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阿霉素复制大鼠微小病变肾病模型的研究

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阿霉素复制大鼠微小病变肾病模型的研究
张　悦1　魏　民2　王　谦2　楚　非2　严　京2　李伯光2　贾　旭
2

收稿日期:20002082
02

基金项目:国家自然科学基金资助
(No39570893)
作者单位:1复旦大学医学院病理学教研室　
200032

2
北京中医药大学病理学教研室　
100029

作者简介:张　悦,女,35岁,肾脏病理学博士后
魏　民,男,69岁,教授,博士生导师,中华病理学杂志副
总编辑。研究方向:肾脏病理

关键词　微小病变肾病;阿霉素;肾小球上皮细胞;大鼠中图分类号　R692131;R2332 文献标识码　A文章编号　100127399(2001)0220178202 用一次性尾静脉注射阿霉素的方法复制大鼠的微小病变肾病模型,其形态学改变和临床表现与人的微小病变肾病相似,是国内外公认的理想的微小病变肾病模型。然而用该方法复制大鼠模型时未见有新月体形成和肾小球硬化的报道。本研究用阿霉素复制SD大鼠的微小病变肾病模型,并于第7周时观察到局灶性节段性肾小球硬化的形成。1　材料和方法1.1　造模方法　雄性SD大鼠50只,二级,体重200～220g(由北京市实验动物中心提供,京动许字017),二级动物室内饲养。分为正常组20只和模型组30只,其中模型组一次性尾静脉内注射阿霉素溶液(意大利爱宝大药厂生产)2mg/ml(用生理盐水配制),药量715mg/Kg体重〔1〕。1.2　观察指标　各组大鼠于注射阿霉素后1、2、3、4、7周处死取肾皮质,分别进行如下观察:(1)光镜观察:肾皮质经10%福尔马林固定,常规脱水包埋,制成4μm厚的石蜡切片,分别进行HE、PAM2HE染色,光镜下观察肾小球的病变程度。(2)透射电镜观察:聚乙烯亚胺(PEI)染色检查肾小球基底膜阴离子位点〔2〕。2　结果2.1　光镜观察　注射阿霉素后,病理组大鼠1周杀检,可见肾小球毛细血管淤血,基底膜尚完整,肾小管腔内有蛋白管型出现;第2周杀检,可见肾小球脏层上皮细胞肿胀、毛细血管淤血,肾小管腔内有大量蛋白管型,间质血管高度充血,部分肾小球系膜细胞增生;第3周可见肾小球毛细血管内淤血及肾小管内蛋白管型较前增多;第4周可见肾小球脏层上皮细胞肿胀明显,并有小新月体形成及球囊壁纤维化,肾小管上皮细胞脂肪变性(图1);第7周,可见肾小球毛细血管内红细胞呈缗钱状、系膜细胞轻度增生、脏层上皮细胞肿胀,部分大鼠有肾小球毛细血管襻节段性硬化伴肾小管萎缩,系膜基质增生(图2)。
图
1

　病理组大鼠第4周光镜下可见肾小球球囊壁纤维化,有新月

体形成。PASM2HE×
400

图
2

　病理组大鼠第7周光镜下可见肾小球毛细血管襻节段性硬化

伴肾小管萎缩。PASM2HE×
400

2.2
　透射电镜观察　病理组于电镜下可见弥漫性肾小球脏
层上皮细胞足突变形、扁平、融合、足突间闭合连接形成,部
分上皮细胞足突断裂,有微绒毛形成,第3周GBM的阴离子
位点明显减少几近消失。

3
　讨论
阿霉素及其代谢产物直接损伤足细胞或使足细胞代谢
紊乱,造成足细胞的形态学改变、基底膜中阴离子位点改变
,

从而使肾小球滤过膜的分子屏障和电荷屏障受损导致蛋白
尿的发生〔3〕。本文采用了Bertani等的方法复制了大鼠的阿
霉素肾病的模型,但观察时间延长3周。前4周的动态观察
发现肾脏的病变符合文献报道〔1,4〕。但注射阿霉素后第
7

周可见部分大鼠有肾小球节段性硬化,这在国内外文献中未

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临床与实验病理学杂志　JClinExpPathol　
2001Apr;17(2

)
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见报道。因此,本实验不仅成功地复制了大鼠的微小病变肾
病模型(前4周),而且观察了由微小病变肾病发展为局灶性
节段性肾小球硬化的过程(第4周～第7周)。由此证明一
次性注射阿霉素(715mg/Kg体重)可以进一步制作局灶性
节段性肾小球硬化的动物模型,作进一步深入研究。

参考文献
1　BertaniT,PoggiA,PozzoniRetal.Adrimycin2inducednephrotic

syndromeinrats:sequenceofpathologicevents.LabInvest,1982;
46(1):16～23
2　PiliaPA,SwainRP,WilliansAVetal.Glomerularanionicsites
distributioninnonproteinuricrats:acomputer2assitedmorphometic
analysis.AmJPathol,1985;121(3):474～85
3　SchreckR,BaeuerlePA.Aroleforoxygenradicalsassecondmes
2
sengers.TrendsCellBiol,1991;1:39～42
4　陈重义,刘利平.蛋白尿大鼠基底膜阴离子位点变化.
中华病理
学杂志,1993;22(6):350～
2

肠系膜巨大淋巴结增生症1例
苏　平1　郝冀玲2　李俸媛3　刘卫平
3
关键词　肠系膜肿瘤;淋巴结增生
中图分类号　R73514 文献标识码　
A

文章编号　100127399(2001)02201792
01

患者女,33岁,右上腹隐痛不适3年,1个月前自己扪及
中上腹肿块。全身情况好,无发热,浅表淋巴结及肝、脾无肿
大。常规实验室检查均未见异常。B超示中上腹5cm×
7

cm肿块。CT示肠系膜淋巴源性肿瘤。剖腹探查,
见肠系膜
根部肿块。
病理检查　肿块7cm×5cm×6cm、3cm×2cm×
2cm

及2cm×115cm×115cm3个,包膜完整,实性,切面均一灰
黄色,质中。镜检:大淋巴结内为弥散分布的滤泡样结构,滤
泡生发中心变小或消失,中央由透明变性的小血管穿入,外
套层明显增厚,小淋巴细胞绕中央呈同心圆层状排列,形似
葱皮样(图1),滤泡间区毛细血管增生,伴淋巴细胞、浆细
胞、嗜酸性粒细胞浸润,淋巴窦消失。余2个较小的淋巴结
中以小淋巴细胞增生为主,形成边界模糊的结节样结构,生
发中心不明显。免疫组织化学染色示这些增生的小淋巴细
胞为B细胞标记CD20+、bcl22-、cyclinD1-、T细胞标记
CD45RO-
。
病理诊断:肠系膜巨大淋巴结增生症(透明血管型)。
讨论　巨大淋巴结增生症
(giantlymphnodehyperplasia)
又称Castleman病。文献报道以纵隔、肺门和颈部多见,腹膜
后及肠系膜等处发病者则较少见。任何年龄均可发病,但多
见中年患者。病变一般发生在淋巴结,偶可见于四肢软组
织、肺、喉和眼眶等结外部位。临床分为局限性和多中心性
两类,局限性患者多无临床症状,仅在体检或偶然发现孤立

收稿日期:20002112
20

作者单位:1云南省昆明铁路局中心医院病理科,昆明　
650011

2
四川省广汉市人民医院病理科,广汉　
618300

3
华西医科大学附属第一医院病理科,成都　
610041

图1　滤泡样结构中心为透明变性的小血管,外套层增厚,呈葱皮样
改变。HE×
175

性肿块,本例即为局限性病例。多中心性者常有系统症状
,

表现为全身淋巴结肿大,可累及脾脏,发热、乏力,体重减轻
,

血沉加快,多克隆性高球蛋白血症和低白蛋白血症,并可合
并严重感染或肿瘤而预后差。病理一般分为透明血管型和
浆细胞型两种组织学类型,国外有作者还提出混合型,即为
前两型病变共存。局限性患者90%以上为透明血管型,多
中心性患者的淋巴结病变几乎都为浆细胞型。文献中也可
见到一种类型转化为另一种类型或在疾病发展过程中局限
性转化为多中心性病例的报道。
巨大淋巴结增生症为良性病变,特别是(透明血管)局限
性者,仅做病变淋巴结的手术切除即可治愈。但也有报道局
限性病变继发高恶性弥漫性大细胞淋巴瘤的情况。而多中
心性组织学类型常为浆细胞型,预后不良。而且发生淋巴瘤
转化的机率也较高,治疗除用激素外还需选用其它化学药物
治疗,所以在临床上对于Castleman病,不论是哪种组织学类
型都应进行随访观察。

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肾疾病研究的常用动物模型

肾疾病研究的常用动物模型


系膜增殖性肾炎模型的制备
将SD大鼠一次性尾静脉注射ATS 2 ml, 于注射后3h, 24h及3天～3个月不等时间取肾脏作病理检查。每 天检测尿肌酐和尿蛋白。
动物模型特点
受试大鼠仅有异体抗体相，而无自体抗体相， 即表现为注射异体抗Thy-1抗体后，产生系膜 细胞溶解及迅速修复过程，病变呈一过性； 系膜损伤过程为补体依赖性，用蛇毒消除补 体不影响抗Thy-1抗体与系膜细胞结合，但可 减轻和阻止系膜细胞损伤和溶解过程； 病变过程有白细胞、血小板积聚的炎症反应； 修复过程迅速，30～45天之内病变已几乎全 部修复，说明肾小球系膜细胞有较强的修复能 力及血管再生能力。
注意事项
根据ARF发病机理正确选择ARF动物模型 的种类； 根据实验观察指标和标本的需要量选择动 物的种类，如需要标本的量大，应选择较大 的动物，如犬、兔； 根据每一种动物模型动态病理生理变化的 规律，安排标本采集和给药的时机，以取得 最佳的实验结果，所以在正式实验之前，一 定要做预实验，明确在当时实验条件下动物 模型动态变化规律；
坏死性肾病动物模型( 阿霉素法) 坏死性肾病动物模型 阿霉素法 制备方法
选用大鼠250～300g，右肾摘除，7天后， 5mg/kg阿霉素尾静脉注射一次;术后第30天 重复注射阿霉素3mg/kg。
机理及应用评价
大鼠24小时内动物肾功能受损。小鼠注 升汞4小时后，即可造成急性中毒性肾病 。
机理及应用评价
肾疾病研究的常用动物模型
分 类
1. 肾炎动物模型 2. 肾病动物模型 3. ARF动物模型 动物模型 4. CRF动物模型 动物模型 5. 坏死性肾病动物模型 6. 转基因动物模型
分 类
1. 肾炎动物模型
1) Heymann肾炎模型（同种免疫复合物 肾炎模型（ 肾炎模型 性肾炎) 性肾炎 2) thy-1.1肾小球肾炎模型 肾小球肾炎模型 3) 肾毒性血清肾炎（Masugi肾炎）模型 肾毒性血清肾炎（ 肾炎） 肾炎 4) 肾小管间质性肾炎动物模型 5) 局灶性肾炎动物模型 6) 急性肾盂肾炎动物模型
柴苓归芪汤加蚓激酶对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用

柴苓归芪汤加蚓激酶对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用

柴苓归芪汤加蚓激酶对实验性肾病综合征大鼠肾功能的保护作用阿霉素肾病（adriamycin nephropathy, AN）大鼠模型是经典的实验性肾病综合征模型之一，初期的病理改变类似于人的微小病变型肾病，进一步发展可形成局灶节段性肾小球硬化［1］。

本实验采用此模型，观察柴苓归芪汤对大鼠血、尿生化指标及肾组织病理形态学的影响，并以他汀类降脂药物辛伐他汀作为对照，重点观察该方对尿蛋白及脂质代谢的影响，探讨该方保护肾功能及防止肾功能衰竭发生的作用机制。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验动物选用清洁级健康雄性SD大鼠36只，体质量(180±10 ) g，河北医科大学动物中心提供，编号DK03110102。

1.1.2 实验用药阿霉素注射针剂，10 mg/支，汕头经济特区明治医药有限公司生产，批号020702。

柴苓归芪汤组成：柴胡10 g、黄芩10 g、当归15 g、黄芪30 g、茯苓15 g、猪苓12 g和地龙。

除地龙外，余药经水煎、过滤、浓缩后，制备成含生药1.8 g/ml的煎剂。

地龙中主要活性成分蚓激酶在65 ℃以上时活性开始下降，85℃30 min活性完全丧失［2］，因此不能入煎剂，故用其提取物蚓激酶代替地龙冲服使用。

蚓激酶，30万U/粒（1 500 U/mg），北京百奥药业有限责任公司生产，批号20030706；辛伐他汀，10 mg/片，杭州默沙东制药有限公司生产，批号N1027。

1.2 分组、造模及药物处理所有实验动物予以普通饲料适应性喂养1周后，置于清洁代谢笼内取尿以检测尿蛋白和尿红细胞，全部为阴性。

36只大鼠随机分为正常对照组（6只）、模型组（10只）、辛伐他汀组（10只）和柴苓归芪组（10只）。

模型组、辛伐他汀组和柴苓归芪组予以尾静脉注射阿霉素（5 mg/kg），正常对照组注射等量生理盐水。

造模1周后开始灌胃，辛伐他汀组给予辛伐他汀1 mg ・kg1・d1，柴苓归芪组给予柴苓归芪汤煎剂27 g・kg1・d1，用药剂量均为成人的15倍；蚓激酶按25 mg/kg，2次/d给药［3］。

新活素对阿霉素大鼠心衰模型中IL-6以及BNP的影响

新活素对阿霉素大鼠心衰模型中IL-6以及BNP的影响

新活素对阿霉素大鼠心衰模型中ＩＬ－６以及ＢＮＰ的影响摘要】目的：探讨新活素对心力衰竭大鼠模型中白介素６（ＩＬ－６）以及Ｂ型尿钠肽（ＢＮＰ）表达的影响。

方法：健康大鼠４０只随机分成四组：Ａ组（１０只，对照组）：正常饲养，不做任何处理；Ｂ、Ｃ、Ｄ组分别１０只为造型成功组，而后每日用生理盐水灌胃；每日卡托普利１５ｍｇ／ｋｇ灌胃；以及新活素１８μｇ／ｋｇ灌胃。

饲养６０天后全部处死，对白介素６以及Ｂ型尿钠肽（ＢＮＰ）的表达水平进行血液及心肌组织免疫组织化学检测及相关统计分析。

结果：心衰模型组与对照组比较，大鼠血清中白介素６以及ＢＮＰ水平明显升高，新活素组以及卡托普利组与心衰模型组相比较，血清中白介素６以及ＢＮＰ水平明显降低；免疫组化检测显示心衰模型组与对照组比较白介素６以及ＢＮＰ水平明显升高；新活素干预组及卡托普利干预组白介素６以及ＢＮＰ表达水平均较心衰模型组明显降低。

结论：新活素和卡托普利一样能够有效改善心衰，减轻心衰症状，调节神经内分泌，改善预后。

【关键词】新活素；心力衰竭；白介素６；Ｂ型尿钠【中图分类号】Ｒ２【文献标号】Ａ【文章编号】２０９５－７１６５（２０１５）０７－０３７３－０２慢性心力衰竭是大多数心血管疾病的终末阶段，临床上以肺循环和体循环淤血为主要特征［１－２］。

慢性心力衰竭总体预后差，对轻、中度慢性心力衰竭的早期诊断及评价治疗效果可明显改善患者的预后［３］。

心力衰竭过程中炎性细胞因子发挥了重要作用［４］，“神经激素模式”是慢性心力衰竭主要的发病机制之一，同时炎性细胞因子的假设又进一步补充了其发病机制［５］。

而新活素是自从在２００１年８月美国食品和药品管理局（ｆｏｏｄａｎｄｄｒｕｇｓａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＦＤＡ）批准ｒｈＢＮＰ药物奈西利肽用于治疗急性心力衰竭，２００５年欧洲心脏病学会将ｒｈＢＮＰ列入心衰的治疗指南，我国研发的ｒｈＢＮＰ（商品名：新活素）于２００５年１０月上市。

多项大型临床研究已证实了应用ｒｈＢＮＰ治疗心力衰竭取得了良好的临床治疗效果。

真武汤对阿霉素所致大鼠肾损伤的治疗作用

真武汤对阿霉素所致大鼠肾损伤的治疗作用

真武汤对阿霉素所致大鼠肾损伤的治疗作用李亚丽;李志杰;张燕;陆海英;林敏;张悦【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2013(029)011【摘要】目的:研究真武汤对阿霉素肾病模型(adriamycin nephropathy,AN)大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子(podocin和nephrin)表达的影响,探讨其防治阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机制.方法:采用常规生化、病理方法(包括HE染色、Masson染色及电镜)观察真武汤对AN模型所致纤维化大鼠肾功能、肾组织形态学变化及羟脯氨酸(Hyp)含量的改善作用;采用蛋白免疫印迹等方法探索真武汤对足细胞标志蛋白podocin和nephrin信号分子表达的影响.结果:模型组大鼠尿蛋白(TP)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)显著增加,肌酐清除率(CCr)显著下降(P<0.05);Hyp显著增加(P<0.05);肾组织podocin和nephrin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);肾小管萎缩,基底膜增厚;足突扁平、融合、消失.肾小球集中现象明显;部分肾小管扩张,肾小管上皮细胞变性,蛋白管型明显;肾间质纤维组织增生和较多炎症细胞浸润.与模型组相比,各治疗组TP、BUN和SCr均有一定程度的下降,CCr显著提高;Hyp明显下降(P<0.05);真武汤组肾组织podocin和nephrin蛋白表达水平显著提高(P<0.05);肾组织病变程度轻于模型组.结论:真武汤能减少阿霉素肾病大鼠肾组织羟脯氨酸含量,改善肾功能及减轻病理损伤.真武汤降低模型大鼠蛋白尿的作用可能与其维持足细胞podocin和nephrin的表达有关.【总页数】7页(P1994-2000)【作者】李亚丽;李志杰;张燕;陆海英;林敏;张悦【作者单位】上海中医药大学科技实验中心,上海,201203;上海中医药大学科技实验中心,上海,201203;上海中医药大学科技实验中心,上海,201203;上海中医药大学护理学院,上海,201203;上海中医药大学科技实验中心,上海,201203;上海中医药大学基础医学院,上海,201203【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.真武汤对阿霉素所致小鼠肾损伤保护作用的实验研究 [J], 舒适;张瑞义;徐中菊;陆海英;李志杰;张悦2.叶黄素对阿霉素所致大鼠心、肾损伤的保护作用 [J], 张慧珠;王丽娜;王智云3.商陆对阿霉素所致肾损伤大鼠肾组织NO浓度的影响 [J], 庞军;张克非;余伍中;王宏;李明;李辉;王颖4.真武汤对大鼠阿霉素肾病的治疗作用及其机理研究 [J], 何岚;蔡宇;陈朝晖;徐月红;胡海燕5.丹参及生脉液对阿霉素所致大鼠肾小球硬化的实验性治疗作用 [J], 彭佑铭;刘伏友;罗季安;刘瑞洪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。