培养基质量控制
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培养基质量控制一、背景介绍培养基质量控制是在微生物实验室中非常重要的一项工作,它直接关系到微生物培养实验的准确性和可靠性。
培养基质量控制旨在确保培养基的质量稳定,保证实验结果的可重复性和可比性。
本文将详细介绍培养基质量控制的标准格式,包括培养基配制、质量检验和记录等方面的内容。
二、培养基配制1. 配制原则培养基的配制应遵循一定的原则,包括准确称量、严格控制pH值、高温高压灭菌等。
在配制过程中,应使用高纯度的试剂和蒸馏水,避免任何污染。
2. 配制步骤(1)准备所需试剂和培养基配方;(2)根据配方准确称量试剂;(3)将试剂溶解于蒸馏水中,搅拌均匀;(4)调整溶液的pH值,确保符合实验要求;(5)用蒸馏水补足溶液至所需体积;(6)高温高压灭菌,确保培养基的无菌性;(7)冷却后,分装到适当的容器中,密封保存。
三、质量检验1. 外观检验检查培养基的外观,应为清澈透明,无悬浮物和沉淀。
2. pH值检测使用pH计检测培养基的pH值,确保其在规定范围内。
3. 灭菌效果检验取一部分培养基,进行无菌培养试验,观察培养基是否有菌落生长,以确定灭菌效果。
4. 营养成分检测可使用化学方法或仪器检测培养基中各种营养成分的含量,确保其符合实验要求。
5. 结晶点检测在培养基中加入适量的酚红指示剂,观察是否出现结晶点,以判断培养基中是否存在污染。
四、记录与保存1. 记录要求每一批次配制的培养基都应有详细的记录,包括配方、配制日期、配制人员、检验结果等信息。
记录应存档备查,以便追溯和比对。
2. 保存要求配制好的培养基应密封保存,避免受潮和污染。
同时,应标明保存期限和适宜的保存温度,以确保培养基的质量稳定。
五、培养基质量控制的意义培养基质量控制是微生物实验室工作中的重要环节,它对实验结果的准确性和可靠性起着至关重要的作用。
通过严格控制培养基的质量,可以保证实验结果的可重复性和可比性,提高实验的准确性和可靠性。
六、总结培养基质量控制是微生物实验室中不可或缺的一项工作。
培养基质量控制引言概述:培养基质量控制是微生物学实验中非常重要的一部份,它直接影响到实验结果的准确性和可靠性。
培养基质量控制的目标是确保培养基的成份和性能符合实验要求,从而提供一个适宜的环境来培养和研究微生物。
本文将从五个方面详细阐述培养基质量控制的重要性和方法。
一、培养基成份的准确性1.1 确保培养基成份的准确称量:每种成份的质量应该准确称量,避免因误差导致培养基成份含量不许确,影响微生物的培养。
1.2 选择合适的培养基成份:根据所研究的微生物的需求,选择适合的碳源、氮源、无机盐等成份,以提供微生物生长所需的营养物质。
1.3 避免污染:确保培养基成份的纯度,避免有害微生物或者其他杂质的污染,影响实验结果。
二、培养基性能的稳定性2.1 pH值的调节:根据微生物的生长要求,调节培养基的pH值,维持在适宜的范围内,以促进微生物的生长。
2.2 温度的控制:根据微生物的生长温度要求,控制培养基的温度,保持在适宜的范围内,以提供一个合适的生长环境。
2.3 氧气的供应:根据微生物的需求,提供适量的氧气,或者提供无氧条件,以满足微生物的生长需求。
三、培养基的质量检测3.1 pH值的测定:使用pH计等仪器,准确测定培养基的pH值,确保其符合实验要求。
3.2 纯度的检测:进行无菌培养基的接种和培养,观察是否有菌落生长,以判断培养基的纯度。
3.3 营养物质含量的检测:使用化学分析方法,测定培养基中各种营养物质的含量,确保其符合实验要求。
四、培养基的保存和管理4.1 无菌保存:将制备好的培养基进行高温高压灭菌,然后密封保存,避免细菌或者其他微生物的污染。
4.2 有效期的确定:根据培养基成份的稳定性和保存条件,确定培养基的有效期,避免使用过期的培养基。
4.3 记录和管理:建立培养基使用记录和管理制度,及时更新培养基的使用情况和库存情况,以确保培养基的及时补充和更新。
五、培养基质量控制的重要性5.1 实验结果的准确性:培养基质量控制的好坏直接影响到实验结果的准确性和可靠性,保证实验结果的可重复性。
培养基质量控制一、背景介绍培养基质量控制是在细胞培养和微生物培养等领域中非常重要的一项工作。
培养基的质量直接影响到细胞或微生物的生长、繁殖和表达等方面。
因此,建立一套科学、规范、可靠的培养基质量控制标准是非常必要的。
二、目的本文旨在制定一份培养基质量控制标准,以确保培养基的质量稳定性和可重复性,为细胞培养和微生物培养提供良好的基础。
三、标准内容1. 培养基成分1.1 基础成分:培养基应包含适当的碳源、氮源、矿物质和生长因子等基础成分,以满足细胞或微生物的生长需求。
1.2 pH值:培养基的pH值应在适宜范围内,一般为7.0-7.4,以维持细胞或微生物的正常生长。
1.3 温度:培养基的温度应根据细胞或微生物的生长要求进行调整,一般为37℃或其他适宜温度。
2. 培养基制备2.1 材料准备:制备培养基所使用的材料应具备良好的质量,如培养基原料、培养器具等。
2.2 操作规范:制备培养基的操作应按照一定的规范进行,包括称量准确、溶解均匀、灭菌严格等。
3. 培养基质量检测3.1 pH值检测:使用专业的pH计进行培养基的pH值检测,确保其在适宜范围内。
3.2 温度检测:使用温度计等仪器进行培养基的温度检测,确保其符合要求。
3.3 营养成分检测:通过化学分析等方法对培养基中的营养成分进行检测,确保其含量准确。
3.4 微生物检测:对制备好的培养基进行微生物检测,确保其无菌。
四、质量控制措施1. 培养基批次记录:对每一批制备的培养基进行详细的记录,包括制备日期、成分、检测结果等,以便追溯和分析。
2. 样品留存:对每一批制备的培养基留取样品进行保存,以备后续的质量监控和验证。
3. 培养基质量评估:定期对制备好的培养基进行质量评估,包括外观观察、pH 值检测、营养成分检测和微生物检测等。
4. 培养基使用前验证:在使用培养基前,进行必要的验证实验,确保培养基的质量稳定和可靠性。
五、质量控制记录1. 制备记录:每一批制备的培养基都应有详细的制备记录,包括操作人员、制备日期、成分、检测结果等。
培养基质量控制引言概述:培养基质量控制在生物科学研究和工业生产中起着至关重要的作用。
它涉及到培养基的配制、质量评估和调整等方面。
本文将从培养基配制、质量评估、调整、储存和记录等五个大点来详细阐述培养基质量控制的重要性和方法。
正文内容:1. 培养基配制1.1 确定培养基成分:根据所需培养细胞或微生物的特性,确定培养基成分,如碳源、氮源、无机盐等。
1.2 量化培养基成分:根据配方比例,精确称取各种成分,确保培养基的准确配制。
1.3 消毒处理:通过高温高压灭菌或化学消毒方法,确保培养基无菌。
2. 培养基质量评估2.1 pH值测定:测定培养基的pH值,确保适合细胞或微生物的生长。
2.2 渗透压测定:测定培养基的渗透压,确保适合细胞或微生物的生长。
2.3 营养成分测定:测定培养基中各种营养成分的含量,确保满足生物生长的需求。
3. 培养基调整3.1 pH调整:通过添加酸碱溶液,调整培养基的pH值,使其适合细胞或微生物的生长。
3.2 营养成分调整:根据生物生长的需要,添加或调整培养基中的营养成分。
3.3 温度调整:根据细胞或微生物的生长温度要求,调整培养基的温度。
4. 培养基储存4.1 无菌储存:将配制好的培养基经过消毒处理后,密封保存,避免细菌或真菌的污染。
4.2 低温储存:将培养基存放在低温环境中,如冰箱或冷冻库,延长其有效使用期限。
4.3 避光储存:将培养基存放在避光的环境中,避免光照引起的化学反应和降解。
5. 培养基记录5.1 记录配制过程:详细记录培养基的配制过程,包括成分、量化、消毒处理等,方便后续的质量评估和调整。
5.2 记录使用情况:记录培养基的使用情况,包括使用时间、使用量、使用者等,方便追溯和质量控制。
5.3 记录质量评估结果:记录培养基的质量评估结果,包括pH值、渗透压、营养成分等,方便后续的质量调整和改进。
总结:培养基质量控制是生物科学研究和工业生产中不可或缺的一环。
通过正确的培养基配制、质量评估、调整、储存和记录等措施,可以确保培养基的质量稳定和可靠性,为生物实验和生产提供良好的基础条件。
培养基质量控制培养基质量控制是保证细胞培养成功的关键步骤之一。
良好的培养基质量可以提供适宜的环境,促进细胞的生长和增殖,确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将详细介绍培养基质量控制的标准格式,包括培养基配制、消毒和质量检测等方面。
1. 培养基配制培养基的配制是培养基质量控制的基础。
按照以下步骤进行培养基的配制:1.1 准备所需的培养基成分,包括无菌水、培养基粉末、添加剂等。
1.2 使用无菌技术将培养基粉末加入无菌水中,按照指定比例进行配制。
1.3 充分搅拌混合,确保培养基成分均匀分布。
1.4 调节pH值,根据不同细胞类型和实验要求进行调整。
1.5 过滤消毒,使用无菌滤器将培养基过滤,去除潜在的污染物。
2. 培养基消毒培养基消毒是防止细菌、真菌和其他微生物污染的关键步骤。
以下是培养基消毒的标准操作流程:2.1 准备所需的消毒剂,如75%酒精、过氧化氢等。
2.2 将培养基瓶或培养皿放入无菌工作台中。
2.3 使用无菌棉签蘸取消毒剂,擦拭培养基瓶或培养皿的外表面。
2.4 打开培养基瓶或培养皿盖子,将消毒剂蒸汽进入瓶内或皿内,保持一定时间。
2.5 关闭培养基瓶或培养皿盖子,确保密封,避免污染。
2.6 将消毒后的培养基存放在无菌条件下,避免再次污染。
3. 培养基质量检测培养基质量检测是判断培养基是否符合要求的重要步骤。
以下是常见的培养基质量检测方法:3.1 pH值检测:使用pH计测量培养基的pH值,确保其在适宜范围内。
3.2 渗透压检测:使用渗透压计测量培养基的渗透压,确保与细胞的渗透压匹配。
3.3 营养成分检测:使用化学分析方法检测培养基中各种营养成分的含量,确保满足细胞的生长需求。
3.4 毒性检测:使用细胞毒性试验等方法检测培养基中是否存在有害物质,确保培养基对细胞无毒。
3.5 无菌性检测:使用无菌培养技术将培养基接种到无菌培养基上,观察是否有菌落生长,判断培养基的无菌性。
4. 培养基保存培养基的保存也是培养基质量控制的重要环节。
培养基的质量控制培养基是细菌、真菌、酵母等微生物生长和繁殖的基本载体。
作为科研实验室中使用最频繁、最基础的实验材料之一,培养基的质量控制至关重要。
保证培养基质量需要多方面的控制手段,从原材料的选择、生产过程的监控、到最终产品的检验,都需严格把关。
一、原材料的选择生产培养基前首先要选择合适的原材料。
培养基原材料的优劣直接影响到后续培养基的生长状态和细菌生长的质量。
为避免原材料所携带的细菌和其他微生物对培养基质量的影响,应选择高质量的原材料供应商并严格执行相关要求和管理措施,如对原材料进行无菌处理等。
二、生产过程的控制培养基的生产过程需要严格控制各个环节和工序,以确保成品质量符合要求。
特别是在培养基制备和灌装环节,要进行无菌操作,严格遵守操作规程,避免细菌污染。
同时,对生产设备和环境的清洁与消毒也要特别注意。
三、成品的检验生产出的成品需要进行检验和合格才能投入使用。
不合格的培养基可能会导致微生物培养不良、生长不正常等后果。
成品检验应包括以下几个方面:1. 检测细菌和酵母菌的沉淀对生产出的培养基进行无菌条件下开盖查看,观察有无细菌或酵母菌的沉淀。
如果存在沉淀,可能是由于原材料选择不当、生产过程中污染等原因导致,需要进行重新生产。
2. pH值检测培养基的pH值是生长状态和细菌生长的关键因素之一。
检测过程中需使用标准仪器,以确保检测结果的准确性。
3. 细菌和酵母数量的检测检测培养基中细菌和酵母的数量,需使用标准的微生物检测方法,如平板计数法和膜过滤法等。
同时,要注意检测方法中用到的细菌和酵母菌株需要遵循相关标准。
4. 重金属离子检测在培养基的制备过程中,可能会添加一些辅助物质,如氨基酸等。
这些物质含有微量重金属离子,可能会影响培养基的生长状态和微生物的生长。
因此需要对成品进行重金属离子含量的检测。
综上所述,培养基质量的控制需要从多个方面进行,涉及原材料的选择、生产过程的控制以及最终成品的检验等多个环节。
在检查和检测过程中,需使用标准设备和方法,确保检测结果的准确性。
培养基质量控制引言概述:培养基质量控制是微生物实验室中至关重要的一环。
它涉及到培养基的制备、质量检测、贮存等多个方面。
良好的培养基质量控制能够确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将从培养基制备、质量检测、贮存、使用和记录等五个大点详细阐述培养基质量控制的重要性和方法。
正文内容:1. 培养基制备1.1 选择适当的配方:根据实验需求选择合适的培养基配方,包括碳源、氮源、无机盐、维生素等成分。
1.2 精确称量:使用精密天平进行精确称量,确保每个成分的比例准确。
1.3 溶解和调节pH:将成分溶解在适当的溶剂中,并使用pH计调节溶液的pH 值至理想范围。
1.4 灭菌:使用高温高压灭菌器或滤器对培养基进行灭菌,以杀灭其中的细菌、真菌和病毒。
2. 培养基质量检测2.1 pH值测定:使用pH计测定培养基的pH值,确保其在理想范围内,以维持微生物生长的最佳条件。
2.2 渗透压测定:使用渗透计测定培养基的渗透压,确保其与微生物细胞内外的渗透压相适应。
2.3 灭菌效果检测:将一部分培养基接种不同的微生物,观察其生长情况,以确认培养基的灭菌效果。
2.4 营养成分检测:使用化学分析方法检测培养基中各种营养成分的浓度,确保其满足微生物生长的需求。
3. 培养基贮存3.1 适当的温度:将培养基贮存于适当的温度下,通常为4℃,以防止其中微生物的生长和培养基成分的分解。
3.2 防止污染:使用无菌技术操作,避免培养基受到外界细菌和真菌的污染。
3.3 包装密封:将培养基装入无菌试管或瓶中,并严密封闭,以防止湿气和细菌的进入。
4. 培养基使用4.1 培养条件控制:根据不同微生物的生长要求,控制培养基的温度、湿度、光照等条件。
4.2 培养时间控制:根据微生物的生长速度和实验需求,控制培养时间,以获取适当的菌落数量。
4.3 培养方法标准化:制定培养方法的标准操作规程,确保每次实验的培养条件和操作步骤一致。
5. 培养基记录5.1 培养基配方记录:详细记录每个培养基的配方,包括成分名称、质量和比例等信息。
培养基质量控制培养基质量控制是指在实验室环境中对培养基的质量进行监控和控制,以确保培养基的质量符合实验要求,从而保证实验结果的准确性和可重复性。
培养基质量控制包括培养基的配制、质检和贮存等环节。
一、培养基配制1. 培养基成分准备:根据实验要求,选择合适的培养基配方,并准备所需的成分。
成分的选择应根据实验目的和培养物的生长需求来确定。
2. 成分称量:按照配方中各成分的比例和质量要求,将所需成分准确称量。
3. 成分溶解:将称量好的成分逐一溶解于适量的去离子水中,确保溶解彻底、无明显沉淀。
4. pH调节:根据培养物的生长要求,调节培养基的pH值,通常使用NaOH或HCl溶液进行调节。
5. 培养基配制:将各成分按照一定比例混合,并加入适量的去离子水,搅拌均匀,最终得到符合要求的培养基液体。
二、培养基质检1. pH测定:使用pH计测定培养基的pH值,确保其在合适的范围内,通常为pH 7.0-7.4。
2. 渗透压测定:使用渗透压计测定培养基的渗透压,确保其与培养物的生理渗透压相匹配。
3. 灭菌效果检测:将培养基装入试管或培养瓶中,进行高温高压灭菌,然后培养一定时间,观察是否有细菌或真菌的生长。
4. 培养试验:将培养基用于培养指定的微生物,观察其生长情况和形态特征,验证培养基的适用性。
三、培养基贮存1. 培养基分装:将配制好的培养基液体分装到适量的试管或培养瓶中,每瓶或每管的容量视实验需求而定。
2. 标签标注:在每个试管或培养瓶上标注培养基的名称、配制日期、配制人员等信息,以便追溯和管理。
3. 贮存条件:根据培养基的特性和要求,选择合适的贮存条件。
一般来说,常用的贮存方式有冷藏、冷冻和冻干等。
4. 贮存期限:根据培养基的稳定性和使用要求,确定培养基的贮存期限,并在期限到期前进行检测和验证。
通过以上的培养基质量控制措施,可以确保培养基的质量稳定和可靠性。
在实验中,合理的培养基质量控制可以提高实验结果的准确性和可重复性,为科研工作的顺利进行提供有力的保障。
培养基质量控制培养基质量控制是指在细胞培养过程中,对培养基质量进行严格控制和监测,确保培养基的质量稳定和可靠,以保证细胞培养的成功和结果的准确性。
培养基质量控制涉及到多个方面的内容,包括培养基配制、培养基成分的检测、培养基pH值的调节、培养基渗透压的控制等。
以下是对培养基质量控制各方面内容的详细描述。
1. 培养基配制:培养基的配制是培养基质量控制的第一步,确保培养基的配制过程标准化和精确性。
在配制培养基时,应按照配方中所列的成分和比例,精确称取所需的化学品,并使用纯净水进行配制。
配制过程中要注意消毒操作,使用无菌器具和无菌操作环境,以避免污染。
2. 培养基成分的检测:培养基成分的检测是培养基质量控制的重要环节,通过检测培养基中各成分的含量,可以确保培养基成分的准确性和一致性。
常用的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
根据实验需求,可以选择合适的检测方法进行培养基成分的检测。
3. 培养基pH值的调节:培养基的pH值对细胞的生长和代谢有重要影响,因此对培养基pH值的调节是培养基质量控制的关键环节之一。
在培养基配制过程中,可以使用酸或碱溶液进行调节,通过pH计测量培养基的pH值,并根据需要进行调整,使其达到适合细胞生长的范围。
4. 培养基渗透压的控制:培养基渗透压对细胞的渗透调节和细胞膜的稳定性具有重要影响,因此对培养基渗透压的控制是培养基质量控制的重要内容之一。
在配制培养基时,可以通过调整培养基中添加的溶质的浓度来控制渗透压。
常用的溶质包括葡萄糖、甘油等,根据实验需求选择适当的溶质进行调节。
5. 培养基的无菌操作:培养基的无菌操作是培养基质量控制的基本要求,确保培养基的无菌性和纯度。
在培养基配制和使用过程中,必须保持无菌操作环境,使用无菌器具和无菌操作技术。
培养基配制完成后,应进行无菌性检测,可以通过培养基接种菌液后观察是否有菌落生长来判断培养基的无菌性。
6. 培养基质量控制记录:为了确保培养基质量控制的可追溯性和可复现性,应对培养基质量控制过程进行记录。
培养基质量控制一、引言培养基质量控制是微生物学实验中非常重要的环节,它直接影响到实验结果的准确性和可重复性。
合理的培养基质量控制能够确保培养基的成份和性能符合实验要求,提高实验的可靠性和可比性。
本文将介绍培养基质量控制的目的、方法和常见问题的解决方案。
二、目的培养基质量控制的目的是确保培养基的成份和性能符合实验要求,保证实验结果的准确性和可重复性。
它包括对培养基原料的选择和采购、培养基配制过程的控制、培养基pH值的调整、无菌操作的严格执行等方面。
三、方法1. 培养基原料的选择和采购- 选择优质的原料供应商,确保原料的质量可靠。
- 对原料进行必要的检测和鉴定,确保其符合实验要求。
- 定期检查原料的保质期,避免使用过期的原料。
2. 培养基配制过程的控制- 严格按照配方比例和步骤进行培养基的配制。
- 使用纯净水或者蒸馏水作为溶剂,避免水质污染对培养基质量的影响。
- 培养基配制过程中要注意无菌操作,避免细菌和真菌的污染。
3. 培养基pH值的调整- 使用合适的酸碱调节剂来调整培养基的pH值。
- 使用pH计准确测量和调整培养基的pH值。
- 注意培养基pH值的稳定性,避免因pH值的变化而影响实验结果。
4. 无菌操作的严格执行- 无菌操作是培养基质量控制中非常重要的环节。
- 在无菌操作室内进行培养基的制备和保存,确保无菌环境。
- 使用无菌器具和耗材,并进行必要的消毒处理。
- 培养基的保存和传递过程中要注意防止污染,避免细菌和真菌的侵入。
四、常见问题的解决方案1. 培养基溶解不彻底或者浮现沉淀- 检查原料是否充分溶解,可以加热或者搅拌促进溶解。
- 检查原料是否过期或者质量不佳,更换新的原料。
- 检查溶剂水质是否符合要求,使用更纯净的水溶解。
2. 培养基pH值偏高或者偏低- 使用合适的酸碱调节剂来调整pH值。
- 使用准确的pH计进行测量和调整。
- 检查酸碱调节剂的浓度和使用方法是否正确。
3. 培养基浮现细菌或者真菌污染- 检查无菌操作是否严格执行,注意操作的环境和器具的无菌性。
物理性状的质量控制
应包括20℃-25 ℃时的pH,并应观察以下内容:加入培养基的量和(或)琼脂层的厚度、颜色、透明度、是否存在肉眼可见的杂质、凝胶稳定性/黏稠度(一致性)、湿度。
灭菌前后都应测定pH,采用连接可渗透陶器型液体接头的电极测定液体培养基的pH,固体培养基可用平头电极或者连接微型探头的电极测定pH,测量时尽量使培养基温度降到20℃-25℃,校正通常用接近40 g/L的氢氧化钠或者1 mol/L的盐酸。
微生物的质量控制
1.污染检测
在每批制备好的培养基中应当选取部分样品进行污染测试。
2.质控菌株
质控菌种应具有稳定特性,能代表其种并能有效地证明实验室特定培养基的最佳性能。
测试菌种应可溯源至国家或国际公认的菌种收藏中心,也可以是实验室自己分离的具有良好特性的菌种,但必须对照标准菌株进行鉴定。
实验室应检测和记录储存菌株(stock culture)的相关特性,新复苏的菌种可能会有非特异性反应。
最好使用从食品中分离的菌种。
培养基的质控菌种应具备以下性能:具典型反应的强阳性菌种;弱生长的阳性菌种(选择更敏感的菌种);无生化反应的菌种;完全抑制菌种。
3.质控方法
国际食品微生物委员会和培养基菌种卫生工作组(WPCM)介绍了培养基评估用
测试菌种的有效收集方法。
(1)即用培养基和试剂
商品化即用培养基的生产厂家如果经过IS0 9001和ISO 9002体系认证或满足相应质量要求,应向使用方提供资质证明。
这时,使用者就不必对培养基进行大量的测试工作,但必须保证其储存条件。
(2)采用商品化合成脱水培养基制备的培养基
按ISO/TS 11133-1: 2009 《食品和动物饲料的微生物学培养基制备和生产指南
第1部分:实验室培养基制备质量保证通则》的要求,除了对每批制备好的培养基用标准菌株进行测试外,还应用实际样品进行检测,以更好地保证培养基的质量。
对于不含指示剂或选择剂的培养基,只需用阳性测试菌种进行测试。
对于含有指示剂或选择剂的培养基,必须使用能证明其指示或选择作用的菌种进行试验。
对于复合培养基,即需要加入添加成分的培养基,要用具备上述性能的菌种逐批进行检验。
对实验室制备的需加入添加成分的制成培养基同样适用。
(3)按照培养基配方制备的培养基
建议除了按照上述方法进行培养基品质测试外,还要用改良的Miles-Misra技术、螺旋平板技术或菌落总数技术进行测试,以监控基础材料的质量、培养基性能和实验室内部的配制规范。
实际上,食品中包含有应激反应的微生物,还应考虑到培养基在应激细菌恢复方面的适用性。
培养基性能测试方法
实验室可采用半定量和定量技术对固体、液体培养基的性能进行测试,在多数情况下能满足对培养基性能测试的要求。
对于特殊情况,如评价一种新的培养基或一个新的生产商的产品等,应采用定量测试法。
1.固体培养基
应用于固体培养基质控程序的技术大都依靠菌落计数。
主要应用的技术有:倾注法、涂布法、旋转涂布法、改良的Miles-Misra方法、半定量划线法和定性划线法。
这些方法作为食品实验室的日常方法得到了国际公认。
由于倾注法、涂布法及螺旋涂布法在日常工作中经常使用,这里不再介绍,着重介绍一下改良的Miles -Misra方法、半定量划线法和定性划线法。
(1)改良的Miles-Misra方法
改良的Miles-Misra方法是通过测试培养基的生长率(productivity ratio, PR)来检查培养基的性能,通常与对照培养基相比。
对照培养基应当是富含营养物质的培养基,如:胰酪胨大豆琼脂。
该方法步骤如下:
①将试验菌株的过夜培养物用缓冲蛋白胨水10倍梯度稀释。
②将试验和对照培养基做成4mm厚的平板,并使平板表面干燥。
③从最高稀释度(如10-5)开始,分别滴1滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域。
④每个稀释度各取4滴分别加入4个试验和对照培养基,每1滴的涂布超过四分之一平板,并用涂布器从高稀释度开始涂布,37 ℃培养18h。
⑤对数量和菌落形态进行评价。
评价方法,即按下列方式计算:
PR=Ns/No
式中:
PR--生长率;
Ns-试验培养基的菌落数;
No-对照培养基的菌落数。
示例:在10-3稀释度,试验培养基上为20个菌落,对照培养基上为25个菌落,则PR=0.80。
(2)半定量划线法
使用本方法时,所有测试培养基应干燥到相同程度,且整个步骤应标注化,以便于比较同批次培养基的测试结果。
用1uL接种环划线平板。
在A区用接种环按0.5cm的间隔划4条平行线,按同样的方法:B区和C区划线,最后在D区内划一条线。
按标准方法所规定的培养时间和温度进行培养。
通常情况下用同一接种环对A区~D区进行划线,在不同区域划线时不需对接种环灭菌。
但为了得到低生长指数G1,在A区和B区接种应更换接种环或对其进行灭菌。
评价方法:培养后,评估菌落的形状、大小和密度,并计算生长指数G1。
每条有菌落生长的划线记作1分,每个培养皿上最多为16分。
如果仅一半的线有菌落生长,记作0.5分。
如果划线上没有菌落生长或生长量少于划线一半,则记作0分。
记录每个平板的得分总和便得到G1。
例如:菌落在A区和B区全部生长,而在C区有一半线生长,则G1为10。
目标菌的生长指数G1大于6时,则判定培养基可接受。
非选择性培养基的G1值通常更高。
目标菌应呈现典型的生长,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制。
(3)定性划线法
该方法只是定性测试,划线培养后,按照要求进行打分,得分是指示性的,可用作固体培养基性能测试的补充。
取1uL测试菌株培养物在测试培养基表面划平行直线,可同时在一个平板上接种多个菌株,但划线不能交叉,然后按标准方法中的培养时间和温度进行培养。
评价方法:培养后按以下方法进行平板生长评估:0表示无生长,1表示生长,2表示良好生长。
目标菌得分应为2,并且有典型的菌落外观、大小和形态。
非目标菌的生长应该部分或全部被抑制。
2.液体培养基
为确定液体培养基的生长率,应接种适当的培养物。
下面介绍的是用定量、半定量和定性方法评估生长率和选择性的方法。
所推荐的这些方法都是通过将液体培养基以倾注或划线方式接种到琼脂平板上培养后,计数或计算液体培养基分数而得出其生长数量的。
对于液体培养基定性测试方法,则通过肉眼观察来实现。
目标菌和非目标菌的定量稀释法步骤如下:
选择液体培养基10mL/管待检。
接种目标菌:将少量测试菌株培养物(每管10CFU~100CFU)接种测试肉汤和标准肉汤,混匀。
接种非目标菌:将大量测试菌株培养物(每管大于1000CFU)接种测试肉汤和标准肉汤,混匀。
接种目标菌和非目标菌的混合培养物:用少量目标菌(每管10CFU ~100CFU)测
试肉汤和标准肉汤。
同时每管接种大量非目标菌(每管大于1000CFU),混匀。
稀释剂和运输培养基中目标菌和非目标菌的接种:接种测试菌于稀释剂中(每管100CFU~1000CFU),混匀。
按标准方法中的培养时间和温度进行培养。
结果的计算和解释:
(1)计算目标和非目标微生物的菌落数,用生长率(PR)和选择因子(SF)进行结果的解释。
目标微生物的PR不应小于0.1 (因生长的不同不能超过1个数值).
非目标微生物的SF至少应达到2。
SF的计算见式:
SF=Do-Ds
式中:
Do-在参考培养基上能生长至少10个菌落的最高稀释度;
Ds-在测试培养基上显示相应生长的最高稀释度;
SF、Do和Ds用Ig表示。
例如:Do=lg104=4.0, Ds=lg103=3.0,选择因子SF=1.0。
混合菌株中,目标菌的生长不应受到非目标菌的抑制,即目标菌始终应为优势菌群。
(2)在混合菌株中目标菌数量的最低值及非目标菌数量的最高值应符合以下要求:目标菌的最低浓度应达到10CFU/mL ~10CFU/mL;在选择性肉汤培养物中非目标菌的最高浓度不应超过104CFU/mL.
(3)稀释和运输培养基不应引起目标菌和非目标菌数量的减少或增加。
菌株在这
些培养基中培养后的数量变化应在最初计数的±50%的范围内。
保存
为防止培养基变干燥、变质和污染,培养基应存放在冷暗处或4℃冰箱中,并标明名称、配制日期等。