555养养养养 养曲开。开氧检检开。检。检 剂。检 开℃℃ ℃℃℃肉能能色色色基基基基 基或封封化测测封测测 。测 封-----汤试试33333制制制制 制扭77777日日或结结日结结 结 日中验验℃℃ ℃℃℃备备备备 备曲期期污果果期果果 果 期，实实培培 培培培的的的的 的。。。染的的。的的 的 。3用用6养养 养养养质质质质 质。可可可可 可℃导导33333量量量量 量信信信信 信培则则ddddd保保保保 保。。 。。。和和和和 和养证 证 证 证证有 有 有 有有18一一一一 一效效效效 效-2般般般般 般。。。。 。4h导导导导 导则则则则 则 适制计此用备数类于 工 类 培选艺培养择：养基性自基含增行（有菌配生目培置长标养、率菌基干、生：燥选长培择需养性要基和的和特即异殊用性营型）养培物养质基，。及抑制非目标菌生长的抑制剂。