结核分枝杆菌耐药机制的研究进展

结核分枝杆菌耐药机制和检测方法的研究进展宋婧;车南颖【摘要】本文综述了结核分枝杆菌(MTB)的耐药机制和检测方法.耐药机制分为细胞壁渗透性降低及外排泵作用的固有性耐药机制和靶基因突变的获得性耐药机制.随着分子生物学技术的发展,药物作用的靶基因突变被认为是MTB耐药的主要机制.耐药的检测方法主要为表型药敏检测和分子药敏检测.表型检测方法为金标准,但检测周期较长,而基因突变检测可以在几个小时内完成,在结核病的诊断中有更好的应用前景.本文对MTB的耐药机制和检测方法进行综述,以期为开发快速分子诊断工具和抗结核新药的研发提供参考或借鉴.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2018(015)029【总页数】6页(P29-34)【关键词】结核分枝杆菌;耐药;检测方法【作者】宋婧;车南颖【作者单位】首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所病理科耐药结核病研究北京市重点实验室,北京101149;首都医科大学附属北京胸科医院北京市结核病胸部肿瘤研究所病理科耐药结核病研究北京市重点实验室,北京101149【正文语种】中文【中图分类】R378.91结核病（tuberculosis，TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染所致的慢性传染病。

尽管近年来TB的防治取得了进展，但其仍然是全球十大死因之一。

根据2017年WHO最新报告，2016年全球估计有1040万TB 新发病例[1]。

中国TB新发病例在90万左右，新发耐药TB患者约5.8万人，且大部分患者未被发现或未接受治疗，我国TB的形势依然严峻，而MTB的耐药是治疗TB亟待解决的难题之一。

目前部分阐明的MTB的耐药机制分为固有性耐药机制和获得性耐药机制，且药物作用的靶基因突变的获得性分子耐药机制是MTB耐药的主要机制[2]。

MTB耐药性的检测方法分为表型药敏试验和耐药基因突变检测两种方法。

本文对MTB耐药机制和检测方法进行了综述与展望。

结核分枝杆菌耐药机制摘要：日趋升高的结核病患病率，以及耐药菌株的增多和扩散，使结核病成为危害全球民众健康的公共卫生问题。

结核杆菌可以侵害人体各个器官，主要损害肺脏，引起肺结核病。

在单一传染病导致人类死亡的名单中，结核病致死率排名第二。

近年来，结核病在大多数国家中出现流行回升的趋势，每年约有900万例新发患者和200万例死亡患者。

为了给该病临床诊断治疗提供理论参考，本文概述了结核分枝杆菌的最新检测方法及其耐药机制。

关键词：结核病；分枝杆菌；耐药机制结核病是一个严重的全球性疾病，随着艾滋病病毒及耐药结核菌的出现及播散成为结核病控制的又一个威胁。

虽然我们有结核疫苗及抗结核药物，但控制结核病仍是一件很棘手的事情。

多重耐药结核菌的不断出现给结核病的冶疗带来了很大的困难，所以必须重视这一问题的研究。

一、结核分枝杆菌耐药机制研究现状结核分枝杆菌又称结核杆菌，其可以引起结核病这一慢性传染病。

据世界卫生组织相关部门统计，全球约有20亿人被ＭＴＢ感染，现有结核病患者约2000万人，每年感染ＭＴＢ的新增病例约900万例，死亡病例约为200万例。

自耐多药结核病（ＭＤＲ－ＴＢ）或广泛耐药结核病出现后，全球公共卫生安全受到严重威胁，全球结核病控制也受到严重影响。

世界卫生组织相关报告统计，仅2014年全球有约900万人患有肺结核（不包括隐性感染的病例），其中死亡病例150万例。

尽管有证据显示，肺结核的患病率有缓慢下降趋势，但是多耐药性ＭＴＢ的出现和蔓延仍是全球疾病控制的一大挑战。

据世界卫生组织资料显示，我国耐药性结核病病例约占世界两成，结核病仍是困扰中国疾病控制的三大传染病之一，其防治工作面临严峻考验。

早期就结核病的治疗仅需要２个月集中治疗便可取得良好效果，临床常用药物为异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇片。

随着ＭＴＢ耐药性的逐渐形成，结核病的集中治疗期被延长至４个月，临床使用药物也只有ＩＮＨ和ＲＦＰ两种。

随着ＭＴＢ耐药性的增强，大多数一线药物的治疗效果均不理想，相关研究表明，仅2014年就有约3.5％新感染肺结核患者和20.5％接受过肺结核病治疗的患者出现了耐多药结核病。

结核分枝杆菌耐药的分子机制及耐药基因检测方法的研究进展孙冰梅;车志宏
【期刊名称】《山西医药杂志》
【年(卷),期】2005(034)004
【摘要】结核分枝杆菌(MTB)简称结核杆菌，于1882年由德国科学家Koch发现并证明是结核病的病原体。

随着抗结核药物的不断发展和卫生状况的改善，结核病的发病率和病死率曾大幅度下降，但20世纪80年代后，结核病在世界范围内又死灰复燃。

结核病疫情呈现全球性明显回升趋势的主要原因之一是耐药菌株的产生和播散，尤其是耐多药菌株的出现。

结核杆菌的高耐药问题已成为新世纪结核病控制的三大难题之一。

【总页数】3页(P301-303)
【作者】孙冰梅;车志宏
【作者单位】青岛大学医学院第二附属医院,266042;青岛大学医学院附属医院【正文语种】中文
【中图分类】R378.911
【相关文献】
1.结核分枝杆菌耐药主要分子机制及检测方法研究进展 [J], 王英全;岳昌武
2.细菌耐药性产生的分子机制与耐药基因的快速检测方法 [J], 崔晓文;张秀英
3.2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究 [J], 薛建昌;梁冰锋;吴海峰;郑浩;孙志平;任哲
4.2种结核分枝杆菌耐药基因突变检测方法诊断利福平耐药结核病的评估研究 [J],
薛建昌;梁冰锋;吴海峰;郑浩;孙志平;任哲
5.结核分枝杆菌耐药分子机制及检测方法的研究进展 [J], 曾涛;朱中元
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•综述•结核分枝杆菌对乙硫异烟胺/丙硫异烟胺耐药的机制及其增敏剂研究进展宋艳华高孟秋李琦耐药结核病（MDR-TB）是全球结核病控制的重大挑战。

2019全球结核病播报数据显示，全球估计约有48.4万例为新发的耐利福平结核病（rifampicin-resistant tuberculosis,RR-TB）,其中有78%为MDR-TBo中国是MDR-TB高负担国家之一，和印度、俄罗斯3个国家占了全球1/2的MDR/RR-TB患者曲。

对一线核心抗结核杀菌药品异烟脐（isoniazid,INH）x利福平（rifampicin, RFP）耐药的MDR-TB,需要二线抗结核药物治疗，WHO指南推荐4~5种抗结核药品组成MDR-TB 治疗方案⑷。

二线抗结核药物因为不良反应多、用药不便、疗效欠佳等局限性，往往导致不规律治疗，增加产生广泛耐药结核病（XDR-TB）的风险。

研发新型有效的抗结核药物是治愈MQK-TB的关键，目前只有贝达唾咻和德拉马尼两种药品用于临床。

乙硫异烟胺（ethionamide,ETH）/丙硫异烟胺（prothionamide,PTH）是在1950年发现的抗结核药物，但是因为这两种药品的有效浓度和药物不良反应（消化道反应、肝损伤等）相关，限制了应用，一直为二线抗结核药品；ETH/PTH对一线药物耐药的MTB仍可敏感，所以随着对INH、RFP耐药的MDR-TB的增多，ETH/PTH主要用于MDR-TB 的治疗，目前仍是WHO相关指南推荐为RR-TB/ MDR-TB治疗的药品之一口】。

近年来，ETH/PTH 增敏剂的研究也取得了明显进展。

笔者就两种药品的应用史、流行病学、作用机制、耐药及与INH 交叉耐药机制、增敏剂研究等方面进行综述。

1ETH/PTH简介ETH和PTH是在20世纪50年代后期合成，都是异烟酸的衍生物。

两种药品在体外和体内都表现出了抗MTB活性，作用机制和INH相似，都是抑制分枝菌酸的合成，但抗菌活性较INH活性低，ETH对MTB野生株的最低抑菌浓度（MIC）为0.5-2mg/L；PTH对MTB的MIC值在0.125~ 1.0mg/L。

浅谈细菌多重耐药性的研究进展革兰阴性杆菌耐药性产生的主要机制为：细菌可以自身产生灭活酶，改变抑菌药物的结合位置的结构，并且降低细菌外膜的通透性，使得进入细菌内的抗菌药物被排出等等。

结核分枝杆菌中并没有质粒存在，只存在含有遗传基因的染色体。

inhA、gyrA、rrS、KatG、gyrB等基因突变会导致PZA、INH、乙硫异烟胺以及RFP耐药性主要原因。

染色体基因变异会导致耐药性产生。

细菌多重耐药性产生的防治对策包括以下几种：严格控制抗菌药物的使用、建立并完善耐药监控机制、改善抗生素的治疗措施以及积极研发新的抗耐药抗菌药物等等。

抗生素的长期作用，可以杀死大量的细菌，但是部分变异的优势菌会生存下来，这是细菌产生耐药性的主要原因。

该文在文献回顾的基础上，分析常见多重耐药菌的耐药机制，并综述了防治对策。

标签：细菌多重耐药性；研究进展细菌耐药性之所以产生，主要是因为细菌基因发生突变。

抗生素的长期作用，可以杀死大量的细菌，但是部分变异的优势菌会生存下来，这是细菌产生耐药性的主要原因。

患者使用一种抗生素，会导致细菌产生对这种抗生素甚至与之相似的抗生素的耐药性，并且一种细菌可以通过基因重组、整合子、质粒的交换等多种机制对抗生素产生耐药，细菌还可以通过遗传、多菌种播散等方式将耐药性基因传递、扩散，从而增加了耐药细菌的数量。

随着免疫抑制剂、抗生素等药物的广泛使用，细菌可以出现多种耐药性，并且其性质不断增强，趋于形成多重耐药、高度耐药的形势。

因此，细菌多重耐药性的研究对降低多重耐药性的发生率、提高药物的治疗效果具有至关重要的作用。

1 常见多重耐药菌耐药机制分析1.1 常见革兰阴性杆菌耐药机制革兰阴性杆菌耐药性产生的主要机制为：细菌可以自身产生灭活酶，改变抑菌药物的结合位置的结构，并且降低细菌外膜的通透性，使得进入细菌内的抗菌药物被排出等等。

①ECO：其所产生的ESBLs以及整合子等机制在一定程度上对于多重耐药性的产生具有促进作用。

中国人兽共患病学报C h i n e s e J o u r n a l o f Z o o n o s e s㊀２０２０,３６(３)D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００２－２６９４．２０２０．００．００３ 综㊀述结核分枝杆菌异烟肼和丙硫异烟胺耐药及其交叉耐药相关机制研究进展王晓英１,张汇征２,罗㊀明２,曾婉婷３重庆医药高等专科学校人才引进项目(N o ．y g z ２０１９３０４);中国科学院新发和烈性传染病病原学与生物安全重点实验室开放研究基金资助项目(N o ．２０１７S P C A S ００４)通讯作者:罗㊀明,E m a i l :l u o m i n g １９７６＠a l i y u n ．c o m ;O R C I D :００００Ｇ０００２Ｇ３４８３Ｇ１１３１作者单位:１．重庆医药高等专科学校,重庆㊀４０１３３１;２．重庆市公共卫生医疗救治中心,重庆㊀４０００３６;３．陆军特色医学中心大坪医院,重庆㊀４０００４２摘㊀要:结核病是一种严重危害人类健康的呼吸道传染病.据世界卫生组织估算,２０１８年全球耐多药结核病患者数为４８．４万.异烟肼是重要的一线抗结核药物,但其目前耐药情况比较严重.丙硫异烟胺,作为异烟肼耐药患者的替代治疗药物,与异烟肼存在部分的交叉耐药性.本文综述了异烟肼和丙硫异烟胺交叉耐药的相关机制,为异烟肼耐药及耐多药结核病患者的治疗提供科学依据.关键词:结核分枝杆菌;异烟肼;丙硫异烟胺;耐药中图分类号:R ３７８．９１㊀㊀㊀文献标识码:A ㊀㊀㊀文章编号:１００２－２６９４(２０２０)０３－０２３４－０６P r o g r e s s o n t h em o l e c u l a rm e c h a n i s mo f i n d e pe n d e n t r e s i s t a n c e a n d c r o s s Ｇr e s i s t a n c e t o i s o n i a z i da n d p r o t h i o n a m i d e i n M yc o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s WA N G X i a o Ｇy i n g １,Z H A N G H u i Ｇz h e n g ２,L U O M i n g ２,Z E N G W a n Ｇt i n g３(１．C h o n g q i n g M e d i c a l a n dP h a r m a c e u t i c a lC o l l e g e ,C h o n g q i n g ４０１３３１,C h i n a ;２．C h o n g q i n g P u b l i cH e a l t h M e d i c a lC e n t e r ,C h o n g q i n g ４０００３６,C h i n a ;３．P e o p l e sL i b e r a t i o nA r m y S p e c i a lM e d i c a lC e n t e r ,D a p i n g H o s p i t a l ,C h o n g q i n g ４０００４２,C h i n a )A b s t r a c t :T u b e r c u l o s i s i s a r e s p i r a t o r y i n f e c t i o u s d i s e a s e t h a t t h r e a t t o p u b l i c h e a l t hw o r l d w i d e ．A c c o r d i n gt o t h e s t a t i s t i c s o fW o r l dH e a l t hO r g a n i z a t i o n ,t h e a m o u n t o fm u l t i Ｇd r u g r e s i s t a n c e t u b e r c u l o s i s p a t i e n t sw a s a b o u t ４８４０００i n t h ew o r l d d u r i n g２０１８．I s o n i a z i d i s a n i m p o r t a n t f i r s t l i n ea n t i Ｇt u b e r c u l o s i sd r u g w i t hs e r i o u s l y d r u g re s i s t a n c ea t p r e s e n t ．P r o t h i o n a m i d e i sa n i m p o r t a n t s e c o n d Ｇl i n e a n t i Ｇt u b e r c u l o s i s d r u g ,w h i c hc a nb eu s e d a s r e p l a c e m e n t d r u gf o r i s o n i a z i d r e s i s t a n t p a t i e n t s ．H o w e v e r ,p r o t h i o n a m i d e i s p a r t i a l l y c r o s s r e s i s t a n c e t o i s o n i a z i d ,w h i c hw i l lw e a k e n t h e r e p l a c e a b l e r o l e o f p r o t h i o n a m i d e ．T h i s p a pe r r e Ｇv i e w e d t h e i n d e p e n d e n t r e s i s t a n c ea n dc r o s s Ｇr e s i s t a n c er e l a t e d g e n e sof M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s t oi s o n i a z i da n d p r o t h i o Ｇn a m i d e ,w i t ha ne m p h a s i so nc r o s s Ｇr e s i s t a n t r e l a t e dg e n e s ．A t p r e s e n t ,th e g e n e m u t a ti o n i n v o l v e d i n i s o n i a z i da n d p r o t h i o Ｇn a m i d e c r o s s Ｇr e s i s t a n c e a r em a i n l y i n h A ,n d h a n d f a b G １Ｇi n h A ,w i t h t w o o f t h e m (n d h a n d f a b G １Ｇi n h A )a r e s t i l l c o n t r o v e r Ｇs i a l ．T h e a i mo f t h i s r e v i e w i s t o p r o v i d e r e f e r e n c e f o r t h e t r e a t m e n t o f i s o n i a z i d r e s i s t a n c e a n dm u l t i Ｇd r u g r e s i s t a n c e t u b e r c u l o Ｇs i s p a t i e n t s ．K e yw o r d s :M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ;i s o n i a z i d ;p r o t h i o n a m i d e ;d r u g r e s i s t a n c e S u p p o r t e db y t h e I n t r o d u c t i o no fT a l e n tP r o g r a m o fC h o n g q i n g M e d i c a l a n dP h a r m a c e u t i c a lC o l l e g e (N o ．y g z ２０１９３０４);t h e O p e nR e s e a r c h F u n d P r o g r a m o f W u h a n N a t i o n a lB i o ＧS a f e t y L e v e l４L a b o f C h i n e s e A c a d e m y ofS c i e n c e s (N o ．２０１７S P C A S ００４)．C o r r e s p o n d i n g a u t h o r :L u o M i n g ,E m a i l :l u o m i n g１９７６＠a l i yu n ．c o m ㊀㊀结核病是一种由结核分枝杆菌(M yc o b a c t e r i Ｇu m T u b e r c u l o s i s ,MT B )感染引起的慢性传染病,是由单一致病菌引起的死亡人数最多的疾病[１].我国结核病疫情严重,仅次于印度,居世界第２位.据世界卫生组织(W o r l dH e a l t h y O r gn i z a t i o n ,WHO )估４３２算,２０１８年全球新发结核病患者数为１０００万,耐多药(M u l t iＧD r u g R e s i s t a n t,M D R)结核病患者数为４８．４万[２].M D R患者化疗疗程约为２０个月或更长,但治疗效果却不理想,治疗成功率仅为５４％,病死率达１６％.２０１０年全国第５次结核病流行病学抽样调查报告显示,我国结核病患者对异烟肼(i s oＧn i a z i d,I N H)的总耐药率最高,达２８．６％,对二线抗结核药物丙硫异烟胺(p r o t h i o n a m i d e,P t o)的总耐药率达１２．９％,总耐药顺位分别排第１位和第４位;其中,初治肺结核患者I N H与P t o的耐药率分别为第１位和第４位,复治肺结核患者I N H与P t o的耐药率分别为第１位和第５位[３].由此可见,我国I N H与P t o的耐药情况已经非常严峻.快速准确的预测结核病患者对抗结核药物的耐药性,有助于患者及时有效的治疗.结核病耐药的快速检测依赖于对耐药机制的研究,因此,充分了解I N H和P t o 交叉耐药的相关机制,有助于对这两种药物耐药性的精确检测和其临床上的合理使用.１㊀异烟肼及丙硫异烟胺作用机理１．１㊀异烟肼作用机理㊀I N H是目前使用的重要一线抗结核药物,是一种需要经过氧化反应才能变得有活性的前体药物.I N H作用于MT B细胞壁分枝菌酸的合成,它通过抑制参与MT B细胞壁生物合成的烯酰基载体蛋白还原酶i n h A而达到杀菌的功效[４].I NH易渗入吞噬细胞,对细胞内外的MT B 均有杀菌作用,故称 全效杀菌药 [５].１．２㊀丙硫异烟胺作用机理㊀MT B对I N H耐药后,临床上通常用P t o来代替I N H组成治疗方案[５]. P t o属于口服抑菌二线抗结核药物,也是一种前体药物,被广泛用于耐多药结核病㊁敏感菌导致的结核性脑膜炎及粟粒性结核等多种结核病的治疗中[６Ｇ７],也适用于非结核分枝杆菌病的治疗[５].P t o与乙硫异烟胺(E t h i o n a m i d e,E t o)均属硫胺类药物,为异烟酸的衍生物,可通过抑制M T B分枝菌酸的合成并扰乱M T B细胞膜的合成而发挥抗结核功效[５,７Ｇ８].２㊀异烟肼和丙硫异烟胺交叉耐药机制P t o与E t o显示出高度的交叉耐药性,因此, E t o耐药相关基因突变成为研究P t o耐药机制的主要依据.P t o㊁E t o与I N H的作用相似,存在部分的交叉耐药性[９].２．１㊀i n h A基因㊀I N H和P t o均属于前体药物,需要不同的酶进行活化后才能发挥作用,但两种药物有共同的作用靶点:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(n i c oＧt i n a m i d e a d e n i n e d i n u c l e o t i d e,N A D),N A D H依赖的烯酰基乙酰载体蛋白还原酶,涉及到分枝菌酸合成的i n h A[１０Ｇ１１].i n h A基因编码分枝杆菌脂肪酸合成酶I I系统中的一种烯酰基乙酰载体蛋白还原酶,激活的I N H共价结合到N A D上形成加合物而附着到i n h A上[１２].因此,i n h A基因或/和i n h A启动子区域基因突变可导致i n h A基因编码产物的过表达或者修饰,降低了i n h A酶与N A D H的亲和力,从而造成I N H与P t o的交叉耐药[１３Ｇ１５].研究表明,在I N H与P t o同时耐药的菌株中,３３．５％的菌株存在I N H与P t o交叉耐药的情况,由i n h A和/或其启动子区域的单一突变或者两者同时突变导致;交叉耐药菌株中,最常见的突变为i n h A启动子区域ＧC１５T突变,占２６％.但在I N H耐药P t o敏感或I N H敏感P t o耐药菌株中,存在３例i n h A启动子ＧC１５T突变的情况,可能与其他调整因子的代偿突变有关[１６].目前关于I N H与P t o交叉耐药的研究较少,多是关于I N H与E t o交叉耐药情况的研究.一项关于I N H与E t o交叉耐药的研究表明,９４％的M D R 菌株在i n h A启动子区域存在突变,突变类型为ＧC１５T[１７].而另一项关于I N H与E t o交叉耐药的研究表明,３３．３％E t o耐药的M D R菌株中存在i n h A启动子区域或i n h A基因突变,在６６．６％的交叉耐药菌株中可见i n h A启动子区域ＧC１５T突变[１８].而南非东开普省的研究表明,i n h A启动子区域ＧC１７T突变在X D RＧT B菌株中是主要的突变类型,达到８３％[１９].i n h A基因编码区域突变比较少见,目前研究表明,在I N H和E t o交叉耐药菌株中,i n h A基因编码区域氨基酸突变位点仅有I２１T, S９４A和I９５P[２０Ｇ２１].但i n h A基因突变及其启动子区域突变导致的交叉耐药在不同地区的差异很大,从１２％到１００％不等[２０,２２Ｇ２６].２．２㊀n d h基因㊀n d h基因编码N A D H脱氢酶,其在耻垢分枝杆菌的研究中首次被认为与I N H的耐药机制有关.研究表明,n d h基因编码的N A D H 脱氢酶对于耻垢分枝杆菌的存活至关重要,而N A D H脱氢酶通过将N A D H氧化成N A D＋而提高I N H的活性[２７].随后的研究表明,n d h基因突变只出现在I N H耐药的MT B菌株中,说明n d h基因突变与MT B对I N H耐药有关.n d h基因突变降低了N A D H氧化成N A D＋的速率,从而导致了N A D H的累积以及N A D的缺乏[２８],增加的N A D H水平可能竞争性的抑制了I N HＧN A D加合物附着到i n h A酶的活性位点[２９Ｇ３０],从而破坏了酶５３２３期王晓英,等:结核分枝杆菌异烟肼和丙硫异烟胺耐药及其交叉耐药相关机制研究进展活性的调整并可能引起I N H和P t o的交叉耐药[３１].也可能因为N A D H是过氧化物酶A h p C F 和K a t G的底物,N A D H浓度的增加可能竞争性抑制K a t G对I N H的过氧化作用[２７].M i e s e l等人的研究也表明增加的N A D H浓度阻止了I N H和E t o 的作用从而导致高水平耐药[２７].在耻垢分枝杆菌和牛分枝杆菌中已经发现n d h 基因突变可导致I N H与E t o交叉耐药[３２].来自新加坡和巴西的研究也表明n d h突变(R１３C㊁T１１０A 和R２６８H)发生在８％~１０％的异烟肼耐药菌株中,但并不存在于I N H敏感的菌株中[２８,３３].但其他相关研究表明,n d h突变在I N H耐药和敏感菌株中均存在[２０].最新的关于结核分枝杆菌I NH和P t o交叉耐药的研究中,仅在n d h基因中新发现了一个非同义突变(G３３９A),且其仅与I N H耐药相关[１６].因此,目前n d h突变与I N H和P t o交叉耐药的相关性并不是很明确,还需要进一步的研究来证实.２．３㊀f a b G１Ｇi n h A基因㊀f a b G１基因(又称为m aＧb A)g６０９a突变首先被发现与I N H耐药相关[３４].f a b G１基因沉默突变导致I N H和E T H耐药.f a b G１基因g６０９a突变及与它临近的区域扮演了i n h A基因启动子的作用,增强i n h A的转录,导致i n h A的过表达,降低了i n h A酶与N A D H的亲和力,从而导致I N H和E T H的交叉耐药.f a b G１基因g６０９a突变也可能通过增加转录的稳定性和改变R N a s e在m a b AＧi n h A m R N A中的裂解位点来影响i n h A转录的水平,最终导致I N H和E T H的交叉耐药[３５].f a b G１基因突变已被用于预测MT B对I N H耐药的检测中[３６],但目前MT B对P t o耐药及I N H与P t o交叉耐药相关研究中并未对f a b G１基因突变情况进行检测[１６,３７].因此,f a b G１基因突变是否与I NH和P t o的交叉耐药相关以及其相关的耐药机制,还需要进一步的实验验证.３㊀异烟肼耐药的其它机制除与P t o交叉耐药的相关机制外,导致MT B 对I N H耐药的主要分子机制主要与k a t G㊁a h p C㊁k a s A和o x y R等基因突变有关.k a t G基因突变导致过氧化氢酶Ｇ过氧化物酶的形成受阻,不能活化I N H为具有杀菌作用的异烟酸,从而导致MT B对I N H耐药[３８Ｇ３９].最常见的K a t G突变为S３１５T突变,９４％的I N H耐药菌株与S３１５T突变相关[４０].各个地区I N H耐药菌株中因k a t G基因突变而导致的耐药比率差异很大,从３１．８％~９６．９％不等[４１].a h p C基因在I NH耐药中起着重要的作用.由a hＧp C基因编码的A h p C酶(a l k y lh y d r o p e r o x i d a s e)引起过氧化氢底物的减少,a h p C基因启动子区域的突变能够增强a h p C蛋白的表达,从而代偿性抵抗K a t G/C P活性的丢失[４２].o x y R是一种氧化应激调节蛋白,控制着编码解毒酶基因触酶Ｇ过氧化物酶(k a t G编码)和烷基氢过氧化物酶(a h p C编码)的表达[４３].２９％的I NH耐药临床株在o x y RＧa h p C 基因间隔区存在突变[４３],o x y RＧa h p C基因间隔区突变,例如ＧG９A和ＧC１５T可分别增加a h p C的表达达９倍和１８倍[４２].但o x y RＧa h p C基因间隔区突变是否与I N H耐药相关目前还存在争议[４４].k a s A 基因编码的K a s A(βＧ酮脂酰基酰载体蛋白合成酶)能促进分枝菌酸的生物合成[２５],但k a s A基因突变在I N H耐药中的作用并不是很清楚[３４,４５Ｇ４６].因此, I N H耐药菌株相关基因(如a h p C㊁k a s A和o x y R)突变的具体位点及其与I N H临床耐药的确切关系还不是很明确,需要进行更深入的研究.４㊀丙硫异烟胺耐药的其它机制除与I N H交叉耐药的机制外,P t o耐药主要与e t h A㊁e t h R和m s h A等基因突变有关.e t h A基因可编码加单氧酶e t h A,P t o经加单氧酶e t h A激活后与N A D＋反应,产生P t oＧN A D加合物,从而抑制i n h A基因及分枝菌酸的合成[４７Ｇ５０].B r o s s i e r等的研究结果表明,４７％的E t o耐药菌株存在e t h A基因突变(F１１０L和A９５T突变)[３１].多项研究表明, e t h A基因的非同义突变和框架突变可导致P t o/ E t o耐药,所占比例从３７％到１００％不等[１５,２５,３７,５１].另外,I s l a m等的研究发现了e t h A基因上２９个新的非同义突变和３个截断突变与P t o的耐药相关[１６].e t h R是T e t R/C a m R家族的一员,可抑制e t h A基因的表达[５２].抑制e t h R基因的功能将导致MT B对P t o的敏感性提高,而e t h R基因突变则会导致P t o耐药[４９].e t h R基因突变(F１１０L和A９５T)与E t o耐药相关,约占E t o耐药菌株的４％[３１].e t h R基因上两个新的非同义突变(R２１６C 和V１５２M)和一个同义突变也被证实与P t o耐药相关[１６].m s h A属于糖基转移酶家族,涉及到MT B 分枝硫醇的生物合成[１１],m s h A基因突变可能与P t o/E t o的激活被破坏有关[１１,１５,３１],但m s h A基因突变与P t o/E t o耐药的相关性并不是很明确,有待进一步的研究.目前,MT B对P t o耐药的相关机制研究较少,多基于对E t o耐药机制的研究,相关基因突变的具体位点及其与临床耐药的相关性仍需要进行更深入的研究.６３２中国人兽共患病学报２０２０,３６(３)５㊀展㊀望随着分子生物学技术的发展,I NH的耐药机制也越来越明确,但目前MT B对P t o耐药相关突变基因以及突变位点的分析仍然非常有限,还存在未知的基因突变.已有研究表明,２０．２％的P t o耐药菌株中未发现已知的基因突变[１６],在未知的耐药基因突变中也有可能存在与I NH交叉耐药相关的机制.另外,MT B因受各种因素的影响,其遗传特点多存在显著的地域差异.目前,我国I N H和P t o耐药情况已经比较严峻,尤其是两者之间存在着交叉耐药的情况.对于I N H和P t o交叉耐药机制的研究也十分有限,需要进行更加深入的研究以探索其作用的新机制.对I N H与P t o交叉耐药机制的研究可为结核病相关耐药基因检测技术的发展提供参考,为耐药结核病的诊断及临床医生的合理用药提供科学依据.利益冲突:无.引用本文格式:王晓英,张汇征,罗明,等．结核分枝杆菌异烟肼和丙硫异烟胺耐药及其交叉耐药相关机制研究进展[J]．中国人兽共患病学报,２０２０,３６(３):２３４Ｇ２３８,２６０．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００２Ｇ２６９４．２０２０．００．００３参考文献:[１]L a w n S D,Z u m l a A I．T u b e r c u l o s i s[J]．L a n c e 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o s i s:g e n e s,m u t a t i o n s,a n d c a u s a l i t i e s[J]．M i c r o b i o l S p e c t r,２０１４,２:４３１Ｇ４５３．D O I:１０．１１２８/m i c r o b i o l s p e c．M GM２Ｇ００１４Ｇ２０１３[１２]L a r s e n MH,V i l c hèz eC,K r e m e rL,e t a l．O v e r e x p r e s s i o no f i n h A,b u t n o t k a s A,c o n f e r s r e s i s t a n c e t o i s o n i a z i da n de t h i oＧn a m i d e i n M y c o b a c t e r i u ms m e g m a t i s,M．b o v i sB C Ga n d M．T u b e r c u l o s i s[J]．M o lM i c r o b i o l,２００２,２:４５３Ｇ４６６．D O I:１０．１０４６/j．１３６５Ｇ２９５８．２００２．０３１６２．x[１３]M o r l o c k G P,M e t c h o c k B,S i k e sD,e ta l．e t h A,i n h A,a n d k a t G l o c i o f e t h i o n a m i d e r e s i s t a n t c l i n i c a l M y c o b a c t e r i u mt u b e rＧc u l o s i s i s o l a t e s[J]．A n t i m i c r o b A g e n t sC h e m o t h e r,２００３,４７(１２):３７９９Ｇ３８０５．D O I:１０．１１２８/a a c．４７．１２．３７９９Ｇ３８０５．２００３[１４]V i l c hèz eC,W a n g F,A r a iM,e t a l．T r a n s f e r o f a p o i n tm u t aＧt i o n i n M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s i n h A r e s o l v e s t h e t a r g e t o f i s o n i a z i d[J]．N a t M e d,２００６,１２(９):１０２７Ｇ１０２９．D O I:１０．１０３８/n m１４６６[１５]R u e d aJ,R e a l p e T,M e j i a G I,e ta l．G e n o t y p i ca n a l y s i so f g e n e s a s s o c i a t e d w i t hi n d e p e n d e n tr e s i s t a n c ea n dc r o s sＧr e s i s tＧa n c e t o i s o n i a z i da n de t h i o n a m i d e i n M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l oＧs i s c l i n i c a l i s o l a t e s[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,２０１５,５９:７８０５Ｇ７８１０．D O I:１０．１１２８/A A C．０１０２８Ｇ１５[１６]I s l a m MM,T a nY,H a m e e d HMA,e t a l．D e t e c t i o no fn o v e l m u t a t i o n s a s s o c i a t e dw i t h i n d e p e n d e n t r e s i s t a n c ea n dc r o s sＧr eＧs i s t a n c e t oi s o n i a z i da n d p r o t h i o n a m i d e i n M y c o b a c t e r i u mt uＧb e r c u l o s i s c l i n i c a l i s o l a t e s[J]．C l i n M i c r o b i o l I n f e c t,２０１９,２５(８):１０４１．e１Ｇ１０４１．e７．D O I:１０．１０１６/j．c m i．２０１８．１２．００８[１７]M a c h a d oD,P e r d i g a o J,R a m o s J,e t a l．H i g hＧl e v e l r e s i s t a n c e t o i s o n i a z i d a n de t h i o n a m i d e i nm u l t i d r u gＧr e s i s t a n t M y c o b a c t eＧr i u mt u b e r c u l o s i s o f t h eL i s b o a f a m i l y i sa s s o c i a t e dw i t h i n h A d o u b l em u t a t i o n s[J]．JA n t i m i c r o bC h e m o t h e r,２０１３,６８(８):１７２８Ｇ３２．D O I:１０．１０９３/j a c/d k t０９０[１８]R u e d aJ,R e a l p eT,M e j i a G I,e ta l．G e n o t y p i c A n a l y s i so fG e n e sA s s o c i a t e d w i t hI n d e p e n d e n tR e s i s t a n c ea n dC r o s sＧR eＧs i s t a n c e t o I s o n i a z i d a n dE t h i o n a m i d e i n M y c o b a c t e r i u mt u b e rＧc u l o s i s C l i n i c a l I s o l a t e s[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r a p y,２０１５,５９(１２):７８０５Ｇ７８１０．D O I:１０．１１２８/A A C．０１０２８Ｇ１５[１９]M u l l e r B,S t r e i c h e rE M,H o e kK G,e t a l．i n h A p r o m o t e rm uＧt a t i o n s:a g a t e w a y t o e x t e n s i v e l y d r u gＧr e s i s t a n t t u b e r c u l o s i s i n S o u t hA f r i c a[J]．I n t JT u b e r cL u n g D i s,２０１１,１５:３４４Ｇ３５１[２０]H a z b o n MH,B r i m a c o m b e M,B o b a d i l l aＧd e lＧV a l l e M,e ta l．P o p u l a t i o n g e n e t i c s s t u d y o f i s o n i a z i d r e s i s t a n c em u t a t i o n s a n d e v o l u t i o n o f m u l t i d r u gＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,２００６,５０(８):２６４０Ｇ２６４９．D O I:１０．１１２８/A A C．００１１２Ｇ０６[２１]R i s t o w M,M o h l i g M,R i f a i M,e ta l．N e wi s o n i a z i d/e t h i oＧ７３２３期王晓英,等:结核分枝杆菌异烟肼和丙硫异烟胺耐药及其交叉耐药相关机制研究进展n a m i d er e s i s t a n c e g e n em u t a t i o na n ds c r e e n i n g f o rm u l t i d r u gＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s s t r a i n s[J]．L a n c e t,１９９５,３４６:５０２Ｇ５０３．D O I:１０．１０１６/s０１４０Ｇ６７３６(９５)９１３５１Ｇ３[２２]陈杨,陈玲,张泓,等．耐异烟肼结核分枝杆菌及其k a t G与i n h A 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e f e c t s c o n f e r i s o n i a z i d r e s i s t a n c e a n d c o n d i t i o nＧa l l e t h a l i t y i n M y c o b a c t e r i u m s m e g m a t i s[J]．J B a c t e r i o l,１９９８,１８０(９):２４５９Ｇ２４６７[２８]L e eA S,T e oA S,W o n g S Y．N o v e lm u t a t i o n s i nn d h i n i s o n i aＧz i dＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s i s o l a t e s[J]．A n t i m iＧc r o bA g e n t s C h e m o t h e r,２００１,４５:２１５７Ｇ２１５９．D O I:１０．１１２８/A A C．４５．７．２１５７Ｇ２１５９．２００１[２９]Q u e m a r dA,S a c c h e t t i n i J C,D e s s e nA,e t a l．E n z y m a t i c c h a rＧa c t e r i z a t i o no f t h e t a r g e t f o r i s o n i a z i d i n M y c o b a c t e r i u mt u b e rＧc u l o s i s[J]．B i o c h e m i s t r y,１９９５,３４:８２３５Ｇ８２４１．D O I:１０．１０２１/b i０００２６a００４[３０]R o z w a r s k i D A,G r a n tG A,B a r t o nD H,e t a l．M o d i f i c a t i o no f t h eN A D Ho f t h e i s o n i a z i d t a r g e t(i n h A)f r o m M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．S c i e n c e,１９９８,２７９:９８Ｇ１０２．D O I:１０．１１２６/ s c i e n c e．２７９．５３４７．９８[３１]B r o s s i e rF,V e z i r i sN,T r u f f o tＧP e r n o tC,e t a l．M o l e c u l a r i nＧv e s t i g a t i o n o fr e s i s t a n c et ot h e a n t i t u b e r c u l o u s d r u g e t h i oＧn a m i d e i n m u l t i d r u g r e s i s t a n t c l i n i c a l i s o l a t e so f M y c o b a c t e r iＧu mt u b e r c u l o s i s[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,２０１１,５５:３５５Ｇ３６０．D O I:１０．１１２８/A A C．０１０３０Ｇ１０[３２]V i l c hèz eC,W e i s b r o d T R,C h e n B,e ta l．A l t e r e d N A D H/ N A D＋r a t i om e d i a t e s c o r e s i s t a n c e t o i s o n i a z i d a n d e t h i o n a m i d e i nm y c o b a c t e r i a[J]．A n t i m i c r o bA g e n t s C h e m o t h e r,２００５,４９:７０８Ｇ７２０．D O I:１０．１１２８/A A C．４９．２．７０８Ｇ７２０．２００５[３３]C a r d o s oR F,C a r d o s oMA,L e i t eC Q,e t a l．C h a r a c t e r i z a t i o n o f n d h g e n eo f i s o n i a z i dr e s i s t a n t a n ds u s c e p t i b l e M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s f r o m B r a z i l[J]．M e mI n s tO s w a l d oC r u z,２００７,１０２:５９Ｇ６１．D O I:１０．１５９０/s００７４Ｇ０２７６２００７０００１００００９[３４]R a m a s w a m y S V,R e i c h R,D o uS J,e ta l．S i n g l en u c l e o t i d e p o l y m o r p h i s m s i n g e n e sa s s o c i a t e dw i t h i s o n i a z i dr e s i s t a n c e i n M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t hＧe r,２００３,４７:１２４１Ｇ１２５０．D O I:１０．１１２８/a a c．４７．４．１２４１Ｇ１２５０．２００３[３５]A n d oH,M i y o s h iＧA k i y a m aT,W a t a n a b e S,e t a l．As i l e n tm uＧt a t i o n i n m a b Ac o n f e r s i s o n i a z i dr e s i s t a n c eo n M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．M o lM i c r o b i o l,２０１４,９１(３):５３８Ｇ５４７．D O I:１０．１１１１/mm i．１２４７６[３６]W a l k e rT M,K o h lT A,O m a rS V,e ta l．W h o l eＧg e n o m es eＧq u e n c i n g f o r p r e d i c t i o n o f M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s d r u g s u s c e p t i b i l i t y a n dr e s i s t a n c e:ar e t r o s p e c t i v ec o h o r t s t u d y[J]．L a n c e t I n f e c t D i s,２０１５,１５:１１９３Ｇ１２０２．D O I:１０．１０１６/S１４７３Ｇ３０９９(１５)０００６２Ｇ６[３７]T a nY,S uB,Z h e n g H,e ta l．M o l e c u l a rC h a r a c t e r i z a t i o no f P r o t h i o n a m i d eＧR e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s I s o l a t e s i nS o u t h e r nC h i n a[J]．F r o n t M i c r o b i o l,２０１７,８:２３５８．D O I:１０．３３８９/f m i c b．２０１７．０２３５８[３８]H e y m B,Z h a n g Y,P o u l e tS,e ta l．C h a r a c t e r i z a t i o no ft h e k a t G g e n e e n c o d i n g a c a t a l a s eＧp e r o x i d a s e r e q u i r e d f o r t h e i s o n iＧa z i d s u s c e p t i b i l i t y o f M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s[J]．JB a c t e r iＧo l,１９９３,１７５(１３):４２５５Ｇ４２５９．D O I:１０．１１２８/j b．１７５．１３．４２５５Ｇ４２５９．１９９３[３９]C a m p b e l l P J,M o r l o c kG P,S i k e sR D,e t a l．M o l e c u l a rd e t e cＧt i o no fm u t a t i o n s a s s o c i a t e dw i t h f i r s tＧa n d s e c o n dＧl i n e d r u g r eＧs i s t a n c e c o m p a r e dw i t h c o n v e n t i o n a l d r u g s u s c e p t i b i l i t y t e s t i n g o f M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s[J]．A n t i m i c r o b A g e n t s C h eＧm o t h e r,２０１１,５５(５):２０３２Ｇ２０４１．D O I:１０．１１２８/A A C．０１５５０Ｇ１０[４０]M o k r o u s o v I,N a r v s k a y aO,O t t e nT,e t a l．H i g h p r e v a l e n c e o fK a t GS e r３１５T h r s u b s t i t u t i o na m o n g i s o n i a z i dＧr e s i s t a n t M yＧc o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s c l i n i c a li s o l a t e sf r o m n o r t h w e s t e r nR u s s i a,１９９６t o２００１[J]．A n t i m i c r o b A g e n t s C h e m o t h e r,２００２,４６:１４１７Ｇ１４２４．D O I:１０．１１２８/a a c．４６．５．１４１７Ｇ１４２４．２００２[４１]B o l l e l aV R,N a m b u r e t eE I,F e l i c i a n oC S,e ta l．D e t e c t i o no f k a t G a n d i n h A m u t a t i o n st o g u i d e i s o n i a z i da n de t h i o n a m i d e u s e f o r d r u gＧr e s i s t a n t t u b e r c u l o s i s[J]．I n t JT u b e r cL u n g D i s,２０１６,２０(８):１０９９Ｇ１１０４．D O I:１０．５５８８/i j t l d．１５．０８６４[４２]S h e r m a nD R,M d l u l iK,H i c k e y M J,e t a l．C o m p e n s a t o r y a hＧp C g e n e e x p r e s s i o n i n i s o n i a z i dＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u mt u b e rＧc u l o s i s[J]．S c i e n c e,１９９６,２７２:１６４１Ｇ１６４３．D O I:１０．１１２６/s c iＧe n c e．２７２．５２６８．１６４１[４３]S r e e v a t s a nS,P a nX,Z h a n g Y,e t a l．A n a l y s i s o f t h e o x y RＧa hＧp Cr e g i o n i n i s o n i a z i dＧr e s i s t a n t a n dＧs u s c e p t i b l e M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s c o m p l e x o r g a n i s m sr e c o v e r e df r o m d i s e a s e d h uＧm a n s a n d a n i m a l s i nd i v e r s e l o c a l i t i e s[J]．A n i t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,１９９７,４１(３):６００Ｇ６０６[４４]B a k e rL V,B r o w nT J,M a x w e l lO,e t a l．M o l e c u l a r a n a l y s i s o f i s o n i a z i dＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s i s o l a t e s f r o mE n g l a n da n d W a l e s r e v e a l s t h e p h y l o g e n e t i c s i g n i f i c a n c eo f t h e a h p CＧ４６A p o l y m o r p h i s m[J]．A n t i m i c r o bA g e n t sC h e m o t h e r,２００５,４９:１４５５Ｇ１４６４．D O I:１０．１１２８/A A C．４９．４．１４５５Ｇ１４６４．２００５[４５]L e eA S,L i mI H,T a n g L L,e t a l．C o n t r i b u t i o n o f k a s Aa n a l yＧs i s t od e t e c t i o no f i s o n i a z i dＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l oＧs i s i nS i n g a p o r e[J]．A n t i m i c r o b A g e n t sC h e m o t h e r,１９９９,４３:２０８７Ｇ２０８９．(下转第２６０页)８３２中国人兽共患病学报２０２０,３６(３)兽医寄生虫病,２００６,１４(１):４７Ｇ５０．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７４Ｇ６４２２．２００６．０１．０２３[８]敖敦格日勒,格日勒图,朱玉涛,等．内蒙古和新疆两地草原革蜱源性马驽巴贝斯虫病原D N A检测[J]．中国兽医杂志,２０１５,５l (５):２１Ｇ２３．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．０５２９Ｇ６００５．２０１５．０５．００７[９]Z h o uX,L i S G,C h e nS B,e t a l．C oＧi n f e c t i o n sw i t hB a b e s i am iＧc r o t i a nd P l a s m o d i u m p a r a s i te s a l o n g t h eC h i n aＧM y a n m a rb o rＧd e r[J]．I n f e c tD i sP o v e r t y,２０１３,２(１):２４．D O I:１０．１１８６/２０４９Ｇ９９５７Ｇ２Ｇ２４[１０]W uX B,N aR H,W e i S S,e t a l．D i s t r i b u t i o no f t i c kＧb o r n e d i sＧe a s e s i nC h i n a[J]．P a r a s i t e V e c t o r,２０１３,６:１１９．D O I:１０．１１８６/１７５６Ｇ３３０５Ｇ６Ｇ１１９[１１]J u n gＧY e o nK i m,S h i nＧH y e o n g C h o,H y u nＧN a J o o,e t a l．F i r s t c a s e o f h u m a nb a b e s i o s i s i nK o r e a:d e t e c t i o na n dc h a r a c t e r i z aＧt i o n o f a n o v e l t y p e o f b a b e s i a s p．(K O１)s i m i l a r t o o v i n e b a b eＧs i a[J]．J C l i n i c a lM i c r o b i o l,２００７,４５(６):２０８４Ｇ２０８７．D O I:１０．１１２８/J C M．０１３３４Ｇ０６[１２]W e i Q,T s u j iM,Z a m o t oA,e t a l．H u m a n b a b e s i o s i s i n J a p a n: i s o l a t i o no f B a b e s i am i c r o t iＧl i k e p a r a s i t e s f r o ma n a s y m p t o m a tＧi c t r a n s f u s i o nd o n o ra n df r o m ar o d e n tf r o m a na r e a w h e r e b a b e s i o s i s i s e n d e m i c[J]．J C l i nM i c r o b i o l,２００１,３９(６):２１７８Ｇ２１８３．D O I:１０．１１２８/J C M．３９．６．２１７８Ｇ２１８３．２００１[１３]B a r r y A t k i n s o n,J o h nC h a m b e r l a i n,C h r i s t o p h e rH L o g u e,e t a l．D e v e l o p m e n t o f a r e a lＧt i m eR TＧP C Ra s s a y f o r t h e d e t e c t i o n o fc r i m e a nＧC o n g oh e m o r r h a g i cf e v e rv i r u s[J]．V e c t o rＧb o r n e Z o o n o tD i s,２０１２,３９(６):７８６Ｇ７９３．D O I:１０．１０８９/v b z．２０１１．０７７０[１４]J uJ i a n g,T e i kＧc h y e c h a n,J o s e p hJT e m e n a k,e t a l．D e v e l o pＧm e n t o f a q u a n t i t a t i v e r e a lＧt i m e P C R p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o na s s a y s p e c i f i cf o ro r i e n t i at s u g a m u s h i[J]．A m J T r o p M e d．H y g,２００４,７０(４):３５１Ｇ３５６．D O I:１０．１１３４/S００３６０２４４０７１２００４７[１５]W i k s w oM E１,H uR,D a s c hG A,e t a l．D e t e c t i o n a n d i d e n t i f iＧc a t i o no f s p o t t e d f e v e r g r o u p r i c k e t t s i a e i nD e r m a c e n t o r s p e c i e s f r o ms o u t h e r nC a l i f o r n i a[J]．J M e dE n t o m o l,２００８,４５(３):５０９Ｇ５１６．D O I:１０．１６０３/００２２Ｇ２５８５(２００８)４５[５０９:d a i o s f]２．０．c o;２[１６]D r a z e n o v i c hN,F o l e y J,B r o w nR N．U s eo f r e a lＧt i m e q u a n t i t aＧt i v eP C Rt a r g e t i n g t h e m s p２p r o t e i n g e n et oi d e n t i f y c r y p t i cA n a p l a s m a p h a g o c y t o p h i l u mi n f e c t i o n s i nw i l d l i f e a n d d o m e s t i c a n i m a l s[J]．V e c t o rＧb o r n e Z o o n o t D i s,２００６,６(１):８３Ｇ９０．D O I:１０．１０８９/v b z．２００６．６．８３[１７]A m a n d aDL o f t i s,R o b e r t F M a s s u n g,M i c h a e l LL e v i n．Q u a nＧt i t a t i v e R e a lＧT i m e P C R A s s a y f o r D e t e c t i o n o f E h r l i c h i a c h a f f e e n s i s[J]．J C l i n M i c r o b i o l,２００３,４１(８):３８７０Ｇ３８７２．D O I:１０．１１２８/j c m．４１．８．３８７０Ｇ３８７２．２００３[１８]F uY G,L i uZ J,G u a n G Q．D e v e l o p m e n to fR e a lＧT i m e p o l yＧm e r a s e c h a i n r e a c t i o n f o r d e t e c t i o no f b o r r e l i ab u r g d o r f e r i s e nＧs u l a t o i nC h i n a[J]．V e c t o rB o r n eZ o o n o tD i s,２０１２,１２(５):３４１Ｇ３４５．D O I:１０．１０８９/v b z．２０１１．０６９２[１９]吴涛,郭喜玲,彭海燕,等．羊及其体表蜱中S F T S V的分离培养与全基因序列分析[J]．江苏预防医学,２０１３,２４(６):７Ｇ１０．D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００６Ｇ９０７０．２０１３．０６．００３[２０]R u d e n k o N,G o l o v c h e n k o M．T i c kＧb o r n ee n c e p h a l i t i sv i r u sＧs p e c i f i cR TＧP C R ar a p i dt e s tf o rd e t e c t i o n o ft h e p a t h o g e n w i t h o u t v i r a lR N A p u r i f i c a t i o n[J]．A c t aV i r o l,２００４,４８(３):１６７．D O I:１０．１０９７/０１．a i d s．０００００９６８９３．７３２０９．０e收稿日期:２０１９Ｇ０８Ｇ１９㊀编辑:张智芳(上接第２３８页)[４６]Z h a n g M,Y u e J,Y a n g Y P,e t a l．D e t e c t i o n o fm u t a t i o n s a s s oＧc i a t e dw i t h i s o n i a z i d r e s i s t a n c e i n M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s iＧs o l a t e s f r o mC h i n a[J]．J C l i nM i c r o b i o l,２００５,４３:５４７７Ｇ５４８２．D O I:１０．１１２８/J C M．４３．１１．５４７７Ｇ５４８２．２００５[４７]F r a a i j eMW,K a m e r b e e kNM,H e i d e k a m p A J,e t a l．T h e p r oＧd r u g a c t i v a t o r E t a A f r o m M y c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s i s aB a e y e rＧV i l l i g e rm o n o o x y g e n a s e[J]．JB i o lC h e m,２００４,２７９(５):３３５４Ｇ３３６０．D O I:１０．１０７４/j b c．M３０７７７０２００[４８]V a n n e l l iT A,D y k m a nA,O r t i zD eM o n t e l l a n oP R,e t a l．T h e a n t i t u b e r c u l o s i s d r u g e t h i o n a m i d e i s a c t i v a t e db y a f l a v o p r o t e i nm o n o o x y g e n a s e[J]．J B i o lC h e m,２００２,２７７(１５):１２８２４Ｇ１２８２９．D O I:１０．１０７４/j b c．M１１０７５１２００[４９]B a u l a r dA R,B e t t s J C,E n g o h a n gＧN d o n g J,e t a l．A c t i v a t i o n o f t h e p r oＧd r u g e t h i o n a m i d e i s r e g u l a t e d i nm y c o b a c t e r i a[J]．J B iＧo lC h e m,２０００,２７５(３６):２８３２６Ｇ２８３３１．D O I:１０．１０７４/j b c．M００３７４４２００[５０]D e b a r b e rA E,M d l u l iK,B o s m a n M,e t a l．E t h i o n a m i d ea c t iＧv a t i o na n d s e n s i t i v i t y i nm u l t i d r u gＧr e s i s t a n t M y c o b a c t e r i u mt uＧb e r c u l o s i s[J]．P r o cN a t lA c a dS c iU S A,２０００,９７(１７):９６７７Ｇ９６８２．D O I:１０．１０７３/p n a s．９７．１７．９６７７[５１]C a s a l iN,N i k o l a y e v s k 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结核分枝杆菌对异烟肼耐药的分子机制研究进展杨寿慧;刘惟优【摘要】结核病是由结核分枝杆菌引起的一种威胁全球健康的传染性疾病.异烟肼是结核病治疗应用最广泛的药物之一.前体异烟肼通过过氧化氢-过氧化物酶(KatG)激活,活化的异烟肼可抑制靶蛋白InhA.异烟肼耐药的分子机制涉及多个基因,其中katG基因突变是异烟肼耐药主要的原因,另外还有inhA、kasA、oxyR基因等.外排泵系统在异烟肼耐药方面也起着重要作用.了解异烟肼抗结核分枝杆菌作用机制及结核分枝杆菌耐异烟肼的分子机制将有助于异烟肼耐药结核病的诊治.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2018(031)010【总页数】5页(P1086-1090)【关键词】结核分枝杆菌;异烟肼;耐药机制【作者】杨寿慧;刘惟优【作者单位】341000 赣州,赣南医学院第一附属医院呼吸科;341000 赣州,赣南医学院第一附属医院呼吸科【正文语种】中文【中图分类】R5160 引言结核病是由结核分枝杆菌引起的长期以来威胁人类健康的传染性疾病。

据世界卫生组织估计2015年全世界约有1040万新发结核病例，我国新发肺结核人数仅次于印度和印度尼西亚位高居全球第3位[1]。

作为一种典型的持留菌，体内潜伏感染的结核分枝杆菌难以清除并且有很强的耐药突变潜力[2]。

目前结核病治疗上应用最广泛的一线抗结核药物是异胭肼，但随着异烟肼耐药结核菌的增加，使得患者不得不更换昂贵且副作用大的二线抗结核药物。

结核病治疗方案的选择常常需要依据药敏结果，但传统药敏培养时间一般长达4～8周。

值得关注的是近年来分子生物学在结核菌耐药检测方面取得一些重要的进展，为结核分枝杆菌耐药检测提供了新思路。

1 异烟肼及其对结核分枝杆菌的作用机制结核分枝杆菌的细胞壁由长链分枝菌酸、高支链的阿拉伯多糖、肽聚糖组成的交叉连接网3个主要的组成成分。

异烟肼是作用于结核分枝杆菌细胞壁分枝菌酸合成的窄谱抗生素。

从1952年开始异烟肼作为抗结核药物应用于临床，其结构仅一个吡啶环连接一个酰肼基。

结核分枝杆菌的耐药性及检测方法结核病是一种由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）引起的慢性传染病，主要累及肺部，但也可侵犯其他器官。

然而，近年来出现了结核分枝杆菌对抗生素的耐药性问题，给结核病的防治带来了巨大挑战。

本文将就结核分枝杆菌的耐药性机制以及常用的检测方法进行论述。

一、耐药性机制1.多重耐药（MDR）多重耐药是指结核分枝杆菌对两种最主要的抗结核药物——异烟肼和利福平同时产生耐药现象。

这种耐药形式使得传统治疗手段无法有效控制感染，并且增加了传播风险。

2.延迟耐药（XDR）延迟耐药是在MDR基础上，又产生对氟喹诺酮类等二线抗结核药物的耐药性。

这使得治疗选择更加有限，且通常需要使用更昂贵和毒副作用更大的抗结核药物。

3.全耐药（TDR）全耐药是指对所有一线和二线抗结核药物都产生耐药现象，这种情况下仅能依靠其他的药物才能进行治疗。

然而，这些替代治疗方案费用昂贵且可行性有限。

二、检测方法1.传统的抗生素敏感性测试传统的抗生素敏感性试验使用培养分枝杆菌，并将其接种于含有抗生素的琼脂平板上。

通过观察细菌在不同浓度抗生素下的生长情况来判断其对该抗生素是否具有耐药性。

尽管这种方法简单易行，但其确诊时间较长，且容易出现误判。

2.分子检测方法随着分子生物学技术的进步，利用PCR技术可以更快速地检测结核分枝杆菌的耐药基因突变。

这种方法通过检测与耐药性相关基因序列的存在与否来确定细菌对特定抗生素是否具有耐药性。

由于PCR技术高灵敏度和高特异性，它已成为常用的结核分枝杆菌耐药性检测方法之一。

3.流式细胞术流式细胞术利用荧光标记的结核分枝杆菌单个细胞对特定抗生素的反应进行测定。

通过测量细胞内荧光信号的变化来判断其对抗生素是否产生了耐药性。

这种方法具有高通量和快速的优势，但需要对样本进行前期处理以获得单个菌落。

4.质谱法质谱法利用MALDI-TOF质谱仪检测结核菌代谢产物图谱与数据库匹配，从而快速确定结核分枝杆菌的耐药类型。

结核分枝杆菌的耐药性机制与新药研发结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起结核病的致病菌，全球范围内广泛存在且具有高传染性。

然而，近年来结核分枝杆菌耐药性的不断增强给结核病的控制带来了巨大挑战。

本文将探讨结核分枝杆菌的耐药性机制以及新药研发的进展。

一、结核分枝杆菌的耐药性机制1. 抗结核药物的作用机制结核病的治疗通常采用四种主要抗结核药物：异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇。

这些药物通过不同的机制抑制结核分枝杆菌的生长和繁殖，包括抑制酶的活性、破坏细胞壁和抑制蛋白质合成等。

2. 耐药突变的产生结核分枝杆菌的耐药性主要通过两种机制产生：突变和水平基因转移。

突变是指结核分枝杆菌染色体中的基因发生突变，导致耐药性的产生。

这些突变通常与抗生素靶标相关基因的突变有关，使得抗结核药物无法有效作用。

3. 耐药基因的表达调控结核分枝杆菌通过表达和调控一系列耐药基因来保证自身对抗结核药物的生存能力。

其中，转录因子是重要的调节因子，能够调控耐药基因的表达。

这些转录因子的过度表达或突变都可能导致结核分枝杆菌对抗药物的耐药性增强。

4. 多重耐药结核菌和极耐药结核菌当结核分枝杆菌对四种主要抗结核药物都出现耐药情况时，称为多重耐药结核菌（MDR-TB）。

当结核分枝杆菌对至少两种抗结核药物还同时对三种或更多的类别抗结核药物耐药时，称为极耐药结核菌（XDR-TB）。

MDR-TB和XDR-TB的治疗更加困难，仅有少数有效的抗结核药物可以使用。

二、新药研发的进展1. 分子靶向药物的研发针对结核分枝杆菌耐药机制的研究已经为新药研发提供了方向。

一些针对结核分枝杆菌特定靶点的分子靶向药物已经进入临床试验，如靶向结合蛋白B的抗结核药物。

2. 新药物的发现和筛选利用高通量筛选技术，科学家们正在努力寻找新的抗结核药物。

通过筛选大量化合物库，发现了一系列潜在的抗结核活性物质，并进行了进一步的优化研究。

3. 联合治疗方案的研究耐药性是结核病复发和传播的主要原因之一，因此联合治疗方案的研究变得尤为重要。