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大葱RAPD反应体系的优化

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江 苏农 业科学
２０ ０ ８年第 ３期
一 ７ 一 ７
大葱 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ反应体 系 的优化
贾俊 香 ，陶承 光
（．沈阳农业 大学 园艺学 院， 宁沈 阳 １０ ６ ； ． １ 辽 １ １ １ ２ 辽宁省农业 科学院 ， 宁沈阳 １０ ６ ） 辽 １１１
序 为 ：４℃预变性 ３ｍｎ ９ ９ ｉ；４℃变性 ４ ，８ｑ退火 ４ ，２℃延 伸 １： ｎ４ ０ Ｓ３ Ｃ ５Ｓ７ ｍ ，０个循环 ； ｉ 最后 ７ ２℃延伸 １ ｉ。 ０ｒ ｎ ａ 关键词 ： 大葱 ；Ｒ Ｐ 反应体 系 Ａ Ｄ； 中图分类号 ：Ｑ ５ ７ 文献 标志码 ： Ａ 文章 编号 ：０ ２—１０ （０ ８ ０ ０ ７ ０ １０ ３ ２ ２ ０ ）３— ０ ７— ３
术ｕ ， 具有 简 单 、 速 、 用 低 、 需 预 知 研 究 对 象 Ｊ 快 费 不
的基 因组 序 列等 优 点 ， 目前 众 多分 子标 记 技 术 中 是
应 用 最 广 的 技 术 。 主 要 应 用 于 个 体 和 品 系 鉴 定 心～１基 因 定 位 ］构 建遗 传 图 谱 Ｉ］遗 传 多 ３ 、 ７、 样性 检￣ －１种 问遗 传 分 析 和系 统 学 研 究 “ 、 ，８９、 ｊ ｌ Ｅ ］ 标 记辅 助选 择 等 研 究 领 域 。但 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ分 析 有 自 身 的缺 点 ， 于 Ｒ Ｐ 由 Ａ Ｄ技 术 是 以 Ｐ Ｒ反 应 为 基 础 Ｃ 的， 反应 体系 的细微 变 化 就 可 能会 影 响 到扩 增 结 果 的重 复性 。一 般 可通 过提 高模 板 质量 、 制 Ｄ Ａ浓 控 Ｎ 度 和 Ｍｇ 浓度 、 保持 反应 体 系 和扩增体 系 的一 致 性 来 提高结 果 的可靠 性 。本 研究 以大 葱为 材料 对影 响
摘要： 研究 了大葱基 因组 Ｄ Ａ的提取 方法 ， Ｎ 并对 Ｍｇ 浓度 、Ｎ Ｐ ｄ Ｔ ｓ浓度 、 引物 浓度 和 Ｔｑ酶 用量进 行 了优 ａ
化， 建立 了 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ最佳反应体 系 ， ２ 反应体系 中 １ 即 Ｏ ０×Ｂ ｆ ｒ 冲液 ２ ｌＭｇ ｕ ｅ缓 ， ２ 浓度 ２ ５ｍｍ ｌＬ，Ｎ Ｐ 浓度 ． ｏ ｄ Ｔ ｓ ／ ０ ２ ｍｏ Ｌ 引物浓度 ０ ６ ｍ ｌＬ Ｔｑ酶 １ｕ ２ ５ Ｕ ） 模板 Ｄ Ａ ６ ｇ 用灭菌超纯水补 足 ２ ｌ 增程 ．２ｍ ｌ ， ／ ． ５Ｉ ｏ ，ａ ￣ ／ （ ． ／ １ ， Ｎ ０ｎ ， Ｏ 。扩
．
匀 。 （ ） ００ ０ｒｒｉ ７ １ ０ ａ ｎ离心 １ ｎ， ３ ０Ｉ 上 清液 ／ ０ｍｉ 将 ０ ｌ Ｌ 转 入 １ ５ｍ 离心 管 中 ， 入 １Ｉ Ｎ ｓ （ ０ ． ｌ 加 Ｌ Ｒ ａｅ １ ｌ Ｉ ） Ｌ ， １
轻 轻 混匀后 ３ ７℃ 水 浴 １ｈ （ ） 出静 置 ， 却 至 。 ８取 冷 室 温 后 ， 入 １１ 积 的 Ｎ Ａ （ Ｈ 值 ５ ２ 和 ２ ３ 加 ／ ０体 ａｃｐ ． ） ／ 体 积 的异丙 醇 ， 倒 混 匀 后 一２ 颠 Ｏ℃ 放 置 １： （ ） ｈ ９ 。 １ ０ ｒｎ离 心 １ ｉ， ００ ０ｒａ ／ｉ ０ｍｎ 弃上 清 ， ７ ％ 冷 乙醇清 用 ０ 洗 沉淀 ２次 ， 于 超 净 工 作 台 上 吹 干 （ 置 １—２ ｈ 。 ） （Ｏ 加入 ５ ｌｒ １） Ｑ ， Ｅ溶解 ， 于 一 Ｏ℃备用 。 置 ２
ＲＰ Ａ Ｄ扩增 反应 的因素进 行 了探讨 。
１ 材料 与方 法
１ １ 植 物材料 ．
荡， 打开盖子 ， 放出由氯仿产生的气体 ， 然后盖紧盖 子 ，００ ０ ｒｒ ｎ离 心 １ ｉ。 （ ） 上 清 液 转 入 １ ０ ／ ｉ ａ ０ｒｎ ４ 将 ａ １５ｍ 离心管 ， ｌ 加入等体积氯仿／ 异戊醇（ 体积 比 ２ ４ ： ） 轻颠 倒数 次 ，０００ｒｒｉ 心 ５ｒｎ （ ） １轻 １ ０ ａｎ离 ／ ｉ。 ５ 上 ａ
Ｒ Ｐ Ａ Ｄ是 １９ ９ ０年 建 立 起 来 的一 种 分 子 标 记 技
冲液 （ ％ Ｃ Ａ １０ｍ ｌＬＴｉ ２ Ｔ Ｂ；０ ｍｏ ｒ ／ ｓ—Ｈ Ｉｐ 值 ８ ０ Ｃ ，Ｈ ．； ２ ｍ ｏ ＬＥ Ｔ ｐ 值 ８０；． ｏ ＬＮ Ｃ ； 用 ０：ｍ ｌ Ｄ Ａ，Ｈ ／ ． １４ｍ ｌ ａＩ使 ／ 前 加 入 １ ｐ一巯 基 乙醇 ）０ ，５℃ 水 浴 １： 期 ％ ５０ ６ ｈ ， 间颠 倒 几 次 。 （ ） 入 等体 积 （０ １ 氯 异 戊 ３加 ５０ ） 醇（ 积 比２ １ ， 体 ４： ） 颠倒 混匀 至 溶液呈 乳 浊 状 ， 不振
１４ Ｒ Ｐ ． Ａ Ｄ扩增反 五 叶齐 。
１ ２ 试 剂 ．
８ Ｏ条 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ随机 引物 由宝 生 物 （ 连 ） 限 公 大 有
司合 成 ， Ｎ Ｐ、ａ ｄ Ｔ Ｔｑ酶 、 Ｃ２ １ Ｍｇ １、０×Ｂ ｆｒ缓 冲 液 、 ｕｅ Ｃ Ａ 琼 脂糖 和 Ｇ ｌＶｅ Ｔ Ｂ、 ｏ ｉｗ核 酸 染 料 购 自天 根 生 物 ｄ
工程有限公 司。其他药品为 国产分析纯试剂。
１３ Ｄ ． ＮＡ 提 取
扩 增反 应程 序 为 ：４℃预 变性 ３ｍ ｎ ９ ９ ｉ ；４℃变 性
４ ，８℃退 火 ４ ，２℃延 伸 １ｍｎ ４ ０ｓ３ ５ｓ７ ｉ，０个循 环 ； 最
…
清液 转 入 １５ｍ 离 心 管 ， 入 ２３体 积 的异 丙 醇 ， ． ｌ 加 ／ 颠 倒 混匀 ， ２ 一 Ｏ℃放 置 １ｈ （ １ ０ ／ ｉ 心 ｏ ６）０００ｒｒｎ离 ａ
１ ｎ 弃 上清 ， ０ｍｉ， 加入 ３ ０ Ｉ Ｅ溶 解 ． ｍ ｎ 颠 倒混 ５ ＬＴ ｌ １ ｉ， ５：

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甜叶菊RAPD反应体系的优化

甜叶菊RAPD反应体系的优化

甜叶菊RAPD反应体系的优化胡能兵;何克勤;张子学;林平;隋益虎;崔广荣【期刊名称】《激光生物学报》【年(卷),期】2011(020)004【摘要】以甜叶菊为试材,对影响其RAPD反应体系的7个因子进行优化.结果表明,20 μL的优化体系包括:双蒸水13.6 μL,10×Buffer(含15 mmol/L MgCI2)溶液3μL,2.5 mmol/L的dNTPS 1.2 μL,10 μmol/L的引物1μL,20 ng的模板DNA1μL,1UTaq聚合酶；热循环程序为:94℃预变性4 min,94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸1min,40个循环,最后72℃延伸7 min.%Optimization of 7 factors of RAPD reaction system in Stevia rebaudiana Bertoni was studied. The results indicated that, optimization system of 20 μＬincluded; 13.6 μL of ddH20, 3 μL of 10 x Buffer with 15 mmol/L MgCL,, 1. 2 μL of 2. 5 mmol/L dNTPS, 1 μL of 10 μmol/L Primer, 1 μL of 20 ng DNA and 1 unit of Taq polymerase; thermal cycle program was: 1 cycle of denaturing for 4 min at 94 ℃, 40 cycles of denaturing for 30 s at 94 ℃, annealing for 30 s at 35 ℃ , primer extension for 1 min at 72 ℃, and the last cycle of extension for 7 min at 72 ℃.【总页数】5页(P560-563,477)【作者】胡能兵;何克勤;张子学;林平;隋益虎;崔广荣【作者单位】安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000;安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000;安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000;安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000;安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000;安徽科技学院植物科学学院,安徽凤阳233100;安徽省甜叶菊工程技术研究中心,安徽蚌埠233000【正文语种】中文【中图分类】Q943【相关文献】1.马铃薯早疫病菌RAPD-PCR反应体系优化 [J], 台莲梅;左豫虎;张亚玲;金永玲;郑雯;李海燕2.蛇莓 RAPD 与 ISSR -PCR 反应体系优化 [J], 张聪子;童巧珍;郭婷;高昱;蔡嘉洛3.濒危竹种小蓬竹（Drepanostachyum luodianense）RAPD-PCR反应体系优化 [J], 刘济明;王敏;闫国华;赵小鹏;文萍;池馨;颜强;李鹏4.异地板蓝根基因组DNA指纹图谱建立及RAPD-PCR反应体系优化 [J], 姜颖;杨欣;于英君5.花生RAPD反应体系的优化及其遗传多样性分析 [J], 徐彪;冯艺川;李玉发;何中国;吴松权因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

珍稀濒危植物裸果木RAPD反应体系优化研究

珍稀濒危植物裸果木RAPD反应体系优化研究


传 图谱构 建 等方 面有广 泛 的应 用 ［ ， １ 。 由于 Ｒ Ｄ引 ＡＰ
物 的随机性 及 较 低 的 退 火 温 度 等 导致 的 条 件 不 稳 定 等 ， 响 了该 技术 的应 用 。在 应用 该技 术 时 ， 常 需要 影 通 对 其反 应体 系进 行 优 化 ， 以提 高 其稳 定 性 。为 此进 行 了裸果 木 Ｒ Ｄ体 系 的构 建 和优 化 试验 ， ＡＰ 为开 展 裸果 木 种质 资源保 护 和管理 提供 有价值 的科 学参 考 。
缩小 和 片段化 口 。开展 种群 遗 传 学 研 究 ， 定 相 关 的 ］ 制
增 多态性 ＤＮＡ（ ＲＡＰ 技 术是 以 Ｐ Ｒ为 基础 的一 种 Ｄ） Ｃ
分 子标记 ， 有操作 简便 、 速 、 具 快 低成 本 、 多态 性 检 出率
高 等优 点 ］ 在 遗传 多样 性 评 价 、 种 分类 与鉴 定 、 ¨， 物 遗
基 金 项 目 ： 益 性 农 业 行 业 专 项 一牧 区生 态 高 效 草 原 牧 养 公 技 术 模 式 研 究 与 示 范 （０ ０ ３ ６ ） 助 ２ １０ ０ １资
作 者 简 介 ：王静 （９ ２） 女 ， 肃 兰 州 人 ， 士 ， 师 ， １ ８一 ， 甘 硕 讲 主要 从 事 生 物 技 术 及 微 生 物 学 等 教 学 和研 究 工 作 。
１ 材 料和 方 法
１ １ 材 料 ．
保护 计划 ， 是保 护其 的有 效途径 。 目前 有关 裸果 木 的相关研 究 主要集 中在形 态解 剖
学 引、 理 生 态 ］ 组 织 培 养 和 扩 繁嗍 以及 化 学 成 “ 生 、
自 ２ ０ ￣２ ０ ０ ８ ０ ９年 １ ０月 ， 集 了甘 肃 省肃 北 县 红 采
何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化

何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化

何首乌基因组DNA提取及RAPD反应体系正交设计优化(作者：_________ 单位： ____________ 邮编： __________ )【摘要】目的确定适合何首乌RAPD-PC的基因组DNA 提取方法及最适宜反应体系。

方法通过改良的CTAB法提取何首乌基因组DNA研究其用于RAPD-PCR勺可行性。

利用正交设计方法L16 (45)，针对Tag酶，引物，dNTP镁离子，模板设计了5因素4水平的正交实验，优化RAPD-PC反应体系。

结果正交设计结果表明，可以得到几种不同的有效扩增反应体系组合。

根据实际需求，最适宜的RAPD-PC 反应体系为20 卩I，其中1X PCR buffer, Tag 酶1U，弓I 物 1 卩mol/L，镁离子2 mmol/L，dNTP 300 卩mol/L，模板40 ng。

结论改良的CTAB法和正交优化得到的反应体系适合用于何首乌RAPD 遗传多样性分析。

【关键词】何首乌；DNA提取；RAPD正交设计何首乌是我国传统医药中的名贵药材，何首乌块根及茎叶均可入药。

何首乌具有补肝肾、益精血、乌须黑发、养心安神等功效，主治血虚身痛、心烦失眠、劳伤多汗等症。

同时可用于保健和食品等多方面，何首乌块根富含淀粉，含量高达45.2%,药食两用。

RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)技术是由美国学者Williams : 1］和Welsh :2］两个研究团队在1990年几乎同时发展起来的。

Williams等在发现RAPD多态性的同时还证明了RAPD标记的分离情况符合孟德尔遗传规律，因而明确了RAPD乍为分子标记用于研究生物遗传变异的理论基础。

RAPD分子标记建立在PCR基础之上。

通过使用一系列具有10个碱基的单链随机引物，对基因组的全部DNA进行PCR扩增以检测多态性。

RAPD^术因其操作简便、反应迅速、成本低和DNA用量少等优点而被广泛应用于药用植物种内或种间亲缘关系和遗传多样性方面的研究。

玉米大斑病菌RAPD分析最佳反应体系的建立

玉米大斑病菌RAPD分析最佳反应体系的建立

玉米大斑病菌RAPD分析最佳反应体系的建立桂秀梅;张金林;董金皋;安鑫龙【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2005(28)1【摘要】通过对玉米大斑病菌RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验,建立了一套适合玉米大斑病菌的扩增反应体系及反应程序:25μL体系中,加入Taq DNA聚合酶2.0 U、25 mmol/L的MgCl2 2.0 mmol/L、dNTP 200μmol/L、随机引物30ng、10×PCR buffer 1 μL、DNA模板30ng、用重蒸水补足25μL.反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性1 min,37℃退火1 min,72℃延伸2 min,40循环;72℃延伸6 min.【总页数】3页(P56-58)【作者】桂秀梅;张金林;董金皋;安鑫龙【作者单位】河北农业大学,真菌毒素实验室,河北,保定,071001;河北农业大学,真菌毒素实验室,河北,保定,071001;河北农业大学,真菌毒素实验室,河北,保定,071001;河北农业大学,真菌毒素实验室,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S435.13【相关文献】1.油茶DNA提取及RAPD分析最佳反应体系的建立 [J], 阙生全;张芳2.毁灭炭疽菌RAPD和ISSR-PCR最佳反应体系的建立 [J], 邢红梅;丁平;王克荣;周晓云3.绿盲蝽乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立 [J], 李国平;周晓静;封洪强;田彩红;邱峰4.胡麻专化型尖孢镰刀菌ISSR-PCR最佳反应体系的建立 [J], 苑琳;刘姗姗;路福平;李子钦;张辉5.中华蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立 [J], 王宇豪;赵冬香;王玉洁;刘俊峰;高景林;刘桂琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。