荷叶离褶伞摇瓶发酵条件研究

第２７卷第２期（２０１１）　河西学院学报　Ｖ０１．２７　Ｎｏ．２（２０１１）　

荷叶离褶伞摇瓶　

席亚．丽　王治江　发酵条件研究　

魏生龙　张汉妓‘　

（河西学院食用菌研究所，甘肃张掖７３４０００）　

摘　要：采用摇瓶发酵法对荷叶离褶伞（Ｌｙｏｐｈｙｌｌｕｍ　ｄｅｃａｓｔｅｓ）发酵条件进行研究．结果表明：　荷叶离褶伞茵丝体生长的最适碳源为玉米面；最适氮源为麸皮；最适碳氮比为１６：１；最佳培养基　配方为玉米面２００ｇ／Ｌ，蔗糖１５ｇ／Ｌ，麸皮３５ｇ／Ｌ，酵母膏１．５　ｇｔＬ；最适发酵条件：ｐＨ值７．０，温度　２６℃，接种量１０％，转速１６０ｒ／ｍｉｎ；稳定生长期为接菌后６—８ｄ．　关键词：荷叶离褶伞；摇瓶发酵；发酵条件　中图分类号：Ｑ９３—３ｌ　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—ｏ５２０（２０１１）０２－－００６７－０８　

荷叶离褶伞（Ｌｙ叩ｈｙｌｌｕｍ　ｄｅｃａｓｔｅｓ（Ｆｒ．）Ｓｉｎｇｅｒ）是一种珍稀食用菌，在甘肃祁连山区有分　

布，主要生长在海拔２３００－３２００ｍ的金露梅（ｐｏｔｅｎｌｉｌｌａ　ｆｒｕｔｉｅｏｓａ）灌木丛和青海云杉林地中，其　

口感脆滑、味道鲜美、营养丰富．２００３年以来，河西学院食用菌研究所先后研究并报道了荷叶　

离褶伞生物学特性；测定了子实体、菌丝体和发酵液的营养成分；极具生产和食用价值．为了　

探索工厂化发酵生产荷叶离褶伞菌丝体的工艺，开展了荷叶离褶伞菌丝体生长条件与最优配　

方研究．　

１　材料　

１．１供试菌种　荷叶离褶伞由河西学院食用菌研究所提供，菌种保藏号：ＣＧＭＣＣ　ＮＯ．１５１８，专利号：　

ＺＬ２００５　ｌ０Ｏ９６４０５．０．　

１．２培养基　

１．２．１　固体培养基：马铃薯２０％，葡萄糖２％，蛋白胨０．５％，磷酸二氢钾０．１５％，琼脂２％．　

１．２．２　液体培养基：马铃薯２０％，葡萄糖２％，蛋白胨０．５％，磷酸二氢钾０．１５％，硫酸镁　

０．１％．　

１．２．３碳源基础培养基：蛋白胨０．５％，硫酸铵０．３％，氯化钠０．１％，磷酸二氢钾０．２％．　

１．２．４氮源基础培养基：葡萄糖２％、磷酸二氢钾０．２％．　

收稿日期：２０１ｌ一０１—１０　基金项目：科技部农业科技成果转化基金（Ｎｏ．ＧＢ２００８Ｇ１００１９）．　作者简介：席亚丽（１９７６－），女，甘肃静宁人，讲师，硕士，主要从事食用菌遗传育种研究．　通讯作者：Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｈｙ＠ｈｘｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　

・６８・

　席亚丽　王治江魏生龙　张汉赕：荷叶离褶伞摇瓶发酵条件研究　

２方法　

２．１一培养基配方优化研究　

２．１．１碳源对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

供试碳源：蔗糖、葡萄糖、玉米淀粉、可溶性淀粉、马铃薯淀粉、豌豆淀粉、蚕豆淀粉、　

玉米面、小麦面．　玉米面或小麦面的水解：取玉米面或小麦面６ｇ，加１５０ｍＬ水、０．ｏ６ｇ淀粉酶于７Ｏ℃下水　

解５ｈ之后过滤，滤液即为其水解液．　

供试碳源按２％加入碳源基础培养基（其中，玉米面或小麦面将其水解液加入碳源基础培　

养基）．每一碳源重复３次，分装于２５０ｍＬ三角瓶中，每瓶１ｏｏｍＬ，封口膜包扎．１２１℃３０ｍｉｎ　

灭菌，冷却后接入ｌＯｍＬ液体菌种，于２２℃、１２￣／ｍｉｎ下连续培养７ｄ，测定菌丝体干重．　

２．１．２氮源对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

供试氮源：麸皮、蛋白胨、黄豆粉、食用味精、酵母粉、硝酸铵、硫酸铵．　

麸皮或黄豆粉的水解：取麸皮或黄豆粉１．５ｇ，加１５０ｍＬ水、０．Ｏ０７５ｇ蛋白酶于５５℃下水解　

５ｈ之后过滤，滤液即为其水解液．　

供试氮源按０．５％加入氮源基础培养基（其中，麸皮或黄豆粉将其水解液加人氮源基础培　

养基）．每一氮源重复３次，分装于２５ＯｒａＬ三角瓶中，每瓶１０ｏｍＬ，封口膜包扎．１２１℃３０ｍｉｎ　

灭菌，冷却后接人ｌＯｍ　Ｌ液体菌种，于２２℃、１２０ｒ／￣ｎ下连续培养７ｄ，测定菌丝体干重．　

２．１．３碳源浓度和碳氮比对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

以葡萄糖为碳源，以谷氨酸钠为氮源，以磷酸二氢钾２ｇ、硫酸镁１　ｇ、水ｌＯ００ｍｌ作基础培　

养基，分别加入葡萄糖（　）１５、２０、２５、３０ｇ，用谷氨酸钠调节每种浓度下的碳氮比，使　

每一葡萄糖浓度之下有８：１、１２：１、１６：１、２０：１、２４：１、２８：１、３２：１七种碳氮比．分装于２５０ｍＬ三　

角瓶中，每瓶１ｏｏｍ　Ｌ，封口膜包扎，每一碳氮比设３次重复，１２１　ｃＣ　３Ｏｍｉｎ灭菌、冷却后接人　

１０％液体菌种，于２２℃、１２０ｒ／ｍｉｎ下连续培养７ｄ，测定菌丝体干重．　

２．１．４最佳培养基优化研究　

通过上述单因素试验，确定适宜的碳源、氮源和碳氮比，在此基础上用Ｌ。　（４　）正交试　

验，组成１６种培养基配方，制作液体培养基，分装于２５０ｍＬ三角瓶中，每瓶１ｏ０ｍＬ，设３次　重复，１２１℃３０ｍｉｎ灭菌，接种量１０％，于２２ｃＣ、１２￣／ｍｉｎ下连续培养７ｄ，测定菌丝体干重．　

表１　正交试验的因素和水平　

２．２培养条件对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

２．２．１　ｐＨ值对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

・６９・

　河西学院学报　２０１１年第２期　

在摇瓶种子培养基中，用１０％ＮａＯＨ和１０％ＨＣ１将ｐＨ值调节为３．０、４．Ｏ、５．０、６．０、７．０、　

８．０、９．Ｏ、１０．０、１１．０共９种．装入２５０ｍＬ三角瓶中，每瓶装１００ｍＬ，每一浓度重复３瓶，封口　

膜包扎，１２１℃３０ｍｉｎ灭菌．灭菌后按１０％接种，于２２℃、１２０ｒ／ｍｉｎ下连续培养７ｄ，测定菌丝　

体干重．　

２．２．２摇床转速对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

在２５０ｍＬ三角瓶中分别装入摇瓶种子培养基，每瓶装１００ｍＬ，封口膜包扎，１２１℃３０ｍｉｎ　

灭菌．灭菌后按１０％接种，分５组，每组３瓶，分置于２２℃、转速分别为８０ｒ／ｒａｉｎ、１００ｒ／ｍｉｎ、　

１２０ｒ／ｍｉｎ、１４０ｒ／ｍｉｎ、１６０ｒ／ｍｉｎ的恒温摇床上，连续培养７ｄ，测定菌丝体干重．　

２．２＿３温度对荷叶离褶伞菌丝生长的影响．　

在２５０ｍＬ三角瓶中分别装入摇瓶种子培养基，每瓶装１００ｍＬ，封ＶＩ膜包扎，１２１℃３０ｍｉｎ　

灭菌．灭菌后按１０％接种，分１３组，每组３瓶，分置于４℃、８℃、１２℃、１６℃、１８℃、２０℃、　

２４℃、２６℃、２８℃、３０℃、３２ｃＣ、３４℃转速为１２０ｒ／ｍｉｎ的恒温摇床上，连续培养７ｄ，测量菌　

丝体干重．　

２．２．４接种量对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

在２５０ｍＬ三角瓶中分别装人摇瓶种子培养基，每瓶装１００ｍＬ，封口膜包扎，１２１　ｏＣ　３０ｍｉｎ　

灭菌．灭菌后分别在每个三角瓶中接人３％、５％、８％、１０％的液体菌种（接入的菌种菌龄、菌　

球密度、活力相同），重复３次，于２２￣Ｃ、１２０ｒ／ｍｉｎ下连续培养７ｄ，测量菌丝体干重．　

２．２．５荷叶离褶伞发酵周期研究　

在２５０ｍＬ三角瓶中分别装入摇瓶种子培养基，每瓶装１００ｍＬ，封口膜包扎，１２１℃３０ｍｉｎ　

灭菌．灭菌后按１０％接种分为１０组，每组重复３次，置于２２℃恒温摇床上、摇床转速　

１２０ｒ／ｍｉｎ、连续培养１０ｄ，于接种后第２ｄ每天测定菌丝体干重、酸碱度，绘制生长曲线．　

３结果与分析　

３－１　培养基组成优化研究　

３．１．１碳源对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

由图ｌ结果表明：荷叶离褶伞菌丝体在供试的９种碳源上均可生长；玉米面水解液为碳源　

，、４．　｛３．　骘　。・　蜜ｚ・　

ｚ．　１．５Ｏ　１．００　Ｏ．５０　０．Ｏ０　

・７０・　图１

　不同碳源对荷叶离褶伞菌丝体生长的影晌　席亚丽　王治江魏生龙张汉姣：荷叶离褶伞摇瓶发酵条件研究　

菌丝体生长量最高（３．８３８３　ｍｇ／ｍＬ），蚕豆淀粉次之（３．７１２３　ｍｇ／ｍＬ），葡萄糖最差（０．２６１３　

ｍｇ／ｍＬ）．　３．１．２氮源对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

３　

２．５　

２　窟　蚓１．５　

，　｛砬　Ｏ．５　

０　

图２不同碳源对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

由图２结果表明：荷叶离褶伞菌丝体在供试的７种氮源上均可生长，生长量居前三位的氮　

源依次为：酵母粉（２．６２９７　ｍｇ／ｍＬ）、蛋白胨（１．３６７７　ｍｇ／ｍＬ）、麸皮（１．０５６　ｍｇ／ｍＬ）；对食用味　

精、黄豆粉的利用较差．　

３．１．３碳源浓度和碳氮比对荷叶离褶伞菌丝生长的影响　

＾　乓　詈　Ｖ　钿ｌ　Ｈ一　ｌ　翘　

图３碳源浓度和碳氮比对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

由图３结果表明：荷叶离褶伞菌丝体在碳源浓度为：１５、２０、２５、３０　ｇ／Ｌ，碳氮比为：８：　

ｌ、１２：１、１６：１、２０：１、２４：１、２８：１、３２：１的培养液中均可生长．但以碳源浓度为３０　ｇ／Ｌ，碳氮比　

为１６：１，菌丝生长量最大（４．３９７ｍｇ／ｍＬ）．　

３．１．４最佳培养基优化试验　

・７１・

　河西学院学报　２０１１年第２期　

由表２结果表明：荷叶离褶伞获得最大菌丝体干重的培养基配方为Ａ３Ｂ３Ｃ１Ｄ３Ｅ３，即玉米　面２ｏｏｇｍ，蔗糖１５ｇ／Ｌ，麸皮３５　ｇ／Ｌ，酵母膏１．５　ｇ／Ｌ．　

３．２培养条件对荷叶离褶伞茵丝生长的影响　

３．Ｚ１　ｐＨ值对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

３　４　

图４不同ＰＨ值对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　ｌＯ　

由图４结果表明：荷叶离褶伞菌丝体在ｐＨ值３－１１范围内均可生长，其中，ｐＨ值为７．０　时菌丝体生长量最大．　

３．２：２摇床转速对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

・７２・　７　６　＾ｒｌ

　誉席亚丽　王治江魏生龙张汉赕：荷叶离褶伞摇瓶发酵条件研究　

ｌ６０　１４０　１２０　１００　

图５摇床转速对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

由图５结果表明：不同摇床转速对荷叶离褶伞菌丝生长量的影响差异显著，转速１６０ｒ／ｍｉｎ　

时，菌丝体生物量最大，与其他转速差异极显著．　

３．２．３温度对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

４　８　１２　１６　１８　２０　２４　２６　２８　３０　３２　３４　３６温度（℃）　

图６温度对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

由图６结果表明：荷叶离褶伞菌丝体生长在４—３４℃的范围内均可生长，２６℃时生长量最　

大（６．１８　ｍｇ／ｍＬ），３６￣Ｃ菌丝体不能生长（０　ｍｇ／ｍＬ）．　

３．２．４接种量对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

９．５　

９　＼　∞　８．５　

塞　８　

ｌ　粗７．５　

７　３　５　８　１０　接种量（％）　

图７不同接种量对荷叶离褶伞菌丝体生长的影响　

・７３・　４　２　０　８　６　４　２　０　１ⅡＩ／８日删　悃　

７　６　５　４　３　２　１　０　＾Ｊ山／

　Ｅｖ嘲