原子吸收分光光度法

太极集团重庆涪陵制药厂有限公司

一般检验方法及试药试剂

原子吸光分光光度法检验标准操作规程

部门：质管部 题目：原子吸光分光光度法检验标准操作序页/总页 1/10

编号：SOP-48-009-Ⅰ 新订：Ⅰ版（2010年） 起草人：

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颁发部门：总工办 分发份数：8份

分发部门：档案室、总工办（各1份）、质管部（6份）

变更原因及变更记录：

1 目的

为了建立并规范原子吸光分光光度法检验标准工作程序，特制订本规程。

2 引用标准

《中华人民共和国药典》现行版一部附录

《中国药品检验标准操作规范》现行版

3 适用范围

本法系采用原子吸光分光光度法对原料药、成品、中间产品及食品中铅、镉、砷、汞、铜进行限量检查。

4责任 质管部负责人及检验人员。

5内容

5.1仪器与用具

5.1.1 原子吸收分光光度计 应配备有火焰原子化器、石墨炉原子化器和适宜的氢化物发并具有氘灯或塞曼效应背景校正功能；铅、镉、砷、汞、铜等元素的空心阴极灯；普通或石墨管；乙炔气、高纯氩气；空气压缩机及冷却循环水泵等。

5.1.2 微波消解仪 内罐为聚四氟乙烯材料制成，具有适宜的耐压密封装置和过压安全保护有程序控制、功率可调的微波发生装置；可采用适宜的方式监控反应罐内的温度和压力。5.1.3 电热板 应具有温度均匀的加热表面和温度控制装置。

5.1.4 纳氏比色管或量瓶 英尽可能使用耐腐蚀的塑料器具，以聚四氟乙烯材料制成的为器皿易吸附或吸收金属离子，因此仅适于短时间内对溶液的容量使用。

5.2 试药与试液

5.2.1 铅、镉、砷、汞、铜单元素标准溶液及国家一级标准物质杨树叶 中国计量科学供，单元素标准溶液用于制备标准曲线，杨树叶或茶树叶可作为工作对照物质，检查方法的5.2.2 硝酸、高氯酸 应采用高纯试剂，盐酸、硫酸、磷酸二氢铵、硝酸镁为优级纯，抗坏血酸、盐酸羟胺为分析纯。使用前应检查各试剂种的相关金属元素含量符号测定的要5.3.3 水 去离子水或用石英蒸馏器蒸馏的超纯水，使用前应检查其中的相关金属元合测定的要求。

5.3.4 25%碘化钾溶液 取碘化钾25g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。5.3.5 10%抗坏血酸溶液 取抗坏血酸溶液10g，加水100ml使溶解，即得。本液应临5.3.6 含1%磷酸二氢铵溶液和0.2%硝酸镁溶液的混合溶液 取磷酸二氢铵1g，硝酸加水100ml使溶解，即得。

5.3.7 1%硼氢化钠和0.3%氢氧化钠的混合溶液 去氢氧化钠3g，加水1000ml使溶解氢化钠3g，使溶解，即得。本液应临用新制。

5.3.8 4%硫酸溶液 取硫酸4ml，加入水中稀释，并加水至100ml，即得。

5.3.9 5%高锰酸钾溶液 去高锰酸钾5g，加入水溶解并稀释至100ml，即得。

5.3.10 5%盐酸羟胺溶液 去盐酸羟胺5g，加入水溶解并稀释至100ml，即得。

5.3.11 2%硝酸溶液 取硝酸2ml，加水稀释至100ml，即得。

5.4 操作方法

5.4.1 标准溶液的制备

5.4.1.1 为方便操作，可将各单元素标准溶液用2%硝酸溶液稀释成一定浓度的标准储于低温保存。临用前，取此储备液，按要求稀释并制备标准曲线。

5.4.1.2 铅标准溶液 分别精密量取铅标准储备液（1ug/ml）适量，用2%硝酸溶液制分别含铅0ng、 5ng 、20ng、40ng、 60ng 、80 ng的溶液。

5.4.1.3 镉标准溶液 分别精密量取镉标准储备液（1ug/ml）适量，用2%硝酸溶液制分别含镉0ng、 0.8ng 、2ng、4ng、 6ng 、8ng的溶液。

5.4.1.4 砷标准溶液 分别精密量取砷标准储备液（1ug/ml）适量，用2%硝酸溶液制分别含砷0ng、 5ng 、10ng、20ng、 30ng 、40 ng的溶液。

5.4.1.5 汞标准溶液 分别精密量取汞标准储备液（1ug/ml）0ml、0.1ml、0.3 ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加4%硫酸溶液40ml，5%的高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴酸羟胺溶液至紫红色恰消失，用4%硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

5.4.1.6 铜标准溶液 分别精密量取铜标准储备液（10ug/ml）适量，用2%硝酸溶液1ml分别含铜0ng、 0.05ug 、0.2ug、0.4ug、 0.6ug 、0.8ug的溶液。 5.4.2 供试品溶液的制备 对于有害元素的限量检查首先需要破坏消解样品中的有机待测元素基本转化为无机离子状态。《中国药典》2010年版一部铅、镉、砷、汞、铜测定法定了三种样品消解方法，即：微波消解、湿法消解、干法消解，其中微波消解法列为第一法消解和干法消解由于其设备简单，易于操作，也是有效的消解手段。

5.4.2.1 微波消解法 具有快速、试剂使用量小污染小空白值低等优点，为首选方法微波消解仪必须严格按照相应型号的仪器操作规程操作，注意安全。一般样品消解时，可按作。

取供试品粗粉0.5g，精密称定，加硝酸5ml，安装好消解罐，按照程序升温消解完后，解罐自然冷却至70℃以下，再缓缓释放压力，打开消解罐，置电热板上，130℃以下缓慢加红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至2～3ml，放冷，用水转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度。的样品应呈无色或略带浅绿色的澄明溶液，部分样品可能残存有少量灰色硅酸盐沉淀，可振心处理。

5.4.2.2 湿法消解 湿法消解属于氧化分解法，是较常用的一种消化方式。其主要优适用性强、样品取样量可以较大，挥发损失或附着损失较小，其缺点是试剂用量大，空白值高，处理所需时间较长。消解可以采用凯氏烧瓶，与电热板上进行。一般的样品消解时，可法操作。

取供试品粗粉1g，精密称定，加入硝酸－高氯酸（4:1）的混合液5～10ml，混匀，瓶个小漏斗，浸泡过夜。置电热板上缓缓加热消解，温度控制在120℃左右，保持溶液微沸，黑色，再加硝酸-高氯酸（4:1）混合液适量，持续加热至溶液澄明后升高温度至约200℃（的测定，为了防止汞的挥发损失。消解温度不宜高于140℃），继续加热至冒浓烟，至至白消化液呈无色或略带黄色，自然冷却至室温。用于铅、镉、铜的测定时，可用2%硝酸溶液转量瓶中，洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得；用于汞的测定时，可4%硫酸溶液4ml、5%高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色消失，转入中，用4%硫酸溶液洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取即得。

5.4.2.3 干法消解 干法高温灰化也是破坏样品有机基体的有效手段之一。其优点是大量的样品供测试，方法简便，试剂污染小，空白值低。其不足之处是较高的温度灰化容易发性元素的损失，使测定结果偏低。因此干法消解不能用于砷、汞的测定。

去供试品0.5g，精密称定，置经处理洗净的瓷坩埚或铂金坩埚内，于电热板上先低温除和挥发性成分，在缓缓炭化至无烟，移入高温炉种，于500℃灰化5～6h。灰化温度和时间同样品的挥发难易程度进行实验选择，但温度不宜高于500℃，否则会造成铅、镉等元素的失。若样品挥发不完全，可加硝酸适量，于电热板上低温加热后灼烧，反复多次知道灰化完出放冷，加10%硝酸溶液5ml使溶解，转入25ml量瓶中，用水洗涤容器。洗液合并于量瓶中释至刻度，摇匀，即得。

5.4.3 空白溶液的制备 每次测定必须随行空白对照，所采用的试剂种类、用量，操与操作环境应与供试品溶液的制备相同。

5.4.4 测定法

5.4.4.1 铅测定法 铅的测定采用石墨炉原子吸光法。因样品中有复杂基体成分易产所以多数情况下游必要使用基体改进剂。

精密量取标准品溶液、空白溶液及供试品溶液各1ml，分别加入含1%磷酸二氢铵溶液硝酸镁溶液的混合溶液0.5ml作为基体改进剂，混匀，分别精密吸取10～20ul，注入石墨炉器，测定。采用氘灯法或塞曼法进行背景校正。检测波长一般选择283.3nm，其他检测参数仪器具体枪口加以优化调整。如采用热点公司的M6型原子吸收分光光度计是，可参考一下件：采用热解涂层石墨管，塞曼法背景校正，空心阴极灯工作电流为9mA，狭缝为0.5nm，程序为：干燥温度110℃，持续20s；灰化温度800℃，持续+15s；原子化温度1600℃，持清楚温度2200℃，持续2s。

5.4.4.2 镉测定法 镉的测定采用石墨炉原子吸收法。是否需要采用基体改进剂，应测样的不同种类，依据采用标准加入法吼预实验结果确定。可根据仪器配置情况选择氘灯法法进行背景校正。检测波长一般选择228.8nm，其他检测参数可以根据仪器具体情况加以优如采用热电公司的M6型原子吸收分光光度计，加入基体改进剂，可参考一下测定条件：采涂层石墨管，塞曼法背景校正，空心阴极灯工作电流为4mA，狭缝为0.5nm，原子化程序为温度110℃，持续20s；灰化温度800℃，持续15s；原子化温度1300℃，持续3s；清楚温度持续2s。

5.4.4.3 砷测定法 砷的测定采用氢化物发生—原子吸收法。分别精密量取各浓度标液、空白对照溶液及供试品溶液各10ml，置25ml量瓶中，分别加入25%碘化钾溶液1ml，摇10%抗坏血酸溶液1ml，摇匀，用盐酸溶液（20→100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置80℃水热3min，取出，放冷。取适量吸入氢化物发生装置，以含1%硼氢化钠和0.3%氢氧化钠混合还原剂，盐酸溶液（1→100）为载流，氮气为载气，吸取管温度为800～900℃，检测波长为1背景校正为氘灯或塞曼效应，测定吸收值。反应时间、进样体积（时间）、载气流量等参数照氢化物发生器生成厂家推荐的条件，结合原子吸收分光光度计测定条件加以优化后确定5.4.4.4 汞测定法 汞的测定采用冷蒸气—原子习惯法。缩采用的冷蒸气发生装置与缩采用的氢化物发生装置相同，因汞在室温下既可原子化，所以测定汞时吸取管不需加热。硼氢化钠和0.1%氢氧化钠混合液作为还原剂，盐酸溶液（1→100）为载流，氮气为载气，温度为800～900℃，检测波长为253.6nm，背景校正为氘灯或塞曼效应，测定吸收值。反进样体积（时间）、载气流量等参数，可参照氢化物发生器生成厂家推荐的条件，结合原子光光度计测定条件加以优化后确定。 5.4.4.5 铜测定法 铜的测定采用火焰原子吸收法。检测波长为324.7nm，采用空气—焰，若使用热电公司的M6型原子吸收分光光度计是，可以参考以下测定条件：燃气流量0.必要时背景校正，空心阴极灯工作电流为4mA。狭缝为0.5nm。

5.5注意事项

5.5.1 制备工作曲线时，一般采取线性回归，但在测定线性范围较窄的情况下，采用程最小二乘法拟合回归更能反映真实的浓度-吸收度关系。一般要求r≥0.995。样品测定值标准曲线线性范围内 ，若其吸收值高于标准曲线，则应适当稀释后再行测定。