分枝杆菌噬菌体在结核病诊断、耐药筛选中的应用研究
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措施 ， 估计 ２０ ００年 一 ００年间， ２２ 全球范围内将有 ｌ Ｏ 亿人新感染结核分枝杆菌 （ ｙｏａｔｉ ｂｒ ｌ Ｍ ｃ ｃｒ ｍ ｔ ｅ ｕ ． ｂ ｅｕ ｕ ｃｏ
）３５亿人死 于结 核病 。结 核病 的全球 传播 由于 ，．
耐药结核分枝杆菌株特别 是耐多药结核分枝杆菌
（ 至少 同 时耐 异 烟 肼 和 利福 平 ） 的广 泛存 在 而 变 得 更 加 复杂 … 。我 国 ２０ ０ ５年 发 病人 数 为 １５３０ 死 ２９８ ， 亡人数为 ６１， ７３ 发病 人数 和死 亡人 数居 于各 种 传染 病 之首 ， 病 率 和 死 亡 率 较 ２０ 发 ０４年 分 别 增 加 了 ２ ．３ 和 ３５０ ％ 。２０ 我 国第 四次结 核 病 ９０ ％ ６ ．４ ００年 流 行病 学调查 资料 显示 ， 结核 病耐药 问题 突 出 ， 总耐 药 率 ２ ．％ ， 多药 结 核病 （ ｕｔ ｍｇｒｓｔ ｃ ． ７８ 耐 Ｍ ｌｄ ｉａ ｅｔ ｉ ｅｓｎ ｕ ｂｒｕｏｉ， ＲＴ ） 生率 １．％ Ｃ 。我 国结 核病 ｅ ｌ ｓＭＤ —Ｓ 发 ｅ ｓ ０７ ３ ｝ 防治 工作 的形 势非常 严 峻。结 核分枝杆 菌 的诊 断 和
尽管结核病（ ｕｅ ｕ ｓ ，Ｓ 是一种可控制和 Ｔ ｂｒ ｌ ｉ Ｔ ） ｃｏｓ 可治愈的疾病 ， 但它是在 １９ ９ ３年被 ＷＨ Ｏ宣布为全 球 紧急状 态 的唯一 传染病 。如果 不强 化结 核病控制
１ 噬菌体 生物 扩增 法在 结核 病 诊 断 和 耐药 测 试 中
的应用
Ｄ ｖｄ等研究 了 氯 苯 吩 嗪 、 菌 素 、 福 平 、 ａｉ 黏 利 链 霉素 、 氨苯砜 、 异烟肼 和 乙胺 丁醇 能抑 制 噬 菌体 Ｄ ９ ２ 的增殖 ， 在结 核分枝 杆 菌 菌 体 内 的噬 菌 体则 不 受 影 响 。１９ ９７年 Ｗｉｏ ｌ ｎ等开 发 了 Ｐ ａ ｓ ｈＢ法 ， 立 了一 建 个快 速检 测结 核分 枝 杆 菌 和药 物 敏 感 度 的技 术 平 台ｃ 。Ｐａ ５ ｈＢ法 的基本 原理是 ， 的结核 分 枝杆 菌 可 ３ 活 以保 护菌 体 内的噬 菌体 免 受 噬 菌体 杀 灭 剂 的影 响。
先将结核分枝杆菌与噬菌体共同孵育 ， 噬菌体将 使 Ｄ Ａ注入结 核分枝 杆菌体 内 ， 用 噬菌 体 杀灭 剂 杀 Ｎ 再
灭菌体 外 的噬菌体 ， 在 菌 体 内 的噬 菌 体则 不 受 影 而 响 ， 在菌体 内利 用结 核 分 枝 杆 菌 的代 谢 酶 系组 装 可 子代 噬菌体 ， 最终 裂解 结 核 分 枝杆 菌 并 释 放 子代 噬 菌体 至周 围 ， 开始 新 的增 殖周 期 ， 后在快 生 长耻垢 最 分枝 杆菌 （ ｙｏａｔｉｍ ｓｍ ｍ ｔ ） Ｍ ｃｂｃ ｒ ｅ ｇ ａｉ 上培 养 噬 菌 体 。 ｅｕ ｓ 如果 样本 中含有 活 的结 核 分 枝 杆 菌 ， 菌 体 可在 其 噬 体 内完成 增殖 周期 形 成清 晰 的噬 菌斑 ； 本 中不 含 样 有结核 分枝杆 菌 ， 菌体 不 能 完成 一 个 完 整 的增 殖 噬 周期 ， 不形成 噬菌 斑 。在 作耐药 性测 试实 验 中 ， 若用 抗结 核药物 预先处 理结 核分枝 杆菌 ， 敏感 菌被 杀灭 ， 噬 菌体不增 殖 ， 形成 噬菌斑 ； 不 耐药 菌则 不受 药物 的 影 响依然存 活 ， 噬菌 体 可在 其 体 内完 成增 殖 周 期 形 成 清晰 的噬菌 斑 。应 用 于 Ｐ ａ ｈＢ法 最 多 的 噬菌 体 是 Ｄ ９ 噬菌体 Ｄ ９具 有广 谱 的宿 主既 包括 结 核 分枝 ２。 ２ 杆菌 和耻垢 分枝杆 菌 ， 以在快 分枝 杆 菌 如 耻垢 分 可 枝杆 菌上过 夜培 养形 成 噬 菌斑 ， Ｐ ａ 在 ｈＢ方 法 中 ， 耻 垢 分枝杆菌 可 以作为慢 分枝 杆菌 例如 结核 分枝杆 菌
耐药性的筛选是有效治疗的前提 ， 方法有传统培养 法、 噬菌 体 生 物 扩 增 法 （ ｈｇ ｍｐｉｅ ｉｏｉ ｌ Ｐ ａｅａ ｌ ｄｂ ｌ ｃ ｌ ｉ ｆ ｏ ｇ ａｙ ａｓ ， ｈＢ 、 Ｎ ｓ ｙ Ｐａ ） Ｄ Ａ测序法 、 ａ 聚合酶链 反应一 单链 构 象 多 态性 （ Ｃ ．Ｓ Ｐ 、 时定量 Ｐ Ｒ、 形探 针 试 Ｐ ＲＳＣ ） 实 Ｃ 线 验 、 Ａ Ｔ Ｃ ＭＧ ｒ Ｍｙｏ ａｔ ｉｍ ｇｏ ｔ ｉｄ ａ ｒ Ｂ ＣＥ Ｉ ｒ（ ｃｂ ｃ ｒ ｒ ｈ ｎ ｉ ｔ ｅｕ ｗ ｃｏ ｔ ｅＭ Ｉ， ｕ ， ＧＴ 分枝杆菌生长指示管）６ ｂ ９０全 自动快速 分枝 杆菌 检 测 系 统 等 。Ｐ ａ ｈＢ是 一 种 经 济 、 速 、 快 易
温 占波 综述 ； 劲松 审校 李
（ 军事医学科学院微生物流行病研究所 病原微生物生物安全 国家重点实验 室， 北京
１０７ ） ００ １
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
摘 要： 随着耐药结核分枝杆菌的传播 ， 结核病的防治面临巨大挑 战， 核分枝杆菌的快速诊断和耐药性筛选 和新 结 型治疗药 物的研发是结核病 防治 的关键 。噬茵体生物扩 增法是一 种经济 、 速、 操作且不 需要特殊 仪器的表 型 快 易
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生物 免疫 进展 ２ ０ ０ ８年第 ３ ６卷第 ２期
Ｐｏ ｃｏｉ ｕ ｏ Ｎ ｖ２０ ． ｏ．６Ｎ ． ｒｇｉ Ｍｉ ｂ ｌｍｍ ｎ ｌ ｏ．０ ８ Ｖ １３ ｏ２ ｎ ｒ ｏＩ
分 枝 杆菌 噬菌 体 在结 核病 诊 断 、 药筛 选 中的应用 研究 耐
实验技术 ， 最近几年发展很快。本 文综述 了分枝杆菌噬茵体在结 核病 的诊断 、 耐药筛选 中应用的最新进展 。
关键词 ： 噬茵体生物扩增法 ； 耐药筛选 ； 核分枝杆菌 ； 结 诊断 中图分类号 ：３ ８ ９ Ｒ ７．１ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号：０ ５５７ （０ ８ ０ ． ００ ０ １０ － ３ ２ ０ ）２ ０６ ． ６ ６
