几种细菌培养基配方

一．细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

肉膏蛋白胨培养基1.药品比例：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL，PH7.4～7.62.实验器材：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/LNaOH、lmol/LHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、4.5mL无菌水6管，10%酚液，49.5mL无菌水(带玻璃珠)1瓶。

土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。

电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台.3.配置方法（1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。

牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

（2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。

若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。

（3）调pH：检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加lmol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。

若偏碱，则用lmol/L HCl 进行调节。

pH的调节通常放在加琼脂之前。

应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

（4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利培养的观察。

但是供一般使用的培养基，这步可省略。

（5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。

分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。

分装量：固体培养基约为试管高度的l/5，灭菌后制成斜面。

培养基及成分1、Acetobacter Medium (醋酸菌培养基)Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10gCaCO3 20g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种2、Nutrient Agar (营养肉汁琼脂)Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30gNaCl 5g Agar (琼脂) 15gDistilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2[Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added .It is favorable to promote spore formation .适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌3、Azotobacter Medium (固氮菌培养基)KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8gMgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇNa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5gMannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量)Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15gAdjust (调) pH to 7.2适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌4、Corn Meal Medium (玉米粉培养基)Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1gGlucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml[Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。

lb培养基配方LB培养基是由Bertani于1951年开发的一种常用的培养基。

它是一种富含营养物质的培养基，适用于多种细菌的生长和培养。

LB培养基常被用于细菌的培养和研究中，提供了细菌生长所需的营养物质和能量来源。

下面是LB培养基的配方和制备方法。

配方如下：1. 十氯酸钾（KClO₃）：0.05 g/L2. 酵母浸粉（Yeast extract）：5 g/L3. 蛋白胨（Peptone）：10 g/L4. 氯化钠（NaCl）：10 g/L5. 水：适量制备方法：1. 将酵母浸粉、蛋白胨和氯化钠加入适量的水中，搅拌溶解。

2. 加入十氯酸钾，继续搅拌混合。

3. 将溶液加热至沸腾，然后冷却至室温。

4. 调整溶液的pH值为7.0（如果需要）。

5. 用适当的容器（如试管或烧杯）装载培养基，然后用自动灭菌器（如高压灭菌器）进行灭菌。

注意事项：1. 在制备培养基时，要注意实验室卫生和操作规范，避免污染和交叉感染。

2. 使用无菌的工具和容器，避免微生物的污染。

3. 制备后的培养基应保持在适当的温度和环境条件下，以确保细菌的生长。

4. 若长时间存储，建议将培养基分装于适当的容器中，并密封保存在低温（如4℃）的冰箱中。

总结：LB培养基是一种简单易制备、适用范围广的细菌培养基，提供了细菌所需的营养物质和环境。

其配方简单，制备方法方便，常被广泛应用于生物学研究和实验室中的细菌培养。

请注意，以上为LB培养基的一般配方和制备方法，具体使用时还需根据实验需要进行调整和优化。

同时，个人在实验室操作时应遵循相关的实验安全规范和操作规程，确保实验的顺利进行。

平板划线分离法：被普遍采用
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分离方法
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A.倒平板：注意培养基的温度不能太高，否则冷凝水太多，细菌在水中游动而影响单个分散菌落的形成。
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划4条线后，将接种环灭菌，培养皿转动90°，从第2条线开始划4－5条线
如果菌液浓度大，培养皿转动角度减小，增加划线的次数
C.复染剂
原液：番红O 2.5g，95%酒精100mL 复染剂：原液10mL，蒸馏水90mL
B. 鲁戈尔碘液：碘1.0g，碘化钾2g蒸馏水300mL。
将碘和碘化钾在研钵中研和，慢慢加水并继续研和直至碘和碘化钾溶解，然后加水稀释到300mL，盛入棕色试剂瓶，放暗处备用。
（2）染色程序
A. 配制细菌悬浮液：菌龄16h
配制过程：将NH4H2PO4、氯化钾、MgSO4.7H2O溶于蒸馏水，调节pH7.0后加入溴百里酚兰，最后加入碳素化合物（也可分别灭菌后加入）
分装：将上述培养基分装于试管中，每管10 mL左右。如果测定气体产生，加上杜氏发酵小玻管后灭菌。 产酸时培养液变黄，产碱时变蓝，产气则小玻管内培养液被部分排出，出现空隙。
B.用接种环蘸取上述配制好的菌悬液，在已凝固的平板培养基表面划线
（2）培养皿稀释分离法
0 原液
1
取1环菌液
0.5ｍL灭菌水
2
混匀后取1环
3
混匀后取1环
4
混匀后取1环
5
混匀后取1环
3.培养
一般放置在 28－30℃温箱中倒置培养，时间2～3 d。 将冷却至45℃左右的培养基倒入装有稀释菌液的培养皿中，轻轻转动培养皿，使菌液和培养基混匀，待其凝固后培养。
干热灭菌法
通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。 凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。