猪苓药材的质量评价标准研究_王弘

Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2021Vol.34No.5质量分析方药·接骨木药材质量标准研究∗师庆媛1，马鹏文1，朱昱澜1，邓月婷1，2△1甘肃省中药固体分散制剂重点实验室/甘肃陇神戎发药业股份有限公司，甘肃兰州730102；2甘肃省中药质量与标准研究重点实验室［摘要］目的：为接骨木药材的现有质量标准研究提供更完善的检验依据。

方法：按照2015年版《中华人民共和国药典》中薄层色谱实验方法考察接骨木齐墩果酸TLC 条件，建立其薄层色谱鉴定方法，并测定水分及总灰分指标。

结果：以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（5∶2∶1）为展开剂，以齐墩果酸为对照品，用10%硫酸乙醇显色，105℃加热，在日光下检视，不同产地10批药材与齐墩果酸对照品在相同的位置上分离出一个相同的紫红色斑点；365nm 下，不同产地10批药材与齐墩果酸对照品在相同的位置上分离出一个相同的黄色荧光斑点。

不同产地10批接骨木水分含量在2.8%～5.2%范围内，总灰分含量在0.8%～2.3%范围内。

结论：该方法简便、数据准确、重复性良好，能为接骨木药材质量标准的建立提供参考依据。

［关键词］接骨木根茎；水分；灰分；齐墩果酸；薄层鉴别［中图分类号］R195［文献标识码］A［文章编号］2096-9600（2021）05-0036-03Study on Quality Standard of JiegumuSHI Qingyuan 1,MA Pengwen 1,ZHU Yulan 1,DENG Yueting 1，2△1Gansu Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Solid Dispersible Preparation/Gansu Longshen Rongfa Pharmaceutical Company,Ltd.,Lanzhou 730102,China;2Key Laboratory of Quality and Standard Research for Traditional Chinese Medicines of Gansu Province AbstractObjective:To provide more perfect inspection basis for the research on the existing qualitystandard of Jiegumu (Williams Elder Twig ).Methods:According to pharmacopoeia of the people's Republic of China (2015Edition),the TLC conditions of oleanolic acid in Jiegumu were investigated to establish TLC identification method,determine the water content and total ash content.Results:Cyclohexane acetone ethyl acetate (5:2:1)was chosen as developing agent,oleanolic acid was used as the reference substance,through developing the color with 10%sulfuric acid ethanol,heated at 105℃and examined in sunlight ,ten batches of medicinal materials from different producing areas and oleanolic acid reference substance separated the same purplish red spot at the same position;ten batches of medicinal materials from different areas and oleanolic acid reference substance separated the same yellow fluorescent spot at the same position at 365nm.The water content of 10batches of Jiegumu from different producing areas ranged from 2.8%to 5.2%,and the total ash content ranged from 0.8%to 2.3%.Conclusion:The method,simple,accurate and reproducible,could provide a reference for the establishment of quality standard of Jiegumu .Keywordsrhizome of Jiegumu ;water content;ash content;oleanolic acid;TLC接骨木为忍冬科植物接骨木Sambucuswilli-amsii Hance 的干燥带叶茎枝、根或根皮。

专利名称：一种猪苓质量的检测方法及其指纹图谱的构建方法专利类型：发明专利
发明人：华茉莉,刘洁,徐云辉,周靖,张倩倩
申请号：CN201811122769.5
申请日：20180926
公开号：CN110954642A
公开日：
20200403
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种猪苓指纹图谱的构建方法、一种猪苓质量的检测方法、一种检测猪苓多糖的单糖组成的方法以及一种猪苓多糖提取物的分离方法。

本发明所述猪苓质量的检测方法应用了能反映猪苓多糖的单糖组成特征的猪苓指纹图谱，可有效地检测分析猪苓汤剂及其配方颗粒的质量。

本发明所述方法操作简单、稳定、重现性好、检测效率高，具有较强实用性。

申请人：上海医药工业研究院,中国医药工业研究总院
地址：200040 上海市静安区北京西路1320号
国籍：CN
代理机构：上海弼兴律师事务所
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第55卷第3期2021年6月Vol55No3Jun•2021华中师范大学学报(自然科学版)JOURNAL OF CENTRAL CHINA NORMAL UNIVERSITY(Nat Si)DOI：10.19603/ki.1000-1190.202103.014文章编号：1000-1190(2021)03-0424-08湖北地区茯苓饮片质量标准研究王运芳X秦文X林华清2,陈剑锋X邹坤1!（1.天然产物研究与利用湖北省重点实验室,三峡大学生物与制药学院，湖北宜昌443002；2.湖北恒安芙林药业有限公司，湖北宜昌443103）摘要：为促进湖北地区中药材深加工和产业结构调整，提高茯苓药材的利用率，带动中药材种植业、中医药知识经济等相关产业的发展，针对湖北地区茯苓饮片质量标准进行了研究.利用HPLC法测定茯苓药材中茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的含量；采用1-苯基3-甲基-5-毗N咻酮（PMP）衍生化法测定水溶性多糖的含量测定，以无水葡萄糖为指标，利用分光光度法，建立了茯苓中水溶性多糖的含量测定方法.对水分、总灰分、二氧化硫残留和醇溶性浸出物进行了检测.经研究，湖北地区10批次茯苓饮片中茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸的平均百分含量分别为0.2592%,0.5579%和0.3538%，水溶性多糖的平均百分含量为0.2516%.该方法简便、稳定、专属性强、重复性好，对茯苓饮片质量了较为系统的研究.关键词：茯苓饮片；三l类化合物；茯苓多糖；高效液相色谱；质量标准中图分类号：R282.5文献标志码：A开放科学（资源服务）标志码（OSID）：茯苓Poria cocos（Schw.）Wolf为多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核［1（］，主要分［我国、湖北、安徽、是中国延用千年的传统中药，可与中药相，且不分季节，管寒、温、风、湿等疾病，都其独特功效，亦用⑷.经研究，茯苓化学成分有三l类、多糖类、笛体、脂肪酸、蛋、腺瞟吟、组氨酸、树胶、胆碱、卵磷脂、氨基酸以及钙、镁、铁、钾机元素.其中主要成分为多糖和三l类成分5,茯苓多糖属于真菌多糖，主要由水溶性多糖和碱溶糖组［6］.在三l类化合物中去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸等含量较高卩11.研究表明其有调节免疫功能、抗肿瘤、扌方面药理作用（1（13，还有保肝、抗衰老、降血糖等作用［1415］.主要受药材的产地、采收时间、加工方法和贮存等因素的影响，茯苓饮片的质量齐.本课题参照国家药监的《中药配方颗量控制与制要求》，在中医药理论的下对茯苓饮片了系统的研究，建立了茯苓中水溶性糖的含量方法，HPLC法茯苓中茯苓酸、氢茯苓酸和苓酸的含量，《中国药》（2020年版）的基础上丰富了茯苓饮片质量的为茯苓药材的利用，促中药材的地深加工和产业结构调整，并带动中药材种植业扌中医药知识相业的发展了较为科学的1材料与仪器1.1仪器Ultimate3000型高效液相色谱仪（戴安公司）；电子天平（上精器司）；SX-2.5-10型马弗炉（上海洪纪仪器设备有限公司）；UV—3100Spectrophotometer（上海美谱达彳器有限公司）；BCD—228CH冰箱（河南新飞电器集团司）；电子天平（上精器！公司）；78-1型磁力搅拌器（常州国华电器有限司）;SHZ-D（/）循环水式多用真空泵（郑州科丰仪器设备有限公司）；DLSB5/—20°C低温冷却液循环泵（巩义市予华仪器任公司）；N-1100旋转蒸（上朗仪器司）；SB-2000水浴锅（上海爱朗仪器有限公司）;GZX-9240 MBE数显鼓燥箱（上迅实业司医疗设备厂）；低温机（德国Eppendorf公司）. 1.2试剂石油g（60〜90°C）（国药集团化学试剂有限公司）；正丁醇（国药集团化学试剂司）；三氯收稿日期:20201107.基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（81803383）. *通信联系人.E-mail：kzou@.cn.第3期王运芳等：湖北地区茯苓饮片质量标准研究425甲烷（国药集团化学试剂有限公司）；乙酸乙酯（天津市富宇精细化工司）95%乙醇（国药集团化学试剂司）；浓硫酸（河南信阳化工厂）；重蒸苯酚（北京鼎国生物司）；甲醇（TEDIA公司）；乙m（TEDIA公司）；纯净水（华润怡宝饮料（中国））司）.甲醇和乙m为纯，其他试剂均为分析纯•1.3药材茯苓饮片10个批次（批号161101〜161110）的原料经三峡大学医学院曾建红教授鉴定为多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓Poia cocos（Schw.）Wolf,植物标本现保存于天然产物研究与利用湖北省重点室•饮片的样品信息 1.表1茯苓饮片的样品来源信息Tab.1Sources of processed slices of Poria cocos批号采收地点161101湖北省英山县杨柳湾镇161102湖北省英山县雷店镇161103湖北省英山县金铺镇161104湖北省罗田县胜利镇161105湖北省罗田县大河岸镇161106湖北省罗田县九资河镇161107湖北省罗田县白庙河镇161108湖北省薪春县张y镇161109湖北省薪春县禅林镇161110湖北省薪春县大同镇2方法与结果2・1形状和颜色茯苓饮片共10个批次，均为去皮后切制成的立方块状，可大小不一，颜棕2.2鉴别主要参照《中国药典7020年版一部收载茯苓饮片项下的检验方法.由图片菌丝棕，细长，稍，有分枝，直径3〜8*m,少数至16*m.见图1（放大200倍）•2.3水分的测定精密称取茯苓饮片粉末（过100目筛）各5g，按《中国药典》2020年版通则0832第二法（烘干法），分别10批次茯苓饮片的含水量，结果见表2.）《中国药典72020年版，水分超过18.0%，故10批次样品中有6批合格.50Jim图1茯苓饮片的显微鉴定图Fig.1Microscopic identification ofdecoctionpieceof Poria.o.os表2茯苓饮片水分含量测定结果(n=3)Tab2Determinationresultsofwatercontentin decoctionslicesof Poria.o.os(n=3)批号含量/%x±s RSD/% 16110124.924.9±0.090.35 16110217.217.2±0.060.37 16110316.516.5±0.070.45 16110415.615.6±0.060.37 16110530.530.5±0.100.32 16110621.621.6±0.110.53 16110724.824.8±0.130.53 16110822.722.7±0.090.41 16110921.321.3±0.130.61 16111016.816.8±0.080.45表3茯苓饮片总灰分含量测定结果(n=3) Tab3Determinationresultsoftotalashcontentin decoctionslicesof Poria.o.os(n=3)批号总灰分/%x±s RSD/% 1611010.300.30±0.00160.54 1611020.500.50±0.00430.86 1611030.500.50±0.00230.46 1611040.300.30±0.00210.71 161105 2.80 2.80±0.01600.58 1611060.720.72±0.00240.33 161107 1.10110±0.00420.39 161108 1.301.3)±).))950.73 1611090.200.20±0.00160.82 1611100.300.30±0.00190.65426华中师范大学学报（自然科学版）第55卷2.4总灰分的测定精密称取茯苓饮片粉末（过100目筛）各5g,按《中国药典7020年版通则2302,分别测定10批次茯苓饮片的总灰分，结果见表3.仅有一批次样品总灰分超过2.0%为不合格.2.5浸出物的测定精密称取茯苓饮片粉末（过100目筛）各5g,按照《中国药典7020年版通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，结果见表4.按照2020版标准，醇溶性浸出物不得少于2.5%，则10批样品均合格.表4茯苓饮片浸出物的测定结果(n=3)Tab.4Determinationresultsofextractfromdecoction slice of Poria cocos(,n=3)批号浸出物/%’士SRSD/%1611)12.9 2.9士0.036 1.231611)24.64.6士).)220.471611)32.92.9士).)16).561611)42.92.9士).)331.131611)57.)7.)士).)330.47 1611)64.84.8士).)370.781611)72.82.8士).)281.11611)84.34.3士).)330.761611)93.83.8士).)160.4316111)5.65.6士).)2)0.36表5茯苓饮片二氧化硫残留量的测定结果(n=3) Tab.5DeterminationreNultNofNulfurdioxidereNiduein decoction slices of Poria cocos(n=3)批号二氧化硫残留/（mg•kg'1)’士sRSD/% 1611177士0.029.421611299士0.041.461611388士.2.251611488士.75.941611577士.91 1.2916116110士0.13 1.281611766士.36.591611899士0.11 1.21611977士.65.93161111111士.71.64 2.6茯苓饮片二氧化硫残留量精密称取茯苓饮片粉末（过100目筛）各10g,按照《中国药典》2020年版通则2331二氧化硫残留量测定法项下的第一法（酸碱滴定法）,结果见5.由表5可知，10批次茯苓饮片的二氧化硫残留量在7〜11mg•kg-1范围内，为茯苓饮片质量标准制定提供参考依据.2.7茯苓饮片中水溶性多糖的含量测定茯苓粗多糖和精制多糖的制备［16］：称取茯苓粉末10g（过60目筛，50C烘干24h）,置索氏提取器中，加入石油g100mL,90°C回流提取2h,抽滤.药渣挥尽有机溶剂后，置于圆底烧瓶中，加蒸憎水100mL,称总重量，水浴回流2h后擦干烧瓶外表面，称重后加蒸憎水补足减失重量，摇匀，抽滤.精密量取续滤液50mL,浓缩至5mL.加入95%乙醇25mL,于4C冰箱中放置过夜，离心（3500r•min—1,15min）.弃去上清液，将沉淀干燥至恒重，即得到茯苓粗多糖.将茯苓粗多糖用5mL蒸憎水复溶，加5mL Sevage试剂（氯仿：正丁醇=4:1）,混匀后反复振摇、离心（2000r•min—1,10min），留下水层，重复多次去除蛋白.将水层先在200〜400nm紫外光谱段进行扫描，260〜280nm范围内无吸收峰,再用考马斯亮蓝法测蛋白含量.向浓缩液中加入适量30%H2O2原液（体积比），用0.5mol-L—1的NaOH溶液调节其pH至8,45C水浴4h,将多糖脱色液置于透析袋中，透析袋中无气泡，两端需夹紧.先用自来水流动透析1d,再用蒸憎水透析3d,每12h更换一次蒸憎水.透析后过滤，浓缩至5mL.加入95%乙醇25mL,于4C冰箱中放置过夜，离心（3500r-min—1,15min）,弃去上清液，将沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙g洗涤3次，50C 真空干燥，即得茯苓精制多糖.2.8PMP衍生化法测定粗多糖和精制多糖的单糖衍生化供试品的制备：精密称取茯苓粗多糖10mg和茯苓精制多糖5mg,吹氮气，各加入2mol•L—1三氟乙酸1mL（通风处取用），摇匀，立即封管，水浴6h.从中各取出400*L水解液置具塞试管中，加甲醇适量，氮气吹干，重复操作直到完全清除三氟乙酸.在水解供试品中加0.3mol•L—1NaOH溶液和0.3mol•L—1的PMP溶液各100*L,混合均匀，于70C水浴100min,冷却至室温后加0.3mol•L—1HCl溶液100*L中和，加蒸憎水至1mL,最后各加入1mL 三氯甲烷除去未反应的PMP,弃去油相，重复3次.将茯苓粗多糖和茯苓精制多糖水相分别以0.45*m滤膜过滤后，取续滤液备用.第3期王运芳等：湖北地区茯苓饮片质量标准研究427HPLC条件：色谱柱型号为依利特C18柱％250mm X 4.6mm,5*m；流动相为乙月青(A)—0.1mol・L—1磷酸盐缓冲液(pH6.7)(B),等梯度洗脱，有机相和水相比例为18(A)：82(B)；二极管阵列UV—VIS检测器；检测波长为250nm；柱温为25C，流速为1mL・min—1；进样量为20*L.糖品、茯苓粗多糖、茯苓精制多糖的PMP 衍生物HPLC图分别见图2(a)、2(b)和2(c).1.甘露糖mannitose；2.鼠李糖rhamnose；3.葡萄糖glucose；4.半乳糖galactose；5.木糖xylose图2多糖标准品、茯苓粗多糖和精多糖的PMP衍生物HPLC图Fig.2HPLC chromatograms of PMP derivatives ofstandard polysaccharides,crude polysaccharides of Poria cocos and refined polysaccharides由图2可知，茯苓多糖精制前后多糖中甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和木糖的没生明显变化.品溶液的制备.称取茯苓粉末10g(过60目筛，50C烘干24h),器中，加入石油g100mL,90C回流提取2h,抽滤.药渣挥尽有机溶剂后，置于圆底烧瓶中，加蒸憎水100mL,称总重量，水浴2h瓶面，称；加蒸足减失重量，摇匀，抽滤.精密量取续滤液50mL,浓缩至5mL.加入95%乙醇25mL,于4C冰箱中放置过夜，离心(3500r・min-1, 15min).分离上清液，备用.将沉淀用蒸憎水溶解,定容至100mL容量瓶中，精密移取2.0mL至10.0mL容量瓶中，蒸刻度，摇匀，即得水溶性多糖品溶液.照品溶液的制备.精密称量干燥至恒重的葡萄糖对照品0.1004g,加蒸纟留水定容至100mL,摇匀，制成浓度为1004mg・mL—1的储备液.精密移取此溶液10mL于50mL棕色容量瓶中，蒸刻度%匀%大吸收波长的.精密吸取葡萄糖对照品溶液和品溶液各1mL,分别置20mL试管中，分别精密加入现配的5%重蒸苯酚溶液1mL,振摇均匀后，立即精密移取浓硫酸6mL呈缓慢加入，边加边振摇均匀，避光静置40min后摇匀.在紫外可见分光光度仪上，于200〜700nm进行扫描,选吸收大的波长.对照品溶液和供试品溶液最大吸收波长都在489nm.的绘制.分别精密吸取对照品溶液适量，配制成10.040*g・mL—1、20.080*g・mL—1、40.120*g・mL—1、60.240*g・mL—1、80.320*g・mL—1、120.480*g・mL—1的系列溶液.精密移取以上葡萄糖对照品溶液各10mL,于20mL试管中，按照“2.12”项下方法显色并测定吸光度.经计算得回归方程:y=0.0076x+ 0.0864(r=0.9995,n=5),葡萄糖在10.040〜120.480*g・mL—1范围内线性关系良好.因子的精密称取2.5mg茯苓精制多糖于EP管中，加蒸溶解后转移到50mL棕色容量瓶，并将EP管洗涤3次，洗涤液全部转移到到量瓶%蒸刻度%匀精移1mL茯苓精制多糖溶液于具管中，按照“2.12”项下显色方法显色并测定吸光度，根据回归方程计算多糖溶液中葡萄糖的浓度,式F=m/c X D,其中m为多糖质量(mg),c为多糖中葡萄糖浓度(mg・mL—1)D为倍数,算因子F= 2.10(n=5)•2.9精密度试验精密量取1mL葡萄糖对照品溶液，按“2.12”项下方法并测定其度，平6次，记度,方程计算照品溶液的葡萄糖含量.计算RSDo0.46%，表明紫-分 度计的精度428华中师范大学学报（自然科学版）第55卷2.10稳定性试验按照“2.7”项下提取方法制备1份茯苓供试品溶液（批号161101）.精密量取供试品溶液1mL于具塞试管中，按照“2.12”项下方法显色并测定吸光度值1,静置1h后摇匀，测定并记录吸光度值2；静置2h后摇匀，测定并记录吸光度值3；静置2h 后摇匀，测定并记录吸光度值4.根据回归方程计算0〜3h内4个时间点的供试品溶液的浓度，并计算结果的RSD=0.59%，表明供试品溶液在3h .2.11性按照“2.7”项下提取方法平行制备6份茯苓供试品溶液（批号161101）.精密量取各供试品溶液1mL,分别置于具塞试管中，按照“2.12”项下方法显色并测定吸光度，结果RSD=3.01%表明该方法.2.12样品含量测定精密量取各批次茯苓水溶性多糖供试品溶液各1.0mL,精密加入1.0mL现配的5%重蒸苯酚溶液，充分混合后，缓慢精密加入6.0mL浓硫酸，振摇均匀后，立即精密移取浓硫酸6.0mL，贴壁缓慢加入，边加边振摇均匀，避光静置40min后摇匀.于紫外可见分光光度仪上，以吸收波长489nm 测定样品溶液的吸光度值，并根据回归方程计算供试品中水溶性多糖的含量.结果见表6.表6茯苓供试品中水溶性多糖的含量测定结果5=3）Tab.6contentdeterminationresultsofwater-soluble polysaccharide in Poria Cocos saDples（n=3）批号含量测定/%x±s RSD/%1611)1).2)87).2)87±).)))6).29881611)2).2198).2198±).))21).97311611)3).3653).3653±).))16).44251611)4).1673).1673±).))16).96631611)5).2799).2799±).)))5).16681611)6).2317).2317±).)))8).34891611)7).2993).2993±).))2)).67961611)8).1611).1611±).))12).76671611)9).2954).2954±).))341.139416111)).2878).2878±).))2)).7)69 2.13加样回收率试验称取已知含量的同一批茯苓样品粉末（批号161110）6份，每份约0.2g,分别加入精制多糖约22mg,按照“2.7”项下制备供试品溶液和“2.12”项下方法并度，计算收，平均回收率为99.14%,RSD=1.01%，表明方法准确度良好，结果见表7.表7茯苓多糖加样回收率实验(n=6)Tab.7Recoveryof PoriaCo.os Polysaccharide!n=6)称样量/g样品含量/mg加入量/mg量/mg回收率/%RSD/%).2))1).576422.)222.4999.5)).2))5).576722.)422.911)1.3)).2))2).576222.)622.5999.)61.24 ).2)))).575622.)122.1598.)4).2))3).576422.)122.1397.92).2))2).575922.)322.3999.)23茯苓饮片中茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的含量测定3.1供试品及对照品溶液的配制茯苓酸对照品溶液：精密称取4.583mg茯苓酸对照品于10mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并定容，摇匀.即得浓度为4583*g•mL—1的对照品溶液,备用.去氢茯苓酸对照品溶液：精密称取1001mg去氢茯苓酸对照品于5mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，并定容，摇匀.即得浓度为200.2*g•mL-1的储备液,备用.松苓新酸对照品溶液：精密称取1834mg松苓新酸对照品于5mL容量瓶中，加适量甲醇溶解,并定容，摇匀.即得浓度为366.7*g•mL-1的储备液，备用.供试品溶液的配制：取“2.7”项下分离的上清液，50P减压浓缩后冷冻干燥至恒重.精密称量样品各0.1g,用甲醇定容至5.0mL容量瓶，摇匀,0.45*m滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液,备用.HPLC条件色谱柱：依利特C18（250mmX 4.6mm,5*m）;检测波长：去氢茯苓酸和松苓新酸为254nm,茯苓酸为210nm；流速:1mL•minT；进样量：50*L；温度：25°C.流动相条件，液相条件为：0〜30min为甲醇：0.25%磷酸水溶液=10：90〜65：35；30〜90min为甲醇：0.25%磷酸水溶液=65:35〜90:10；90〜95min为甲醇：0.25%磷酸水溶液=90:10.3.2专属性试验在选定的条件下，茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸对照品与样品中其它组分色谱峰可基线分离，无第3期王运芳等：湖北地区茯苓饮片质量标准研究429干扰.按茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸峰计算，理论塔板数为4000以上.茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸对照品、供试品的高效液相色谱图见图3.茯苓酸去氢茯苓酸、(b)茯苓新酸、(d)茯苓酸.去氢茯苓酸福茯苓新酸t/min(a)茯苓酸(210nm)；(b)去氢茯苓酸(254nm)；(c)松苓新酸(254nm)；(d)茯苓样品(210nm)$(e)茯苓样品(254nm)(a)Pachymicacid(21nm)(b)Dehydropachymic acid(254nm)(c)Poricoicacid(254nm)(d)Poriacocos sample(21nm)(e)Poriacocossample(254nm)图3对照品和样品HPLC图谱Fig.3HPLCchromatogram of referencesubstanceandsample3・3线性关系的考察分别精系列梯度浓度的茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸对照品溶液10*L不同浓度注入液相中，按“3.1”项下HPLC条件其峰面积.茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸的范I表8所示.表8茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的线性范围Tab.8Linear ranges of porylic acid,dehydrogenatedporylicacidandpinoleicacid 成分线性方程线性范围/(*g•mL-1)茯苓酸y=0.5879’一0.1848(r=0.9996) 1.4〜-458.3去氢茯苓酸y=0.5209’+3.464(r=0.9998) 4.2〜25.苓酸y=0.3966x+0.0074(r=1.0000).6〜91.7结果表明茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸分别在在1.4〜458.3*g•mL-1、4.2〜250.0*g•mL-1及0.6〜91.7*g・mL-1范系•3.4精密度试验分别精茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸对照品溶液10*L,样3次，计算得出茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸的RSD分别为0.61%、1.56%和1.69%(n=3),结果表明仪器精度.3.5稳定性试验精密吸取同一供试品溶液,分别于0、1、2、4、8、24h样10*L,以茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸峰面积计算,RSD分别为l.14%、1.68%和1.95%(n =3),明品溶液24h.3・6重复性试验精密称定同一批次茯苓饮片10g,共3份，按上述方法制备液，进样，计算得茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸的RSD分别为1.90%、1.37%和1.12%(n=3),结果表明该法重复性好.3.7样品含量测定取“3.1”项下供试品溶液，按“3.1”项下HPLC 条件其峰面积.计算得样品中茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的平均百分含量分别为0.269%、0.593%和0.379%.详细百分含量结果见表9.表9茯苓饮片中茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸的含量测定(n=3)Tab.9Determination of content of poria acid,dehydrogenated poria acid and pinoleic acidin prepared slices of poria cocos(n=3)/%批号茯苓酸含量氢茯苓酸含量松苓新酸含量161110.6230.440.42 16112.2 1.70.691 161130.0720.594.8 161140.261.880.456 161150.121 1.1610.473 161160.2340.4830.450 161170.154.20.135 161180.474 1.590.718 161190.2490.247.25 16111.240.2370.2883・8加样回收率试验含量的同一批茯苓样 品(161110)约0.05g,于10mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，平行3份.另取茯苓酸对照品、去氢茯苓酸照品及茯苓新酸对照品，将3种对照品分别用甲醇制成每1mL含0.1502mg、0.1501mg及0.1503mg的混合对照品溶液.精密加入上述混合对照品溶液1mL，并用甲醇，按供试品溶430华中师范大学学报(自然科学版)第55卷液制备方法操作.按“3.1”项下方法HPLC条件进为1013%(RSD=1.94%"，松苓新酸平均回收率行测试，计算回收率，茯苓酸的平均回收率为为100.9%(RSD=1.45%)表明方法准确度良好. 100.3%(RSD=1.70%),去氢茯苓酸平均回收率表10茯苓酸、去氢茯苓酸、松苓新酸加样回收率实验(n=3)Tab10Therecoveryrateswithpachylicacid%dehydropachylicacidandpachylicneoacidwereadded(n o3)分称样量/g样品含量/mg加入量/mg测定量/mg回收率/%RSD/%0.05030.10260.15020.2529100.0茯苓酸0.05040.10280.15020.2535100.2 1.530.05020.10240.15020.252499.90.05030.11920.15010.2695103.5去氢茯苓酸0.05040.11940.15010.269399.7 1.940.05020.11900.15010.2689100.70.05030.14540.15030.295599.9茯苓酸0.05040.14490.15030.294999.8 1.530.05020.14400.15030.293899.64讨论《中国药典7020年版茯苓饮片质量标准中规定了性状、鉴别、检查、浸出物等项的检验，但这些指标不能全面、系统的控制饮片的质量.因茯苓在加工、贮藏等环节仍可能存在随意使用硫磺熏蒸的情况，故在本文中增加了二氧化硫残留量的研究；且药材质量的优劣在一定程度上可以通过有效成分含量的高低来反映，因此对茯苓中的多糖及三种三l类化合物即茯苓酸、去氢茯苓酸和松苓新酸了一研究经测定10批次茯苓饮片含水量为15.6%〜30.5%；总灰分为0.2%〜2.8%；醇溶性浸出物为2. 9%〜7.0%；10批次茯苓饮片中均能不同程度地检出二氧化硫，范围为6〜11mg•kg"；水溶性多糖的平均百分含量为0.2516%.茯苓饮片中茯苓酸、氢茯苓酸、苓酸的平均分含量分别为0.2592%、0.5579%、0.3538%，且别在14〜45&3*g•mL—1、4.2〜250.0*g•mL—1和0.6〜917*g•mL-1范围内呈良好线性关系.按照《中国药典7020年版规定分析出10批次药品中水分检测项中不合格的有6批，总灰分检测项中不合格的有1批;溶性浸出物检测中均合格；10批次样品中均能检测出二氧化硫.综上所述，本文对茯苓饮片质量标准进行了较为系统的研究，该方法简便、稳定、专属性强、重复性好，且本课题可提高茯苓药材的利用率，促进中药材的产地深加工和产业结构调整，并带动中药材种植业、中医药知识经济等相关产业的发展.参考文献：(1)国家药典委员会•中华人民共和国药典#2020年版•一部:M).中国医药科技出版社,2020.Chinese Pharmacopoeia Commission Pharmacopoeia ofthe People's Republic of China(Part1)[M).Beijing：The Medicine Science and Technology Press of China，2020(Ch)[2)LEE S，CHOI E，YANG SM，et al.Bioactive compoundsfromsclerotiaextractof Poria o os thatcontroladipocyteand osteoblast differentiation E J).Bioorganic 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decoctonslces>n Hube>Prov>ncer.Inth>spaper,HPLC wasusedtodeterm>nethecontentofpor>aac>d,dehydropor>cac>dandp>nelno>cac>d>n Poria o os.Thecontentof water-soluble polysacchar>des>n por>acocoa wasdeterm>nedby1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolnone(PMP)der>vat>zaton method,andthe（下转第471页）第3期张冲等：规模化经营对粮食生产的影响研究一一基于空间计量模型的实证检验471Research on the impact of large-scale operation on food production: empirical test based on spatial econometric modelZHANG Chong,LIAO Haiya2(1.School of Social Development,Xihua University,Chengdu610039,China;2.Sichuan Academy of Social Sciences,Chengdu610071,China)Abstract:Whether large-scale operation can improve the efficiency of food productionhasbeenthefocusofdebateintheacademic world.Thispaperstudiestheimpactoflarge-scaleoperationinChinaongrainproduction%withaviewtopromotingtheincreaseof grain production per unit.Based on2006—2018provincial panel data of the mainlandofChina%aspatialeconometricmodelwasusedtostudytheimpactoflandmanagementscaleongrainyield.Theresultsshowasfo l ows.Averagesownareaperhouseholdandgrainyieldhavesignificantspatialautocorrelation%andaveragesownareaperhouseholdhas a significant impact on grain yield,showing a“U"curve relationship.In the longrun%large-scale operation is conducive to the increase of grain yield.Therefore%centralized management of fragmented land is necessary to realize the improvement ofthe grain yield.At the same time,it's also required to improve the professional qualityoffarmers,encourage various forms oflarge-scale producion,and s<reng<hen<hecons<ruc<ionofproduc<ioncondi<ionsforin<ensifica<ion.Key words：large-scale operation；grain production；spatial dubin model；spatial autoregressivemodel$spatialerrormodel(上接第431页)determinationmethodofwater-solublepolysaccharidesinPoriacocoawasestablishedbyspectrophotometry with anhydrous glucoseastheindex.Moisture,totalash,sulfurdioxideresidueandalcoholsolubleextractwere measured.Theresultsshowedthattheaverage content of porylic acid,dehydrogenated porylicacid and pinoleicacidin10batches of prepared slices of Poria cocos in Hubei Province was0.2592%,0.5579%and0.3538%,respectively.The average content of water-soluble polysaccharide in10batches was0.2516%.In a word,this method is simple,stable,specific andreproducible,and the quality standard of decoction pieces of Poria cocos is studiedsystematica l y.Key words:Poria cocos decoction pieces；triterpenoids；Poria cocos polysaccharide；highLerformanceliquidchromatograLhy;qualitystandard。