单侧肾切除+股静脉注射阿霉素制作进展性肾病模型

ｍ ｍｏｄｅｌ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｆｕｌ ｂｙ ｔｍｉｌａｔｅｍｌ ｎｅｐｈｒｅｃｔｏｍｙ ａｎｄ ｉｎｊｅｃａｎｇ ａｄｒｉａｍｙｅｉｎ
ｗｉｔｈ ｆｅｍｏｒａｌ
ｖｅｉｎ岫ｅｃｔｉｏｎ．
ｆＫｅｙ ｗｏｒｄ】Ｇｉｏｍｅｎｒｌｏｓｄｅｏｒｓｉｓ；Ａｄｒｉａｎｒｙｒｉｎ；ＡｎｉｍａＩ ｍｏｄｅｌ
慢性进展性肾病特征是血肌酐渐渐升高，病理表现为局灶节 段肾小球硬化（ＦＳＧＳ）和肾间质纤维化。研究其动态变化及机制， 已成为近几年肾病学领域的研究热点。建立稳定且操作简单易行 的动物模型是这一研究的基础。我们根据文献制作方法，在预实 验中发现制作本模型时给大鼠尾静脉注射难度大，常穿破静脉不
手术后第８天大鼠戊巴比妥钠麻醉后备皮消毒，在假股沟切开皮
肤，分离肌肉，暴露出股静脉，持ｌｍｌ的针筒刺入股静脉，推注阿 霉素４．０ｍｇ／ｋｇ，．注射后压迫止血约１分钟，缝合皮肤。 另钋对照组８只行假手术，打开腹腔，剥离肾脏脂肪包膜，关闭腹 腔，缝合切口。假手术后分别于第８天右股静脉注射蒸馏７Ｊ（ｏ．５１１１１。 ３检测指标与方法
ＨｅＩｉｃｏｂａｃｔｅｒ
ｈｕｍａｎ
ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ
ｇａｌＩｓｔｏｎｅｓ［Ｊ１．Ｓｃａｎｄ
ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｊ
Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒ０１．２００２，３７（０：１１２－１１９． 【４】
ｐｒｅｓｅｎｃｅ Ｓｉｌｖａ ｏｆ ｃＰ，Ｐｅｒｅｉｒａ－Ｌｉｍａ ｉｎ
ＪＣ．Ｏｌｉｖｅｉｒａ＾Ｇ．ｅｔ
尿蛋白定量测定
分别于手术前一天（造模前）、阿霉素
本实验例数较小有关，有待扩大例数进—步研究本模型死亡率。 总之，通过单侧。肾切除＋阿霉索（４．Ｏｍｇ／ｋｇ）股静脉注射制备 慢性进展性肾病大鼠模型切实可行。该模型有制作方法简单，模型 制备周期短，均一性较高，类似与人类的进行性肾脏病等优点。团 参考文献
挂：’与对照组比较尸＜０．００１。
性较差。我们后来探索发现皮肤切开后股静脉管径较大，注射容 易，阿霉素不易渗出静脉外，且能准确控制注射剂量。 本研究通过给大鼠一侧肾切除后一次性股静脉注射阿霉素后大 鼠表现为大量蛋白尿、低蛋白血症，高胆固醇血症、肾功能进行性下
基础医学｜Ｂ∞ ｉｃ式ｏｄｉｃ ｎｅ
模犟组制作方法：用戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉大鼠，剪 毛常规消毒，背部切口ｌ～１．５ｃｍ，剥离肾上腺，切除左。肾，缝合切口。
ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｃｈａｎｇｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ２４ ｈｏｕｒ ｕｒｉｎＣ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ，ｂｌｏｏｄ ｌｉｐｉｄ ａｎｄ Ｓｅｒｕｍ ｃｒｅａｔｉｎｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ；Ｌｉｇｈｔｓｃｏｐｅ ｓｈｏｗｅｄｔｈｅｆＩ：ａｇｍｅｎｔ ｓｅｇｍｅｎｔａｌｇｌｏｍｅｒｕｌｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓｏｆｍｏｄｅｌ ｒａｔｓｗａｓｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｎｇｄｉｆｆｕｓｅｌｙａｂｏｖｅ ７０～８０ｐｅｒｃｅｎｔ，ｔｕｂｕｌｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｃｅｌｌｓ、ｖｅ僻 ａｔｒｏｐｈｙ，ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒ
ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ
ｗｉｔｈ
ｃｈｏｌｅｌｉｔｈ Ｊａｓ Ｊｓ
ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊ 【５】
ｏｂｉｏｌ，２００３．４１０２）：５６１５－５６１８．
曹月敏．张万星．郭怀斌等，幽门螺杆菌与胆囊结石形成关系的
研究【Ｊ】．中国微创外利杂志．２００５，５（８）：６７４—６７５．
２．１
动物模型的制备ＳＤ大鼠适应陛饲养ｌ周后，８只作为
模型组，８Ｒ作为对照组。
醇浓度增高、胆汁滞留。免疫调节因素、促成石因子和抗成石因子作 用失衡以及胆囊动力损害等。随着研究的不断深入，从胆囊黏膜、结 石及胆汁中用ＰＣＲ寸７法扩增到Ｈｐ ＤＮＡ物质的提取，Ｈｐ在胆结石形 成中的作用已引起越来越多人的关注。近年，田志杰等“１报道在４４例 胆囊结石患者的胆石，胆汁和胆囊黏膜中Ｈｐ阳性率分别为４．５５％。 ３８．２４％和７９．５５％。国外有报道采用分子生物学技术，从胆囊结石患 者的胆石、胆汁和胆囊黏膜中检测到Ｈｐ，证实为Ｈｐ属细菌ｐｑ。我们 采用ＰＣＲ法检测两组Ｈｐ的感染情况，研究组中Ｈｐ阳性ｇＮ３５．６０／０， 与对照组比较差异有统计学意义，Ｐ＜０．０５，提示胆石症患者的胆囊 黏膜存在Ｈｐ及其ＤＮＡ物质，所以我们推测胆囊Ｈｐ感染可能是促使 结石形成的潜在危险因素，有可能参与了胆结石的形成。Ｓｌｉｖａ等Ⅲ采 用基因扩增，在２０例胆囊黏膜阳性者中发现有１８例合并胆囊结石，从 而认为Ｈｐ可能是胆囊结石形成病因之一。Ｍｏｎｓｔｅｉｎ等例运用ＰＣＲ的 实验方法对胆石症患者的胆固醇结石细菌ＤＮＡ进行扩增、测序和分 析，结果说明Ｈｐ口－Ｊ＂能是胆固醇性结石菌群中固有的一部分，定植在
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ｗｉｔｈ ｆｅｍｏｒａｌ ｖｅｉｎ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｄｉｌａｔａｔｉｏｎ
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ｆｒｏｍ（ｈｉｌｅａｎｓ
ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ．１９９８，１１４（４）：７５５－－７６３．
嘲３
Ｍｏｎｓｔｅｉｎ ｐｙｌｏｒｉ
ＨＪ，Ｊｏｓｓｏｎ ＤＮＡ ｉｎ
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ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ
模型组大鼠先行左肾摘除，其后第８天予阿霉素４ｍｇ／Ｋｇ股静
脉注射．对照组则以假手术和生理盐水静脉注射代替。观察大鼠尿蛋白。血生化，肾病理等。结果
造模后模型组的尿蛋白定量．倒ｔＣＨＯＬ、Ｓｃｒ茹／较对照组高，
血清白蛋白低。造模前，造模后２周，造模后８周三个时间相比．模型组的血清ｃＨＯＬ、Ｓｃｒ随时间渐升高；肾脏病理可见７０％～８０％肾小球有不同程度的硬化，肾小管 萎缩．间质可见明显纤维化。结论通过单侧肾切除＋阿零素（４．Ｏｍｇ／ｋｇ）股静脉注射可制备慢性进展性肾病大鼠模型。 【关键词】阿霉素。肾小球硬化；动物模型
作者单位：３５１１００莆田学院附属医院ｌ徐海山）３５４２００南京军区 福州总医院（庄永泽）３５１１１１莆田涵江医院（曾俊婷） 通讯作者：徐海山Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｈｓｚｊｔ＠１２６．ｃｏｍ
能很好控制阿霉素剂量，影响模型均一性，所以我们改良了该模 型的制作方法，现报告如下： １材料 ＳＤ雄性大鼠１６只，体重（２００＋１０）ｇ，购于上海斯莱克实验动物 有限公司。阿霉素购于浙江海正药业股份有限公司，批号０５０９０８。 ２实验方法
基础医学ｉａｓｏ蓉ｄｉｃ一摹。
促成核的代谢产物，同其他促成核因子一起导致促、抗成核因子失
衡，并形成一个色素楱０，吸附沉积的钙盐和胆固醇。
在胆囊炎胆石症患者的胆囊黏膜中检测到Ｈｐ及其ＤＮＡ物 质，—方面了解Ｈｐ的感染可能参与了胆囊结石的形成，另—方面 将有可能为胆石病的预防和治疗提供新的思路和方法。团 参考文献
万方数据
一４１——
当代医学２００９年１２月第１５卷第３４期总第１８９期Ｃｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃ．２００９，Ｖ０１．１５
Ｎｏ．３４ Ｉｓｓｕｅ
Ｎｏ．１８９
表１两组大鼠尿蛋白定量；（ｍｇ／２４４ｘ时）比较旺±，）（ｎ＝８）
量，血清生化指标（白蛋白、总胆固醇、肌酐）组间比较差异无显著性 （Ｐ＞Ｏ．０５）。造模２周及８周时，与对照组相比，模型组的尿蛋白定量、 血清胆固醇、肌酐均较高ｉ（Ｐ＜Ｏ．０１），血清白蛋白均较低（Ｐ＜０．０１）。 造模前、造模２周、造模８周前后三个时间相比，对照组的上述 各个指标差异无统计学意义；模型组的血清ＣＨＯＬ，Ｓｅｔ随时间渐 升高（Ｐ＜０．０１）。（如表ｌ、表２）。
【６】Ｂｏｄｅ
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ
Ｅｕｒ ｐｙｌｏｒｉ ｏ．
ａｓｓｏｃｉｔｅｄ
Ｑ，ｅｔ
ｗｉｔｈ
ａ１．Ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ
Ｃ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｃａｇＡ
ｏｆ
ｇｅｎｅ［Ｊ］．
Ｊ
Ｃｌｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ．２００１．９６（４）：１０１４－－１０１８．
４．３
注：’与正常组比较Ｐ＜Ｏ．００１． 表２两组大鼠血清生化指标的比较暖士Ｊ）（ｎ＝８）
肾脏病理学改变
对照组。肾小球正常，肾小管间质正
常。模型组肾小球球囊黏连明显，肾ｑ、球硬化呈局灶节段性分布， 约７０％－８０％肾小球有不同程度的硬化，球性硬化达５％～１０％左 右；肾小管内可见蛋白管型，上皮细胞萎缩，小管扩张，问质可见 明显纤维化和炎细胞浸润。模型组的肾小球硬化指数、肾小管间 质病变积分明显升高（Ｐ＜０．０１）（如表３）。 ５讨论 肾病进展的机制日前尚未完全明确。因此，建立一个稳定的、 重复性能好的动物模型会对临床研究提供很好的帮助。阿霉素 肾病模型是目前常用的模拟人类肾小球疾病模型之一。近年研 究发现，给老鼠一侧肾切除＋静脉阿霉素注射可以制作肾小球硬
Ｋｕ
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ｐｒｏＩｉｆｅ ｒａｔｉｏｎ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｈｅｐａｔｏｌｉｔｈｉａｓｉｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｇａ８ｔｒｏｅｎｔｅｒｏＩｏｇｙ．２００２．４９（４５）：６４８．
注：’与正常组比较Ｐ＜Ｏ，０５。 表３两组大鼠肾脏病理改变比较旺±Ｊ）（ｎ＝８）
化动物模型”‘５１。这种模型制作方法可靠、稳定性高，模型制备周 期短，实验重复性好，类似与人类的进展性肾病等优点。但是， 上述研究报道模型组老鼠死亡率高达１５％－５６％。大鼠模型容易 操作，．价格不贵，采集尿样和血样简便且可以反复多次采样动态 观察。所以制备肾病模型大鼠较小鼠更常用。我们在预实验过程 还体会到尾静脉注射比较难，阿霉素容易渗出静脉外造成大鼠尾 巴腐烂，且不能保证准确的阿霉素剂量进入大鼠体内，模型均一