实验九 水中细菌总数,大肠菌群数的结果观察

检测水中细菌实验报告

实验目的

本实验旨在探究不同水源中细菌的存在情况，以检测水质是否安全，并且比较不同水源中细菌的数量差异。

实验材料

1. 不同水源的取样瓶 - A组：自来水，B组：河水，C组：井水

2. 细菌培养基

3. 培养皿

4. 恒温培养箱

5. 显微镜

6. 微生物鉴定手册

实验步骤

1. 将取样瓶置于实验台上，避免受到其他污染源的干扰。

2. 分别取代表性的自来水、河水和井水样品，并将每个样品分别装入对应组别的取样瓶中。

3. 将每个样品的取样瓶稍微晃动，以确保细菌均匀分布于水中。

4. 取样瓶的标签上注明所属组别。

5. 在实验室中，为每个组别准备三个培养皿，并在每个培养皿中倒入细菌培养基（约满一半）。

6. 分别将A组、B组和C组的水样倒入相应的培养皿当中。

7. 用试管夹将每个培养皿退出4毫升的液体（水样+培养基），并转移到三个不同的培养皿中，确保菌液均匀地分散。 8. 紧密盖上培养皿的盖子，将其放入恒温培养箱中，设置合适的培养温度（例如37）。

9. 培养72小时后，取出培养皿进行观察，并使用显微镜观察细菌的形态。

10. 根据细菌的形态和相应的实验结果，使用微生物鉴定手册进行细菌的鉴定与分类。

实验结果

观察培养皿后，我们发现以下结果：

- A组（自来水）：培养皿上观察到一些细菌的生长，但数量较少。

- B组（河水）：培养皿上观察到大量细菌的生长，并且形成了密集的细菌菌落。

- C组（井水）：培养皿上观察到适量细菌的生长，数量介于A组和B组之间。

实验分析

根据细菌的生长情况，可以初步得出以下结论：

1. 自来水中的细菌数量较少，说明自来水的水质较为安全。

2. 河水中的细菌数量较多，可能存在潜在的食品污染风险，需要处理后才能安全饮用。

3. 井水中的细菌数量处于中等水平，需要进一步检测和处理，以确保水质安全。

实验总结

通过实验我们了解到不同水源中细菌的存在情况，同时比较了各个水源中细菌数量的差异。实验结果显示，自来水的水质较为安全，而河水和井水中细菌的数量则需要进一步处理。因此，在生活中，我们应该选择可靠的水源，并且对非自来水进行必要的过滤和消毒处理，以确保饮用水的安全。

1 多管发酵法测大肠杆菌群

一、 实验目的

1、 学习测定水中大肠杆菌群数量的国标测试法（主要为多管发酵法）

2、 了解大肠杆菌群的数量在水中的重要性

二、 实验原理

我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85中关于生活饮用水的细菌标准具体规定如下：

1、 细菌总数1ml水中不超过100个。

2、 大肠杆菌数1L水中不超过3个。

3、 若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，大肠杆菌群数平均每升不得超过10000个。

多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称 MPN 来表示试验结果的。实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。

三、 适用范围：

大肠菌群系指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品以及饮用水的卫生质量。

四、 检验程序：

检样→ 稀释 → LST发酵管（36±1℃，24±2h）

↓→不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告

产气 →BGLG（36±1℃，48±2h） → 不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告

产气 → 大肠菌群阳性 → 报告

五、 操作方法：

5.1 以无菌操作，将检样10ml被测液放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。

5.2 用1ml 灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml 灭菌生理盐水

多管发酵法测定水中大肠菌群

摘要：初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不的为阴性反应。平板分离实验中把初实验产期产酸的试管的菌接到伊红美兰琼脂平板上然后培养24小时。复发酵实验中将以上大肠杆菌阳性菌落，经涂色染色为革兰阴性无芽孢杆菌，通过次试验进一步证实

原理：初发酵实验：发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一个杜氏小管。乳糖能其选着作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠杆菌能发酵乳糖而产气产酸。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为指示剂，细菌产酸后培养基由原来的紫色变为黄色。

初步发酵实验中将水样接种与乳糖蛋白胨液体培养基的发酵管内，37度下培养，24内小管中有气体形成，并且培养基浑浊，颜色改变，说明水中存在大肠杆菌，为阳性如果，如果出现产生气泡但不变色或者变色但不产气的情况，应该延长培养至48小时，若仍不产气的为阴性结果。

平板分离：伊红美兰琼脂培养基有伊红和美兰两种染料，在此作为指示剂，大肠杆菌发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料及结合，使培养基产生有金属光泽的深紫色菌落。

复发酵实验：以上大肠杆菌阴性菌落，经涂片染色为革兰氏阴性无芽孢的，通过此试验进一步证实。原理与初发酵实验相同，经24小时培养产酸产气的，最后确定为大肠杆菌阴性结果。

材料与用具：

1. 培养基

乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置杜氏小管） 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内有杜氏小管） 伊红美兰琼脂平板

2．无菌水

3. 用具

载玻片 灭菌带玻璃塞空瓶 灭菌试管 灭菌吸管

方法：

1水样的采取

从不同水体（自来水、河水）中采集样品

2自来水检查

（1） 初发酵实验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10ml水样。混匀后，37度培养24小时，24小时候没产气的继续培养至48小时。

水中总大肠菌群测定

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水中总大肠菌群的测定－多管发酵法

一、实验目的

联合水净化工程中的细菌查验， 掌握水环境监测中和给水水质查验中大肠杆菌群数的测定方法，同时经过大肠杆菌群的测定，认识大肠杆菌群的生化特征。二、原理

总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法查验。 多管发酵法的原理是依据大肠菌群

细菌能发酵乳糖、 产酸产气以及具备革兰氏染色阴性， 无芽孢，呈杆状等相关特

性，经过初发酵试验、 平板分别和复发酵试验等三个步骤进行实验求得水样中

的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（ most probable number） ，简称

MPN 表示。

三、仪器

高压蒸气灭菌器；恒温培育箱；冰箱；生物显微镜；载玻片；酒精灯；镍铬丝接

种棒；培育皿（直径 100mm） ；试管（18× 180mm） ；吸管（1、5、10mL） ；

烧杯；锥形瓶；采样瓶等等。

四、培育基的制备：

1.乳糖蛋白胨培育液：将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉膏、 5g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶解于

1000mL 蒸馏水中， 调理溶液 pH 为—， 再加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1mL，充足混匀，分装于试管中，于 115℃高压灭菌器中灭菌 20min，

储存于冷暗处备用。

2.三倍浓缩乳糖蛋白陈培育液：按上述乳糖蛋白胨培育液的制备方法配制。除蒸

馏水外，各组分用量增添至三倍。

3.品红亚硫酸钠培育基

（ 1）储备培育基的制备：于 2000mL 烧杯中，先将 20—30g 琼脂加到 900mL

蒸馏水中，加热溶解，而后加入 3.5g 磷酸氢二钾及 10g 蛋白胨，混匀，使其

溶解，再用蒸馏水增补到 1000mL，调理溶液 pH 至—。趁热用脱脂棉或

绒布过滤，再加 10g 乳糖，混匀，定量分装于 250 或 500mL 锥形瓶内，置于

高压灭菌器中，在 115℃灭菌 20min，储存于冷暗处备用。

（ 2）平皿培育基的制备：将上法制备的储备培育基加热消融。依据锥形瓶内培