丙型肝炎病毒核酸荧光定量检测法的性能验证
崔燕红;赵一琳;宛传丹
【摘 要】目的 对基于QIGEN cube全自动核酸提取仪与ABI 7500核酸扩增仪的丙型肝炎病毒(HCV)-RNA定量检测系统进行性能评估.方法 参照《临床实验室对商品定量试剂盒》WS/T 420-2013的性能验证方案,采用质量控制(质控)血清与临床标本评价所用商品试剂盒的精密度、正确度、线性范围与检测下限;同时参照《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》标准,统计分析实验偏差并与厂家声明的性能指标进行比较.结果 精密度验证结果显示,2个浓度水平(level 1、level 2)质控品的批内变异系数(CV批内)分别为0.3％、0.9％,批间变异系数(CV批间)分别为0.4％、1.11％,均小于厂家声明值(5％).线性范围试验显示,在1.0×102～1.0×108 kU/L范围内呈良好线性(R2=0.999,P<0.001),高于厂家声明区间(2.0×101～1.0×109 kU/L).正确度验证结果显示,室间质评中的5个浓度水平质控品的实测值与质控样本理论值间偏倚分别为0.10、0、0、0.26和0.26,均小于0.4对数值(log值).最低定量检测下限为1.0×102 kU/L,高于厂家声明的最低检测限(0.5×102 kU/L),但与定量限(1.0×102 kU/L)一致.结论本实验室建立的HCV-RNA定量检测系统在精密度、正确度、线性范围与检测下限方面的性能指标均满足卫生行业标准与ISO 15189医学实验室质量认可准则的要求,能为临床提供可靠的检验报告.
【期刊名称】《实用检验医师杂志》
【年(卷),期】2018(010)003
【总页数】5页(P168-172) 【关键词】丙型肝炎病毒;核酸定量检测;性能验证;精密度;正确度;线性范围
【作 者】崔燕红;赵一琳;宛传丹
【作者单位】215500 江苏常熟,常熟市医学检验所分子生物学实验室;215500 江苏常熟,常熟市医学检验所分子生物学实验室;215500 江苏常熟,常熟市医学检验所分子生物学实验室
检验医学与临床２０１１年３月第８卷第５期Ｌａｂ Ｍｅｄ Ｃｉｉｎ，Ｍａｒｃｈ ２０ｌ１，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．５ ・ ５８１ ・ ・临床研究・ 实时荧光ＲＴ—ＰＣＲ快速检测肠道病毒ＲＮＡ及其临床意义 谢建红，肖奇志，张永良，周玉球，田 芬（广东省珠海市妇幼保健院检验科 ５１９００１） 【摘要】目的应用实时荧光逆转录～聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法快速检测肠道病毒ＲＮＡ，为手足口病的早期 诊断提供临床依据。方法 采用实时荧光ＲＴ—ＰＣＲ法检测手足口病患儿粪便、脑脊液中肠道病毒通用型、柯萨奇 病毒Ａ组１６（ＣＡ１６）和肠道病毒７１型（ＥＶ７１）ＲＮＡ。结果 ２３４份粪便标本中肠道病毒通用型阳性２１４例，检出率 为９１．４５ ；ＣＡｌ６阳性５６例，阳性率为２３．５Ｏ ；ＥＶ７１阳性８７例，阳性率３７．１７ ，其中有４例同时检出ＣＡ１６和 ＥＶ７１。２份脑脊液标本中３种肠道病毒核酸结果均为阴性。结论 实时荧光ＲＴ ＰＣＲ能对肠道病毒ＲＮＡ进行快 速检测，为手足口病的早期诊断提供诊断依据，并对手足Ｉ２＂病患儿的病情分析、治疗及预后观察起到指导作用。 【关键词】手足口病； 实时荧光逆转录一聚合酶链反应； 肠道病毒 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－９４５５．２０１１．０５．０３２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２ ９４５５（２０１１）０５－０５８１－０２ 手足口病近年来呈爆发趋势，严重影响婴幼儿的生活及学 习，且在一定程度上给社会造成不稳定的因素。特别是２００８ 年３月在安徽阜阳爆发的手足口病疫情，出现了部分死亡病 例，从而引起广泛关注＿ｊ］。如何对手足口病的病原学进行快速 检测，对手足口病的早期诊断、治疗和预后观察显得尤为重要。 本文应用实时荧光逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）检测了 ２３６份手足口病患儿粪便、脑脊液标本．分别测定肠道病毒 （ＥＶ）通用型（以下简称ＥＶ）、柯萨奇病毒Ａ组１６（ＣＡ１６）和 ＥＶ７１核酸，现报道如下。 １资料与方法 １．１标本来源检测标本均来自２０１０年５～８月本院手足口 病住院患儿，采集粪便及脑脊液标本２３６份，所采集标本３ｏ ｍｉｎ内送本实验室一２Ｏ℃保存，集中检测。其中男１４５例，女 ９１例，年龄１个月至８岁，平均２岁零１个月。手足ＶＩ病诊断 标准参照卫生部颁布的《手足口病预防控制指南（２００９ 版）》［ 。 １．２仪器与试剂荧光ＰＣＲ试剂购自中山大学达安基因股 份有限公司，包括肠道病毒通用型、ＣＡ１６和ＥＶ７１ ３种。采用 美国ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ７５００实时荧光ＰＣＲ仪进行检测。 １．３方法 １．３．１标本处理肠道病毒ＲＮＡ提取：先将粪便标本用生 理盐水重悬，然后取阴性质控品、阳性质控品及粪便重悬液（脑 脊液）１００ Ｌ，放置于１．５ ｍＬ灭菌离心管，加人２００ Ｉ Ｔｒｉｚｏｌ 试剂及１００ Ｌ氯仿，用振荡器强力振荡２ｏ ｓ后放置３ ｒａｉｎ。 １２ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心２ ｒａｉｎ，取上清液转移至新灭菌的１．５ ｍＬ离 心管中，加１Ｏ Ｌ ＲＮＡ提取液Ａ，用振荡器充分混匀，８ ０００ ｒ／ ｒａｉｎ离心１ ｍｉｎ后，弃去上清液；加入溶液Ｃ ４００ Ｌ，振荡混 匀，８ ０００ ｒ／ｒａｉｎ离心１ ｒａｉｎ，６０℃加热５ ｒａｉｎ，待沉淀变白后，加 入３Ｏ Ｌ ＤＥＰＣ水，充分混匀后可直接用于ＰＣＲ。 １．３．２实时荧光ＲＴ－ＰＣＲ扩增 取阴性质控、阳性质控及样本 ＲＮＡ模板５ Ｌ加入ＰＣＲ反应液中，使总体积为２５ Ｌ，８ ０００ ｒ／ ｍｉｎ离心数秒，４Ｏ℃２５ ｍｉｎ，１个循环，９４℃３ ｍｉｎ，１个循环，然后 ９３℃１５ ｓ、５５℃４５ ｓ，循环４Ｏ次，在５５℃收集荧光。 １．３．３结果判断检测样本无典型ｓ型曲线或Ｃｔ值大于３５为 阴性，样本呈典型ｓ型曲线且ｃｔ值小于或等于３５则为阳性。 １．３．４质量控制 阴性质控品无典型ｓ型扩增曲线或无Ｃｔ 值显示；阳性质控品呈典型ｓ型扩增曲线或ｃｔ值小于或等于 ３Ｏ，同时满足两个条件，则实验有效，否则需重新检测。 １．３．５统计学方法所有数据使用ＳＰＳＳ１１．５统计软件进行 分析，全部采用Ｙ 检验分析，以Ｐ＜０．０５为差异具有统计学 意义。 ２结 果 ２．１ ２３６份手足口病患儿粪便及脑脊液标本检测结果 ２３４ 份粪便标本中ＥＶ阳性２１４例，检出率为９１．４Ｓ ；ＣＡ１６阳性 ５６例，阳性率２３．９３ ；ＥＶ７１阳性８７例，阳性率为３７．１７ ， 二者比较差异具有统计学意义（．）ｆ 一９．６４，Ｐ＜０．０５），表明本 地区手足口病患儿中ＣＡ１６和ＥＶ７１均有感染，但以ＥＶ７１为 主。其中有４例标本同时检出ＥＶ７１和ＣＡ１６，表明存在这两 种病毒的混合感染。但部分标本中ＥＶ阳性，而ＣＡ１６和 ＥＶ７１阴性，表明还存在非ＣＡ１６和ＥＶ７１的其他肠道病毒感 染。２例脑脊液标本中３种肠道病毒核酸均为阴性。结果统 计见表１。 表１ 实时荧光ＲＴ—ＰＣＲ检测ＥＶ、ＣＡ１６和ＥＶ７１阳性结果
龙源期刊网
慢性丙肝患者血清中HCV—RNA与HCV—Ab的相关性分析
作者：刘晓 许琳婧 孙丽萍
来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第12期
[摘要] 目的 探讨慢性丙型肝炎患者外周血中HCV RNA与HCV-Ab联合检测在丙型肝炎诊断的应用价值，为临床提供诊断治疗依据。方法 收集92例可疑慢性丙型肝炎患者血清，采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）进行丙型肝炎病毒检测及ELISA法检HCV-Ab。结果 HCV RNA阳性率为78.3%（72/92）；抗-HCV阳性率为73.9%（68/92）最后，利用SPSS软件做统计分析。结论 HCV RNA含量与抗-HCV含量呈正相关（r=0.892，P
[关键词] HCV RNA； 实时荧光定量PCR； 丙型肝炎病毒抗体
丙型肝炎病毒是单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎属。丙型肝炎呈世界性分布，丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎的病原体，主要由输血和注射等途径传染，其致病机制主要是通过病理性免疫应答导致肝细胞损伤，它还有诱发原发性肝癌的可能[1]。据世界卫生组织统计，全球丙型肝炎病毒（HCV）的感染率约为3%，每年新发HCV病例约315万例[2]，而高度慢性化是该病的最大特征[3]，其中10%-15%发展为肝纤维化，最终每年有1%-4%成为肝癌。由于当前医学界并没有有效的抗病毒药物与HCV疫苗，必须高度重视对于可能患有该类疾病的人群的早发现、早诊断和早治疗，从而有效地对丙型肝炎的发生与传播进行控制。
目前临床对丙型肝炎的诊断仍是以临床症状结合抗-HCV抗体、HCV RNA等实验室指标为临床诊断依据。HCV RNA是HCV的核心成分，Mercier等[4]发展了HCV RNA的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）技术，敏感性高，HCV RNA荧光定量检测被认为是诊断HCV病毒血症的“金标准”[5-6]，可以反映HCV的复制状态以及传染性，继而分析受检者感染丙型肝炎病毒的状态。同时，丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）标志物—HCV抗原抗体系统作为对丙型肝炎病毒感染进行诊断和疗效观察的传统检测， 抗-HCV可维持10年，反映的是宿主免疫系统对病毒感染的反应及免疫状态。
丙型肝炎病毒核酸定量检测性能验证及评价
郭杰; 曲沛; 李韦杰; 周宇; 郭晶晶; 焦炳欣; 王雅杰
【期刊名称】《《传染病信息》》
【年(卷),期】2019(032)005
【总页数】5页(P394-398)
【关键词】HCVRNA; 定量检测; 实时荧光定量PCR; 性能验证
【作 者】郭杰; 曲沛; 李韦杰; 周宇; 郭晶晶; 焦炳欣; 王雅杰
【作者单位】100015 首都医科大学附属北京地坛医院检验科
【正文语种】中 文
【中图分类】R248.4
研究认为HCV是引起90%～95%输血后肝炎的主要病原体[1-4]。据WHO统计，全球约有2亿人感染HCV，并面临发生肝硬化和/或肝癌的风险[5]。目前，血清HCV RNA定量检测是实验室诊断丙型肝炎的金标准。及时准确的检测对于HCV感染者的诊断和预后具有至关重要的意义。其中HCV RNA商品试剂盒分析性能评价是保证检验结果准确可靠的重要依据之一。根据中华人民共和国卫生行业标准《临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证（WS/T 420-2013）》[6]规定，当我国食品药品监督管理局批准的检验方法或试剂盒进行了重要修改时，应对厂家制定的各项主要分析性能指标进行验证，依据《美国临床实验室改进修正法规88》要求，临床实验室可只对下列3项主要分析性能进行验证：正确度、精密度和线性（测量区间）。北京地坛医院所采用的丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒自18012511批号开始，检出限由250 IU/ml改为50 IU/ml，为验证在当前实验条件下该试剂盒检出限是否达到厂家制定的分析指标，我们对该试剂盒的性能进行了符合补充验证。
1 材料与方法
1.1 标本 收集首都医科大学附属北京地坛医院检验科不同浓度的临床血清（血浆）标本共30例，标本浓度尽量涵盖线性范围，于-20℃冰箱保存。
1.2 仪器与试剂 实时荧光定量扩增仪（美国，罗氏 cobas® Z480）。丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒（上海科华，批号18012511）。HCV RNA标准物质GBW（E）090140（北京康彻思坦生物有限公司，批号：201801001）。
