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猪流行性腹泻病毒RT-LAMP方法的建立及应用田野;张祥斌;宋延华;张常明;潘永飞;刘佳佳;贺东生【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)008【总页数】3页(P38-40)【作者】田野;张祥斌;宋延华;张常明;潘永飞;刘佳佳;贺东生【作者单位】广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;广东温氏食品集团股份有限公司,广东云浮527439;华南农业大学兽医学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】S858.28猪流行性腹泻病毒(PEDV)属于冠状病毒成员，为有囊膜的单股正链RNA病毒，以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性肠道传染病。
我国从1976年开始陆续有PED的报道,20世纪80年代后该病在中国流行面逐渐扩大,并多与猪传染性胃肠炎、轮状病毒等其他肠道病原混合感染,给养猪业造成严重经济损失[1]。
环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术依赖6条特异引物和一种具有链置换特性的DNA聚合酶[2-3]，在等温条件下快速、高效、高特异、高灵敏地扩增靶序列。
逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)是在原反应液中加入一定量的逆转录酶，可以实现RNA的一步扩增。
本实验室利用建立起RT-LAMP技术，可以为更好地防控和研究该病毒的提供检测方法。
在LAMP基本反映体系基础上设置不同引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度，以及不同反应时间(15、25、35、45、55、65 min)和反应温度(57 ℃、58 ℃、59 ℃、60 ℃、61 ℃、62 ℃)，获得最佳反应参数，建立猪流行性腹泻病毒RT-LAMP检测体系。
猪流行性腹泻病毒RT-LAMP 可视化检测方法的建立高志强1，汪 琳1，姜 焱2，蒲 静1，赵相鹏1，尹 羿1，张 伟1（1. 北京出入境检验检疫局技术中心，北京 100026；2. 江苏出入境检验检疫局技术中心，江苏南京 210001）摘 要：为建立一种适用于现场快速检测的猪流行性腹泻病毒（PEDV ）LAMP 技术，基于羟基萘酚蓝（HNB ）的可视化显色特点，根据PEDV M 基因编码区序列，设计合成1套引物，通过反应物浓度和反应条件优化，建立了可闭管检测的PEDV RT-LAMP 检测方法。
特异性和灵敏度试验结果显示，建立的RT-LAMP 检测技术快速、灵敏、特异，可于1 h 内检出0.2 mL 0.1 TCID 50/mL 的病毒RNA ，与实时荧光RT-PCR 检测方法灵敏度一致，与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型以及猪链球菌2型核酸不发生交叉反应。
利用该方法对187份送检的粪拭子及病死猪组织样品进行应用检测，检出阳性样品9份，与荧光定量RT-PCR 方法检测结果一致。
试验结果表明，所建立的方法快速、特异，重复性满足要求，适用于送检样品的PEDV 快速检测。
关键词：猪流行性腹泻病毒；HNB 显色；RT-LAMP中图分类号：S 852.65 文献标识码：A 文章编号：1005-944X （2019）01-0058-07DOI ：10.3969/j.issn.1005-944X.2019.01.016Development of HNB-based Visual RT-LAMP Method for Detectionof Porcine Epidemic Diarrhea VirusGao Zhiqiang 1，Wang Lin 1，Jiang Yan 2，Pu Jing 1，Zhao Xiangpeng 1，Yin Yi 1，Zhang Wei 1（1. Beijing Inspection and Quarantine Testing Center ，Beijing 100026，China ；2. Beijing Inspection and Quarantine Testing Center ，Nanjing ，Jiangsu 210001，China ）Abstract ：In order to establish a RT-LAMP method for rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus （PEDV ），based on color reaction of HNB and according to M gene sequence of PEDV ，a set of primers were designed and synthesized. By optimizing the reaction concentration and conditions ，the RT-LAMP method was developed. Specificity and sensitivity results showed the established method was fast ，sensitive and specific. It could detect PEDV-RNA extracted from 0.2 mL virus suspension （0.1 TCID 50/mL ），which was consistent with the real-time RT-PCR method. No cross reactions were observed with the nucleic acids of classical swine fever virus （CSFV ），pseudorabies virus （PRV ），porcine reproductive and respiratory syndrome virus （PRRSV ），porcine circovirus type 2（PCV-2） and Streptococcus suis t ype 2. Using the RT-LAMP method ，a total of 9 positive samples were detected from 187 samples of fecal swabs and dead pigs submitted ，which was also consistent with the results of real-time RT-PCR. As a conclusion ，the established method was rapid ，specific and repeatable ，and it was suitable for rapid detection of PEDV in submitted tissue samples.Key words ：porcine epidemic diarrhea virus （PEDV ）；HNB-based color reaction ；RT-LAMP 猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea ，PED ）是以猪的严重肠炎、呕吐、水样腹泻等消化道症状为特征的高度接触性病毒性传染病。
4542023猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法R T-PC R检测方法的建立及应用陈雷兆丰华生物科技(福州)有限公司福州350014摘要为解决当前猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株类型复杂、各毒株之间交叉免疫保护不佳的现状,本研究针对N SP2基因保守区域设计1对特异性引物,通过条件优化,建立一种能够快速区分经典株、高致病性毒株和N A D C30-l i ke毒株的检测方法。
该方法与C SFV、PC V2、PR V、PED V、T G EV无交叉反应。
对不同毒株类型进行检测,结果显示该方法特异性强,能够将经典株、高致病性猪蓝耳病毒株和类N A D C30株进行快速区分,为猪群快速区分PR R SV感染类型及疫苗的选择、使用提供科学防控依据。
关键词猪繁殖与呼吸综合征经典毒株高致病性毒株N A D C30-l i ke毒株文献标识码:A文章编号:1003-4331(2023)04-0027-04D evel opm ent and appl i cat i on of one st ep R T-PC R m et hod f or t he det ct i onof porci ne reproduct i ve and res pi rat ory s yndrom e vi rusChen Lei(J of unhwa Bi ot echnol ogy(Fuz hou)Co.Lt d,Fuz hou350014)A bs t ract I n or der t o di s t i nct i on t he com pl ex t ypes of por ci ne r epr oduct i ve and r espi r at or y s yndr om e vi r us(PR R SV)s t r ai ns and t he poor cr os s-i m m une pr ot ect i on am ong t he s t r ai ns,a m et hod was es t abl i s hed t o di st i ngui s h di f f er entt ypes ofPR R SV,i ncl udi ng t he cl as⁃si calst r ai n,t he hi ghl y pat hogeni c s t r ai n and t he N A D C30-l i ke st r ai n by t he condi t i on of opt i m i z at i on.The r es ul t i ndi cat ed t hat i t has no cr os s r eact i on wi t h CSFV,PCV2,PR V,PED V and TG EV.A nd t he det ect i on of di f f er ent t ypes of vi r us s t r ai ns showed t hat t he m et hod was s peci f i c and coul d di st i ngui s h t he t hr ee t ypes of vi r us st r ai ns qui ckl y,t hat's pr ovi des a r api d di scr i m i nat i on and s el ect i on bas i s ofPR R S vacci nes f or pr event i on and cont r olofepi dem i c di seas es.K ey w ords Por ci ne r epr oduct i ve and r es pi r at or y syndr om e Cl ass i cals t r ai n H i ghl y pat hogeni c st r ai n N A D C30-l i ke st r ai n猪繁殖与呼吸综合征(Pr oci ne r epr oduct i ve andr es pi r at or y s yndr om e,PR R S)主要是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PR R SV)Ⅰ型和Ⅱ型引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要特征的传染病[1]。
多重RT-PCR一步法技术同时检测猪瘟病毒和蓝耳病病毒方法的建立以及初步应用孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2009(000)001【摘要】猪瘟病毒和蓝耳病病毒均能导致猪繁殖障碍,对养猪生产影响很大.根据猪瘟病毒(CSFV)和猪蓝耳病(PRRS)的基因保守序列设计了2对针对这2种病毒的特异引物,并建立了多重RT-PCR方法,分别对其最佳反应条件、特异性及敏感性进行了测定,结果表明能同时扩增得到2条与试验设计相符的167 bp(CSFV)和320 bp(PRRS)特异性条带,同时具有较好的特异性;敏感性检测结果表明,临床阳性的样品提取的核酸稀释1000倍后仍能检测出CSFV和PRRSV.本方法的建立对于这2种病毒病的早期快速检测具有十分重要的意义.【总页数】5页(P112-116)【作者】孔繁德;王荣;陈琼;吴德峰;徐淑菲【作者单位】厦门出入境检验检疫局,厦门,361012;福建农林大学,动物科学学院,福州,351006;厦门市农产品质量安全检验测验中心,厦门,361009;福建农林大学,动物科学学院,福州,351006;厦门出入境检验检疫局,厦门,361012【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.一步法多重RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒方法的建立和应用 [J], 于新友;李天芝;沈志强2.多重荧光RT-PCR技术检测猪流感病毒、猪乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立 [J], 梁晓艳;万东山;郭兰英3.猪瘟病毒猪细小病毒猪繁殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒多重PCR方法的建立以及初步应用 [J], 赵耘;秦玉明;张广川;赵启祖;宁宜宝;戴志红;谢磊4.非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 [J], 王建华;陈小金;赵丹;王玉玲;张俊哲;肖妍;董志珍;赵祥平5.猪源牛病毒性腹泻病毒与猪瘟病毒一步法双重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 [J], 梁洪;王怀禹;粟元文;魏玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立佚名【摘要】根据GenBank登录的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)、经典型猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)、与NADC 30-like猪繁殖与呼吸综合征病毒(NADC 30-like PRRSV)Nsp2基因的核苷酸序列,设计了1对用于扩增3种不同毒株的RT-PCR引物,建立了HP-PRRSV、C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV 等3种毒株RT-PCR鉴别诊断的方法,该方法可扩增出1072 bp (C-PRRSV),985 bp(HP-PRRSV)与682 bp(NADC 30-likePRRSV)的特异性片段,而对猪瘟病毒,伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型检测均为阴性.敏感性试验结果表明,对HP-PRRSV,C-PRRSV、NADC 30-like PRRSV的最低核酸检出量分别为385,269,402 pg,对来自临床的39份组织样品进行检测,检测阳性率为51％.该方法可用于3种不同PRRSV毒株临床快速检测与流行病学调查.【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2018(041)006【总页数】6页(P98-103)【关键词】猪繁殖与呼吸综合征病毒;高致病性;经典型;NADC 30-like;鉴别【正文语种】中文【中图分类】S852.65猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)，又称猪蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的一种以猪繁殖障碍和呼吸系统疾病为主要症状的病毒性传染病[1]，该传染病能够造成母猪流产、仔猪呼吸障碍等临床症状，具有较高的死亡率，同时还可引起免疫抑制，继发感染及其它疾病免疫失败等[2-3]。
蓝耳病检测判断标准是指根据猪的临床症状、病理变化、病原学检测和血清学检测等方法来确定猪是否感染了蓝耳病病毒的标准。
蓝耳病是一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的急性或慢性传染病，主要表现为猪的生殖障碍和呼吸系统症状，严重影响猪的生长和繁殖。
蓝耳病检测判断标准主要有以下几种：
临床症状：蓝耳病的临床症状主要包括发热、食欲减退、呼吸困难、咳嗽、气喘、粘液性鼻涕、皮肤出现紫红色斑点或坏死、耳朵、眼睑、口唇、蹄部等部位出现青紫色或蓝色、乳房肿胀、乳汁减少或停止、流产、死胎、弱仔、死亡等。
病理变化：蓝耳病的病理变化主要包括肺部出现弥漫性或局灶性的肺间质性肺炎、肺水肿、肺出血、肺气肿、胸腔积液、心包积液、心肌炎、淋巴结肿大、脾脏肿大、肝脏肿大、肾脏肿大、胎盘出血、胎儿发育不良等。
病原学检测：蓝耳病的病原学检测主要是通过分离和鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒来确诊蓝耳病。
常用的方法有病毒分离培养、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫荧光法（IFA）、免疫印迹法（WB）、原位杂交法（ISH）等。
血清学检测：蓝耳病的血清学检测主要是通过检测猪血清中的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体来判断猪是否感染了蓝耳病病毒。
常用的方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接荧光抗体试验（IFA）、中和试验（NT）等。
不同的方法有不同的判断标准，一般以S/P值或Ct值来表示检测结果的阳性或阴性。
