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猪圆环病毒2型特异性单克隆抗体的制备与鉴定

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１７４　２Ｕ１４　

（ＯＲＦｓ）：ＯＲＦ１　ａｎｄ　ＯＲＦ２．Ｔｏ　ｂｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ．ＯＲＦ１　ｅｎｃｏｄｅｓ　ｖｉｒａｌ　ｒｅｐｌｉｃａ・　

ｔｉｏｎ－ｒｅｌａｔｅｄ　Ｒｅｐ　（３５０００）ａｎｄ　Ｒｅｐ’　（１　９０００）ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｐｏｇｒａｎｉｃｈｎｙｙ　ｅｔ　ａＬ　ｃ７】　

ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｒｅｐ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ａｓ－　

ｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＶ２－　

ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．ＯＲＦ２，ｅｎｃｏｄ－　

ｉｎｇ　ｖｉｒａＩ　ｃａｐｓｉｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｉｍ－　

ｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ，ｉｓ　ｔｈｅ　ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ　ｇｅｎｅ　

ｆｏｒ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｃ－　ｃｉｎｅｓＥ￣．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ．ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　

ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｔａｎｄｅｍ　

ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｏｆ　Ｃａｐ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｐｉｔｏｐｅ　ｏｆ　

ＰＣＶ２　ａｓ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｏ　ｐｒｅ－　

ｐａｒｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａＩ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｗｈｉｃｈ　Ｉａｉｄ　ｓｏｌｉｄ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｆｕ　ｒｔｈｅｒ　

ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　

ｏｆ　ＰＣＶ２　ＯＲＦ２　ｅｐｉｔｏｐｅｓ　ａｎｄ　ｅｓｔａｂ－　Ｉｉｓｈｉｎｇ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　

ｍｅｔｈｏｄｓ　ｔｏ　Ｉｄｅｎｔｉｆ、，ａｎｄ　ｄｉａｇｎｏｓｅ　

ＰＣＶ２．ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｄｉｓｅａｓｅｓ．　

Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　

Ｃｅｌｌｓ，ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｅｒｉ－　

ｍｅｎｔａＩ　ａｎｉｍａｌｓ　

Ｍｙｅｌｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ＳＰ２／０．ＰＫ－１　５　ｃｅｌｌｓ　

ａｎｄ　ＰＣＶ２　ｗｈｏｌｅ　ｖｉｒｕｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　

ｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｂｉｏ－　

Ｉｏｇｉｃａｌｓ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　

Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｑｒｉｃｕｌｔｕｒｅ；ｆｉｖｅ　ｅｉｇｈｔ－ｗｅｅｋ－　ｏｌｄ　ｆｅｍａｌｅ　ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　

ｂｙ　ｔｈｅ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ＡｎｉｍａＩ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　

Ｙａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃａｌｌｙ　

ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ＰＣＶ２　ＰＥＴ３２ａ．－ＯＲＦ２　ｐｒｏ－－　

ｔｅｉｎ（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　Ｅ　ｃｏ１１），ｅｕｋａｒｙｏｔｉ－　

ｃａｌｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ＰＣＶ２　ＯＲＦ１——ＯＲＦ２　

ｔａｎｄｅｍ　ｐｒｏｔｅｉｎ　（ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　Ｈｉｇｈ—　ＦｉｖｅＴＭ　ｃｅｌｌｓ１　ａｎｄ　Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ　ＶＰ１０　

ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　

ａｎｄ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　

Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　

Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ．　

Ｒｅａｇｅｎｔｓ　ＰＥＧ－４０００，ＨＡＴ，　ＨＴ，　ＤＭＳＯ　

（Ｓｉｇｍａ　ＣｈｅｍｉｃａＩ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．１：ＤＭＥＭ，　

ｆｅｔａＩ　ｃａｌｆ　ｓｅｒｕｍ　（Ｇｉｂｉｃｏ　Ｃｏ．，Ｌｌｄ．）；　

ＨＲＰ－ｌａｂｅｌｅｄ　ｇｏａｔ　ａｎｔｉ—ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ　

【Ｖａｚｙｍｅ　Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｎａｎｊｉｎｇ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．】；　ＦＩＴＣ－ｌａｂｅｌｅｄ　ｇｏａｔ　ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ　ＩｇＧ　

（Ｗｕｈａｎ　Ｂｏｓｔｅｒ　ＢｉｏｔｅｃｈｎｏＩｏｇｙ　Ｃｏ．，　

Ｌｔｄ．）．　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ　

Ａ　ｒｅｐｏｒｔｅｄ　ｅｐｉｔｏｐｅ　ｏｆ　Ｃａｐ　ｐｒｏｔｅｉｎ　

ｏｆ　ＰＣＶ２　ｗａｓ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ｂｙ　Ａｂｍａｒｔ　（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｐｅｐ－　ｔｉｄｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＤＲ－　

Ｔｌ　ＤＹＦＱＰＮＮＫ．Ｔａｎｄｅｍ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ－　

ｇｅｎ　ｆｏｒ　ａｎｉｍａｌｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．　Ａｎｉｍａｌｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　

Ｆｉｖｅ　ｅｉｇｈｔ．．ｗｅｅｋ－－ｏｌｄ　ｆｅｍａｌｅ　ＢＡＬＢ／　

ｃ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｅａｃｈ　

ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｏｕｓｅ　ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉ－　

ｔｏｎｅａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　５０　ｕｇ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｔｈａｔ　ｗａｓ　

ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｅｑｕａｌ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　Ｆｒｅ－　

ｕｎｄ　ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ；ａｆｔｅｒ　ｔｗｏ　

ｗｅｅｋｓ．ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎ－　ｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　ｅｑｕａｌ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　

ａｎｔｉｇｅｎ　ｔｈａｔ　ｗａｓ　ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ｆｒｅ－　

ｕｎｄ’ｓ　ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ　ａｄｊｕｖａｎｔ；ａｆｔｅｒ　ｔｗｏ　

ｗｅｅｋｓ．ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｊｎ－　ｔｒａＤｅｒｉｔＯｎｅａ¨Ｖ　ｗｉｔｈ　ｅｑｕａＩ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　

ａｎｔｉｇｅｎ　ｕｎｔｉｌ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｉｔｅｒ　

ｒｅａｃｈｅｄ　ａｂｏｖｅ　１：１　０　０００．Ｆｉｎａｌｌｙ．ｅａｃｈ　

ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｏｕｓｅ　ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｈｙｐｏｄｅｒ－　

ｍｉｃａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　３０　ｕｑ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ　３　ｄ　ｂｅｆｏｒｅ　

ｆｕｓｉｏｎ　ｔｏ　ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｉｔ、，．　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｕｂｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｈｙ－　

ｂｒｉｄｏｍａ　

Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｇｒａｍ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　

ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｄｉｒｅｃｔ　ＥＬＩＳＡ　

ｍｅｔｈｏｄ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ＰＣＶ２　

ＰＥＴ３２ａ－ＯＲＦ２　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓ　

ａｎｔｉｇｅｎ．Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗａｓ　ｄｉ－　

Ｉｕｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｃａｒｂｏｎａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ　ｆ０．０５　

ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ　９．６）ａｎｄ　ｃｏａｔｅｄ　ｏｎ　ＥＬｌＳＡ　ｐｌａｔｅｓ．ｕｓｉｎｇ　１％ＢＳＡ　ａｓ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｓｏ－　

ｌｕｔｉｏｎ．ＨＲＰ—ｌａｂｅｌｅｄ　ｇｏａｔ　ａｎｔｉ－ｍｏｕｓｅ　

ＩｇＧ　ａｓ　ｅｎｚｙｍｅ．—ｌｉｎｋｅｄ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ａｎｔｉ－－　

ｂｏｄｙ，ａｎｄ　ＴＭＢ　ｏｎｅ－ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｃｈｒｏ－　

ｍｏｇｅｎｉｃ　ａｇｅｎｔ　ａｓ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ．　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ａｎｔｉ－　

ｂｏｄｙ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｗｅｌｌｓ　Ａｆｔｅｒ　ｆｕｓｉｏｎ．　

ｗｈｅｎ　ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｖｅｒｅｄ　１，３　Ｏｆ　

ｔｈｅ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗｅｌｌｓ，ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒ－　

ｎａｔａｎｔ　ｗａｓ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｂｙ　ｉｎｄｉｒｅｃｔ　ＥＬＩＳＡ　

ｍｅｔｈｏｄ，ｎａｍｅｌｙ，ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　ｏｆ　

ｃｅｌＩ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｅ　ｃｏｉｌ－　

ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ＰＥＴ３２ａ－－ＯＲＦ２　ｒｅｃｏｍｂｉ－－　

ｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　

０ｆ　ＰＥＴ３２ａ　ｅｍｐｔｙ　ｖｅｃｔｏｒ．ｔｏ　ｓｃｒｅｅｎ　

ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒｅ－　

ａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｅ　ｃｏｌ－ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ＰＥＴ３２ａ－　

ＯＲＦ２　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｎｅｇａ－　

ｔｉｖｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｏｆ　ＰＥＴ３２ａ　ｅｍｐｔｙ　ｖｅｃｔｏｒ．　

Ｓｕｂｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　

ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｗｅｌｌｓ　Ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　

ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｗｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｓｕｂｃｌｏｎｅｄ　ｊｎ　ａｃ－　

ｃｏｒｄａｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｉｉｍｉｔｉｎｇ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ［￣．　

Ｓｃａｌａｂｌｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａ－　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａＩ　ｃｅｌｌｓ　

Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓ－　

ｆｅｒｒｅｄ　ｆｒ０ｍ　９６－ｗｅｌＩ　ｐｌａｔｅｓ　ｔｏ　２４－ｗｅｌＩ　

ｐｌａｔｅｓ．ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　６－ｗｅｌＩ　

ｐｌａｔｅｓ　ａｆｔｅｒ　ｏｖｅｒｇｒｏｗｉｎｇ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　

ｆｉｎａｌｌｙ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｌａｓｋｓ　ｆｏｒ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ．１ｎｃｕｂａｔｅｄ　ｃｅｌｌｓ　ｗｅｒｅ　

ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ　ｗｉｔｈ　

ｃ０ｎｖｅｎｔｉ０ｎａＩ　ｍｅｔｈｏｄｓ．　

Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｓｃｉｔｅｓ　

Ｓｃａｌａｂｌｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｂｏｄｙ．．ｐｏｓｉ－－　

ｔｉｖｅ　ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　ｃｅｌｌｓ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ．　

Ｆｉｒｓｔｌｙ．ｅｉｇｈｔ．ｗｅｅｋ．ｏｌｄ　ｆｅｍａｌｅ　ＢＡＬＢ，ｃ　

ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｉｅｃｔｅｄ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　０．５　ｍｌ　ｏｆ　ｓｔｅｒｉｌｅ　Ｉｉｑｕｉｄ　ｐａｒａｆｆｉｎ；ａｆ—　

ｔｅｒ　ｏｎｅ　ｗｅｅｋ，ｅａｃｈ　ＢＡＬＢ／ｃ　ｍｏｕｓｅ　

ｗａｓ　ｉｎｊｅｃｔｅｄ　ｉｎｌｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙ　ｗｉｔｈ　５　ｘ　１　０　ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　ｃｅｌｌｓ：ａｆｔｅｒ　１　０　ｄ．ａｓｃｉｔｅｓ　

ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｗｉｔｈ　ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ　ｅｎｌａｒｇｅｄ　ａｂ－　

ｄｏｍｉｎａｌ　ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　

ｆｏｒ　ｔｉｔｅｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｂｙ　ＥＬｌＳＡ　ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ａｔ－７０　ｏＣ．　

１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　

ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａＩ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　

Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ　ａｓｓａｙ　ｕｓｉｎｇ　ｐｒｏｋａｒｙ－　

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基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

基于Cap蛋白研制的猪圆环病毒2型疫苗研究进展

刘畅;陈艳;颜秋;吕其壮

【摘 要】猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)是危害世界养猪业的主要疫病之一,主要由猪圆环病毒2型(PCV-2)引起.该病毒可引起感染猪免疫系统的破坏,造成严重的免疫抑制,继而引发多种病毒/细菌的混合感染与继发感染,给世界养猪业造成了巨大经济损失.近年来疫苗免疫接种是防控PCVAD的有效手段,由于衣壳蛋白(capside,Cap)是PCV-2的主要免疫保护性抗原,因此常被用作研制PCV-2基因工程疫苗的理想靶抗原.论文就PCV-2 Cap蛋白基因工程疫苗的研究进展进行综述,以期为今后PCV-2新型疫苗的研究提供参考.

【期刊名称】《动物医学进展》

【年(卷),期】2019(040)006

【总页数】5页(P83-87)

【关键词】猪圆环病毒2型;疫苗;衣壳蛋白;免疫增强剂

【作 者】刘畅;陈艳;颜秋;吕其壮

【作者单位】玉林师范学院生物与制药学院,广西玉林537000;玉林师范学院生物与制药学院,广西玉林537000;玉林师范学院生物与制药学院,广西玉林537000;玉林师范学院生物与制药学院,广西玉林537000;广西农产资源化学与生物技术重点实验,广西玉林537000

【正文语种】中 文

【中图分类】S858.28

猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus-associated diseases,PCVAD)是猪呼吸道疾病综合征、猪皮炎和肾病综合征、断奶仔猪多系统衰竭综合征等多种疾病的总称， 主要由猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)引起[1]。PCV-2是目前已知的最小的动物病毒之一，归属于圆环病毒科圆环病毒属，无囊膜，病毒粒子呈20面体对称，其基因组全长为1766 bp～1768 bp，编码11个开放阅读框(ORF)，目前只有ORF1-ORF6被证明能够编码病毒蛋白[2]。研究表明，PCV-2感染能够破坏易感动物的免疫系统，造成免疫抑制，导致机体抵抗力下降，且易诱发多重病毒和(或)细菌的协同感染或继发感染，给疾病的诊断和治疗带来巨大的困难。

猪圆环病毒病的诊断与防控

猪圆环病毒病的诊断与防控

猪圆环病毒病的诊断与防控

作者：王海清 潘增强

来源：《兽医导刊》 2019年第8期

王海清 潘增强/ 浙江省天台县畜牧兽医局

猪圆环病毒是世界上迄今为止发现的最小的病毒，具有较强的抵抗力，在高温56 ～ 70℃下还能够存活一定的时间，在pH3 的酸性环境中也能存活，对氯仿等化学剂也有一定的抵抗力，这就说明猪圆环病毒对高温、高酸及化学消毒剂都有一定程度的抵抗力，不易轻易杀灭，一旦感染，疫源灭活难度大，因此猪圆环病毒病的防控难度也大。据兽医学临床解剖研究，猪圆环病毒的血清包括PCV-1、PCV-2 两种，其中PCV-1 不具致病性，而PCV-2 才是引发猪圆环病毒病的致病原。由猪圆环病毒2 型（PCV-2）引发的圆环病毒病在临床中可表现为多系统衰竭综合征，这说明该病毒的破坏力极强，可广泛定植于病猪的肝脏、脾脏、肾脏、肺部、支气管、小肠、扁桃体和鼻黏膜等部位，侵袭相关组织；再加上巨噬细胞繁殖增生，导致病猪整体免疫力下降，造成大部分组织器官免疫功能缺失，进而引发多器官系统衰竭综合征，猪圆环病毒病也因此具有较高的死亡率。以下就猪圆环病毒病的诊断与防控进行探讨。

一、圆环病毒病的诊断

1. 病理诊断。根据猪圆环病毒研究的临床病例显示，该病毒大小为14 ～ 25nm，属20 面体，没有囊膜，其组织是脱氧核糖核酸，对较高温、较高酸、氯仿敏感性不强，虽然自身不凝红血细胞，但是能够引起RK-15细胞病变。由于圆环病毒可引起多组织器官综合衰竭，因此病猪首先表现整体免疫力下降、体重骤减，皮毛无光泽而又蓬乱，呼吸困难、咳嗽、淋巴肿大等症状。由于受病毒感染引发了组织器官继发性感染，病猪会伴有皮肤苍白、贫血，各组织器官肿大或坏死，伴有肝炎、肠炎、肺炎、肾炎等综合性炎症，病猪可能出现突发性死亡。部分病猪会有先天性颤抖症状。解剖检查如果以上症状明显，则一般可确诊为猪圆环病毒病。

2. 血清学实验室诊断。常用的血清实验室诊断包括间接免疫荧光技术、酶联合免疫吸附试验法两种。前者应用干燥过的组织细胞和高免血清的反应，再借助荧光二抗性的原理判断病毒类型的，具有检验成本低、准确性高、易操作等优势，在临床诊断猪圆环病毒病中较为常见。后者是通过抗原体与免疫酶的染色反应，再利用分光光度计来判断病毒类型的，该实验方法的检测速度快、准确性高，在PVC-2 的检测方面有着较强的优势。

猪圆环病毒病的诊断及防治

猪圆环病毒病的诊断及防治

养　猪　

猪圆环病毒病的诊断及防治　

程容　

（重庆市长寿区但渡镇畜牧兽医站，重庆４０１２５１）　

关键词：猪圆环病毒；临床症状；诊断；防控措施　ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．１６７１－６０２７．２０１７．０７．０６４　

猪圆环病毒病是近年频发的重要疾病，对养猪业造成严　

重的经济损失。该病主要对断奶仔猪、育肥猪、经产母猪等造　成严重的危害，尤其是断奶仔猪一旦感染该病即会出现系统　衰竭综合症而发生死亡，据调查研究表明，养殖场一旦暴发　

猪圆环病毒病传染病，随着病猪体抗病能力下降。甚至会继　

发其他细菌性疾病，导致发病率上升，死淘率增大，对养猪产　业造成严重的影响。　１　临床症状　１．１仔猪一般发病为３—１２周龄的仔猪，可见病猪，眼　

结膜黄染，采食量下降，偶尔出现腹泻，呼吸困难，随时病情　加重可视猪只身体日益消瘦，咳嗽加重，拒绝采食，外表皮肤　

上能够观察到一些突起出血斑点，治疗不及时的会死亡，死　亡率高达６０％－８５％。　１．２繁殖母猪猪圆环病毒一旦感染繁殖母猪，会直接影响　

母猪的生育功能，导致死胎、流产、无奶等后果，繁殖母猪患　病特点是皮肤呈红色并存在弥漫性突出的大豆结节，体温升　

高，精神萎靡不振，走路蹒跚，咳嗽，尿液偏棕红色，虚弱困　乏，死亡率在３０％～５０％。　２剖检变化　患猪淋巴结异常肿胀，切面为均匀的白色；肺脏肿胀；肝　

脏发暗，肝小叶间结缔组织增生；肾脏水肿、被膜下有坏死　灶；心包有积水，脾脏有突出于表面的红点斑。　

３诊断要点　临床上本病呈综合征（症候群）表现，不主张以症状鉴别　为主要诊断手段，须作实验室检查确定原发病及致病原种　类，以利于科学决策药物防治方案。　

３．１　电镜检查支气管淋巴结提取物负染后可见类环状微　小病毒粒子（１７ｎｍ左右），采集支气管淋巴结制作超薄切片　

高清镜检，见直径约为２０ｎｍ的电子致密性颗粒组成、呈晶体　状排列的包涵体。　

３．２　ＩＩＦ检查将无菌环境采集的病料制作混悬液并接种于　

圆环病毒病

圆环病毒病

猪圆环病毒（PCV-2）常见混合、继发感染防治措施及体会

2、左新桐

2、河南农业大学动物疫病检测诊断中心

猪圆环病毒是小的无囊膜单链环状DNA病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属。根据病毒的抗原性和基因组成的不同分为PCV1和PCV-2两个基因型。其中，PCV1可污染PK15细胞系且不产生CPE，对猪无致病作用，PCV-2具有致病性。PCV-2在很多国家猪群中广泛存在。由于PCV2严重破坏了猪的免疫系统,造成免疫功能低下,PCV-2的感染往往与其他多种病原混合或继发感染,而继发感染又是造成PCV2病情加重的原因。规模化猪场发生PCV-2的混合或继发感染时，预防和治疗效果常常不明显（尤其在冬春季节），本文旨在让大家了解流行情况、发病原因、临床症状、诊断方法等，更重要的是总结几年来的具体防治措施和方案，以供参考。

一、了解猪圆环病毒病（PCD）

(一)猪圆环病毒病是由PCV-2引起的以断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）、猪呼吸系统混合疾病、繁殖障碍症为代表的疾病。

（二）猪圆环病毒病的含义是指群体病或是与PCV-2相关的疾病（Allan等，2002）。

（三）PMWS感染及亚临床感染的致病机理中，PCV-2对免疫系统的影响具有重要作用。PMWS感染猪组织典型的显微镜下淋巴病变，疾病与机会病原的联合及淋巴组织中免疫细胞亚群和外周血单核细胞的其他变化，是PMWS严重感染猪的常见特征，表明发病后机体处于免疫抑制状态（《猪病学》P314）。

（四）Allan等通过接种PCV-2及与其他感染和非感染因子共同作用，复制出了PMWS，表明圆环病毒病的发生是在包括环境条件等发生变化的情况下（不利于猪的生长发育），PCV-2与其他病原共同的结果。

（五）免疫刺激是圆环病毒病发生的重要步骤。

二、当前圆环病毒病（PCD）流行情况