当前位置：文档之家 › 结核分枝杆菌rps12基因的克隆及核酸序列的分析

结核分枝杆菌rps12基因的克隆及核酸序列的分析

  • 格式：docx
  • 大小：40.75 KB
  • 文档页数：6

结核分枝杆菌rps12基因的克隆及核酸序列的分析

丁淑琴;王强;王淑静;王洁;张焱

【摘 要】目的 扩增结核分枝杆菌rps12基因,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析.方法 以结核菌标准菌株H37Rv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌rps12抗原基因,将其重组到pGEM -T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析.结果 成功扩增出结核分枝杆菌rps12抗原基因,测序表明该片段开放阅读框由375bp组成,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为100％,推导编码氨基酸序列同源性为99％.结论 成功克隆rps12基因,经DNA测序证实,该片段阅读框完整,该基因的获得为其原核表达及相关研究奠定了基础.%Objective

To explore the effect of Huangqi on the differentiation of adipose -

derived stem cells ( ASCs) into osteoblasts which will provide a

comfortable environment to induced the differentiation into osteo-blasts.

Methods ASCs were recovered and passaged. The third passage of ASCs

was used for this experiment. The whole experiment was divided into the

following groups: the control group, the induction group and the huangqi

group. MTT was used to test the proliferation of ASCs and RT - PCR was

used to test the mRNA expression of ALP and Collagen I. Results MTT

showed that the proliferation of ASCs was significantly promoted by both

the induction and the Huangqi groups, compared with the control group

(P <0.05) in the first time point and it was the contrary in the late period

( P <0.05 ). RT - PCR showed that the expression of ALP (0.42 ±0.02, 0.61

±0.01) and Collagen I (0.39 ±0.09, 0.56 ±0. 18) increased significantly in

the induction and the Huangqi groups, compared to the control groups (0.23 ±0.06, 0. 11 ±0.03) (P <0.05). And the Huangqi group significantly

increased the expression of ALP and Collagen I compared to the induction

group (P>0.05). Conclusion Huangqi may increase the osteoblastic ability

of ASCs, which will provide a basis of theory by using the Chinese

Medicine to repair bone defect.

【期刊名称】《宁夏医科大学学报》

【年(卷),期】2011(033)008

【总页数】3页(P729-731)

【关键词】结核分枝杆菌;rps12基因;克隆;同源性分析

【作 者】丁淑琴;王强;王淑静;王洁;张焱

【作者单位】宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004;宁夏医科大学,银川750004

【正文语种】中 文

【中图分类】R378.91+1

结核病患者主要居住在低收入国家，我国肺结核患者主要分布在经济不发达中西部地区和农村。据报道，宁夏新发肺结核病人发现率尚未达到70 %的国家要求[1]。现有的结核病病原学诊断方法多不能达到早期、有效、特异的诊断目的。如传统的细菌学培养鉴定需要6～8周时间，所耗时间长；痰涂片抗酸染色，简单快速，但检出率太低。血清学诊断技术由于其固有优势，如操作简便、快速、便于推广，无需特殊设备等，而且又有迅速发展成为自动化的趋势，为人们所广泛采纳[2-4]。近年来研究表明，重组蛋白抗原研究是结核病血清学诊断研究的热点，而候选基因的筛选和获得是其前提和关键。本研究拟通过基因工程技术筛选和克隆出结核分枝杆菌核糖体蛋白S12(Mycobacterium tuberculosis ribosomal protein S12，rps12)基因，并对其进行序列分析，为研究结核病候选诊断抗原基因做好前期工作。

1 材料与方法

1．1 材料

1.1.1 质粒与菌种 标准菌株H37RvDNA由第四军医大学王丽梅博士馈赠，pGEM-T载体购自Promega 公司。E.coli JM109由本室保存。

1.1.2 酶与试剂 E.coli JM109感受态购自北京全式金生物公司，X-gal、IPTG、TaqDNA聚合酶购自Promega 公司，限制性内切酶EcoRI、XholI购自HIMERx公司，200bpDNA Marker、λDNA HindⅢ Marker购自北京华美公司，质粒小量提取试剂盒、DNA回收试剂盒购自天根生物公司。

1.1.3 PCR引物 在GeneBank 公共数据库检索结核分枝杆菌rps12基因序列(GeneID:GenBank:L08011.1)，设计其上下游引物。为了便于亚克隆，分别在上下游引物的两端各设计一个EcoRI和XholI酶切位点，并在5’端加入保护性碱基。引物由上海生物工程公司合成。如下所示：

P1:5’-GTGAATTCATGCCAACCATCCAGCAGCTG-3’

P2:5’-AGCTCGAGTCAGCCCTTCTCCTTCTTAG-3’

1．2 方法

1.2.1 rps12基因的体外扩增 PCR反应总体积25μL：10×Buffer 2.5μL，10mM

dNTP 0.5μL,上、下游引物各0.5μL，DNA 2μL，DNA Taq酶0.5μL，dd H2O

18.5μL;反应条件：94℃ 4min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 30s，30个循环；72℃ 7min。1.5%琼脂糖胶电泳鉴定结果。

1.2.2 rps12基因的克隆 DNA回收试剂盒切胶回收纯化PCR产物。目的片段与pGEM-T载体4℃连接过夜。连接产物转化入E.coli JM109感受态细胞，并涂布于铺有IPTG和X-gal的YT平板上[5]， 37℃倒置过夜。

1.2.3 重组质粒的酶切鉴定 经蓝白斑筛选，挑选白色菌落 [5]扩增培养，小量抽提质粒，用EcoRI、XholI酶切鉴定。

1.2.4 rps12基因测序及分析 rps12基因序列测定由上海生物工程公司进行。测序结果经DNAStar软件分析并与GeneBank已发表的基因进行同源性比对。

2 结果

2.1 rps12基因的PCR扩增

PCR成功扩增出一大小约400bp的DNA片段(图1)。

1.rps12 PCR扩增产物；2.DNA Marker图1 rps12基因的PCR扩增

2.2 重组质粒的酶切鉴定

扩增培养白色菌落，小量抽提质粒后双酶切鉴定。结果显示得到了大约400bp的DNA片段(图2)，证明rps12/ pGEM-T/JM109克隆体系构建成功。

1.200bp DNA Marker；2.λDNA HindⅢ Marker；3.pGEM-T；4.rps12/

pGEM-T 重组质粒；5.rps12 PCR扩增 产物；6.EcoRI and XholI 酶切产物图2

重组质粒的双酶切鉴定

2.3 rps12序列测定及分析

测序结果表明rps12基因的开放阅读框为375bp，编码124个氨基酸。用DNAStar软件预测氨基酸序列的分子质量、等电点，结果如下：rps12分子质量单位为13849.2KDa，理论等电点为11.37，碱性氨基酸残基(Arg+Lys)百分比为25.0%，酸性氨基酸残基(Asp+Glu)百分比为5.6%。与GenBank中已发表的序列同源性比对结果显示：核酸序列同源性达100%(序列号：gb|AY156729.1)。推导理论氨基酸序列(序列号：gb|AAN52765.1)同源性为99%。

3 讨论 利用基因工程技术可获得质量更好，纯度更高的蛋白抗原，为结核病血清学诊断方法及蛋白质芯片检测技术的建立奠定了坚实的基础。目前研究最多的结核分枝杆菌蛋白抗原主要有14kD、16kD、38kD、Ag85和ESAT-6等 [6]，但后续研究资料显示效果并不太理想，如：38kDa 蛋白的特异性为27%～89%，表明其特异性不稳定；rAg85A-ELISA 的特异性为93．9%， 敏感性为15．6%，灵敏度显著低于PPD-ELISA等[7-8]。本室在GeneBank 找到互联网上已经发表的结核枝支杆菌rps12序列， PCR法体外扩增该片段。为了便于定向亚克隆及后续测序的准确性，在该基因上下游引物上分别设计了EcoRI和XholI两个酶切位点；并将DNA片段重组于pGEM-T载体。克隆基因经酶切鉴定及测序结果与预期一致， rps12基因由375bp组成，推导理论氨基酸为124个。DNAStar软件预测结果显示rps12氨基酸序列的分子量为13849.2 kDa，理论等电点为11.37。通过蛋白质同源性检索发现，本室克隆的基因与GeneBank报道的核酸序列同源性达100%，氨基酸序列同源性达99%，这为今后的蛋白定向表达工作奠定了基础。本研究根据国外已发表的结核分支杆菌基因序列设计引物，成功获得结核分支杆菌rps12基因，对于此基因作为结核分支杆菌诊断抗原基因侯选目的基因的潜力，尚待后续工作的进一步研究。

【相关文献】

[1] 王晓林 ,刘锦平.宁夏结核病控制项目(2001-2005 年)实施情况的评价[J].宁夏医学杂志，2006，28(16)：950-951.

[2] Bergmann JS，Keating WE，Woods GL.Clinical evaluation of the BD-Probe Tec ET

system for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis[J].J Clin Microbiol，2000，38(2)：863-865.

合集下载

关于结核分枝杆菌furA基因片段的克隆表达和分离纯化

关于结核分枝杆菌furA基因片段的克隆表达和分离纯化

关于结核分枝杆菌furA基因片段的克隆、表达和分离纯化

【关键词】 分枝杆菌

【Abstract】 AIM: To obtain furA (ferric uptake regulator A)

gene segments of Mycobacteria tuberculosis (MTB)， express efficiently

in E.coli and purify the target proteins. METHODS: furA gene segments

were amplified by PCR with specific primers from genome of MTB H37Rv

strain. After sequenced， furA gene segments were inserted into pRSETA

and expressed in E.coli BL21. The recombinant (His)6 fused proteins were

purified by NiNTA purification system. RESULTS: The length of PCR

product was 453 bp， identical with that reported by Genbank. The

proteins were expressed in E.coli BL21 as soluble proteins， accounting

for 10％ of the total bacterial proteins. SDSPAGE and Western blot

showed that the Mr of this gene product was 23.0×103. The (His)6 fused

proteins were purified by affinity chromatography. CONCLUSION: furA of

结核分枝杆菌实验报告

结核分枝杆菌实验报告

一、实验目的

1. 了解结核分枝杆菌的生物学特性及致病机理；

2. 掌握结核分枝杆菌的培养、分离、鉴定及检测方法；

3. 增强实验室操作技能，提高对结核病的防控能力。

二、实验原理

结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性细菌，是引起结核病的病原体。本实验通过培养、分离、鉴定及检测结核分枝杆菌，了解其生物学特性及致病机理。

三、实验材料与仪器

1. 实验材料：

（1）结核分枝杆菌菌种；

（2）牛肉浸液；

（3）鸡蛋；

（4）石炭酸复红染液；

（5）无菌生理盐水；

（6）无菌试管；

（7）酒精灯；

（8）高压蒸汽灭菌器；

（9）显微镜；

（10）生物安全柜。

2. 实验仪器：

（1）恒温培养箱；

（2）电热恒温水浴锅；

（3）无菌操作台； （4）超净工作台；

（5）显微镜。

四、实验方法与步骤

1. 菌种复苏

（1）将冷冻保存的结核分枝杆菌菌种复苏于牛肉浸液中，37℃恒温培养24小时；

（2）观察菌落生长情况，记录结果。

2. 分离纯化

（1）将复苏后的菌液涂布于牛肉浸液琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；

（2）挑取单菌落进行纯化，重复涂布、培养，直至获得纯化菌落。

3. 鉴定

（1）挑取纯化菌落，用无菌生理盐水洗涤，制成菌悬液；

（2）将菌悬液滴加于石炭酸复红染液中，37℃恒温染色30分钟；

（3）用无菌生理盐水冲洗，观察菌体形态及染色特性；

（4）挑取染色阳性菌落，进行生化试验，如氧化酶试验、触酶试验等，以鉴定结核分枝杆菌。

4. 检测

（1）挑取纯化菌落，制成菌悬液；

（2）将菌悬液滴加于含有药物的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时；

（3）观察药物对菌落的抑制作用，判断药物对结核分枝杆菌的敏感性。

五、实验结果与分析

1. 菌种复苏：复苏后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。

2. 分离纯化：纯化后的菌落呈白色，表面光滑，呈干燥状，有明显的溶血现象。

结核分枝杆菌CFP10诊断抗原基因的克隆及序列特性分析

结核分枝杆菌CFP10诊断抗原基因的克隆及序列特性分析

宁夏医学杂志２０１０年５月第３２卷第５期Ｎｉｎｇｘｉａ　Ｍｅｄ　Ｊ，Ｍａｙ．２０１０，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．５　文章编号：１００１—５９４９（２０１０）０５—０３８７—０２　・３８７・　・论著・　结核分枝杆菌ＣＦＰ１　０诊断抗原基因的克隆　及序列特性分析　丁淑琴，王淑静，王洁，张焱　［摘要］　目的扩增结核分枝杆菌培养滤液蛋白ｌ０基因（ＣＦＰ１０），并将其克隆至质粒ｐＧＥＭＴ中进行核苷　酸序列特性分析，为研究结核病候选诊断抗原基因奠定基础。方法　以结核菌标准菌株Ｈ３７Ｒｖ为模板，通过ＰＣＲ　技术扩增出结核分枝杆菌ＣＦＰＩＯ抗原基因，将其重组到ｐＧＥＭ—Ｔ载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学　分析。结果成功扩增出结核分枝杆菌ＣＦＰ１０抗原基因，测序表明该片段开放阅读框由３０３ｂｐ组成，与已发表基　因核苷酸序列相比，同源性为１００％，推导编码氨基酸序列同源性为１００％。结论成功克隆ＣＦＰ１０基因，经ＤＮＡ　测序证实，该片段阅读框完整，为其原核表达及相关研究奠定了基础。　［关键词］　结核分枝杆菌；ＣＦＰ１０基因；克隆；序列分析　［中图分类号］　Ｒ３７８．９１１　［文献标识码］Ａ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣＦＰＩＯ　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ＤＩＮＧ　Ｓｈｕ—ｑｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｓｈｕ－ｒｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｊｉｅ，ｅｔ　ａ１．（Ｎｉｎｇｘｉａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ　７５０００４，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ａｎｄ　ｈｏｍｏｌｏｇｉｅｓ　ｏｆ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ＣＦＰ１０　ｇｅｎｅ，ａｎｄ　ｌａｙ　ｂａｓｅｓ　ｆｏｒ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄ　Ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｒｏｔｏｓｃｏｌｅｓ　ｏｆ　ｃｙｓｔｓ．Ｔｈｅ　ＣＦＰ１０　ｇｅｎｅ　ｏｆ　Ｍｙ－　ｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｉｎｔｏ　ｐＧＥＭ—Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ　ｆｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ａ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｏｆ　３０３ｂｐ　ｗａｓ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ，ｔｈｅ　ｈｏ－　ｍｏｌｏｇｉｅｓ　ｗｅｒｅ　１００％，ｗｈｉｃｈ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ＣＦＰ１０　ｏｆ　Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｗｅｒｅ　１００％ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｗｅ　ｃａｎ　ｍａｋｅ　ｓｕｒｅ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｇｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｓ　ＣＦＰＩＯ，ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｉｓ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ　ｌａｉｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；ＣＦＰＩＯ　ｇｅｎｅ；Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　据ＷＨＯ估计全球约有２Ｏ亿人感染结核，其中　５％一１０％会发展成活动性肺结核，每年约３００万人　死于结核¨卫］。现有的结核病诊断方法多不能达到　早期、有效、特异的诊断目的。基于此，本研究拟通　过分子生物学技术手段获得结核分枝杆菌ＣＦＰ１０　（培养滤液蛋白１Ｏ）基因序列，并对其进行序列分　析，为其进一步原核表达及相关研究奠定基础。　１材料与方法　１．１材料　１．１．１质粒与菌种：标准菌株Ｈ３７ＲｖＤＮＡ由西安第　四军医大学王丽梅博士友情馈赠，ｐＧＥＭ—Ｔ连接载　体购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司。　１．１．２酶与试剂：Ｅ．ｃｏｌｉ　ＪＭ１０９感受态购自北京全　式金生物技术公司，ｘ—ｇａｌ、ＩＰＴＧ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶购　自Ｐｒｏｍｅｇａ公司，限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＸｈｏｌＩ购自　ＨＩＭＥＲｘ公司，２００ｂｐＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ、ｋＤＮＡ　Ｈｉｎｄ　ｍ　Ｍａｒｋｅｒ购自北京华美公司，质粒提取试剂盒、ＤＮＡ　［基金项目］宁夏医科大学校级项目（编号：ＸＭ２００８２５）　［作者单位］宁夏医科大学，宁夏银川７５０００４　［作者简介］丁淑琴（１９７４一），女，宁夏人，回族，硕士研究生，讲师，　从事病原生物检验教学工作。　回收试剂盒购自天根生物工程公司。　１．１．３　ＰＣＲ引物：通过ＧｅｎｅＢａｎｋ公共数据库检索　出结核分枝杆菌ＣＦＰ１０基因序列（ＧｅｎＢａｎｋ序列号：　ＮＣ＿０００９６２．２），分别在起始端和末端设计出一对　引物。　Ｐ１：５’一ＣＴＧ姒眦ＡＴＧＧＣＡＧＡＣＡＴＧＡＡＧＡＣＣＧＡＴ一３’　Ｐ２：５’一ＧＴＣ　Ｇ７１ＣＡＧＡＡＧＣＣＣＡＴＩＴｒＣＣＧＡＧＧ一３’　为了便于亚克隆，在引物１和引物２的两端分　别引入了一个ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏｌＩ酶切位点。引物由上　海生物工程公司合成。　１．２　方法　１．２．１　聚合酶链反应（ＰＣＲ）：反应组成为：１０×　Ｂｕｆｆｅｒ（含Ｍｇ　）２．５ｔｘｌ，１０ｍｍｏｌｄＮＴＰ　０．５ｔｘｌ，引物１　和引物２各０．５ｍｌ　ＤＮＡ　２１ｘｌ，ＴａｑＤＮＡ酶０．５　，　ｄｄＨ，Ｏ　１８．５Ｉｘｌ。反应条件为：９４ｏＣ　４ｍｉｎ；９４ｏＣ　３０ｓ，　６０ｏＣ　３０ｓ，７２℃３０ｓ，３０个循环；７２℃７ｍｉｎ。ＰＣＲ产　物经１．５％琼脂糖凝胶电泳鉴定。　１．２．２　ＰＣＲ产物的纯化与目的基因的克隆：ＰＣＲ产　物切胶回收，ＤＮＡ与ｐＧＥＭ—Ｔ载体在Ｔ４连接酶的　作用下，４￣Ｃ连接过夜。连接产物转化入Ｅ．ｃｏｌｉ

牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析

牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析

牛结核分枝杆菌LppA基因克隆与序列分析

徐广贤;李娟;李勇;王玉炯

【期刊名称】《黑龙江畜牧兽医》

【年(卷),期】2009()5

【摘 要】牛结核分枝杆菌LppA基因是一个编码磷脂蛋白的基因，为了研究牛结核分枝杆菌LppA基因的多态性，试验以牛结核分枝杆菌基因组DNA为模板，克隆LppA基因，并进行序列测定，然后利用DNAMAN软件对其序列进行分析。结果表明：LppA基因全长564bp，编码187个氨基酸，与Gen—Bank所发表的牛结核分枝杆菌LppA基因的核苷酸同源性为99．47％，氨基酸同源性为98．40％，有3处位点发生有义突变。

【总页数】2页(P16-17)

【关键词】牛结核分枝杆菌;LppA;序列分析

【作 者】徐广贤;李娟;李勇;王玉炯

【作者单位】宁夏大学生命科学学院

【正文语种】中 文

【中图分类】S852.618

【相关文献】

1.绵羊Oct4基因启动子序列的克隆及其与猪和牛序列的比较分析 [J], 李昊;郭虎;王春生;宋红卫;朴善花;安铁洙

2.篦子三尖杉牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因的克隆与序列分析 [J], 齐小琼;胡晨熙;李大卫

3.牛αs1乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析 [J], 岳军明;张宏权;王允玲;任宏波;周廷冲;王会信;殷震

4.牛结核分枝杆菌PstS3基因克隆与序列分析 [J], 周晶;贾浩;徐广贤;王玉炯

5.基于转录组信息的艾纳香牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因（BbGGPS）的克隆及序列分析 [J], 夏奇峰;赵致;刘红昌;官玲亮;庞玉新

因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买