结核分枝杆菌及耐药基因的特征

ＭＴ Ｂ ） 主要 通过 药物结 合位 点 或药 物 活化 基 因 等特 定 基 因组 区域 的 突 变 获得 可 稳 定 遗 传 的耐 药 基 因
测 发现 利福平 耐药 菌株 中 ｒ ｐ ｏ Ｂ耐药 异 质性 达 ３ ４
（ ２ ２ ／ ６ ４ ） ， 异 烟 肼 耐 药 菌 中 异 质 性 耐 药 更 高 达
耐 药 向 全 部 耐 药 转 变 的 中间 过 程 ， 耐 药 性 的 定 义 也 取
素先后产 生了 ４种 不 同的耐药相关 突变 （ 编码 ３ （ ） ｓ核
糖体 蛋 白的基 因 ｒ 儿 的Ｋ ８ ７ Ｒ和 Ｋ ４ ２ Ｒ突变 ， １ ６ Ｓ核 糖体 Ｒ Ｎ Ａ ｒ ｒ ｓ Ａ ５ １ ３ Ｃ和 Ａ １ ４ ｏ （ ） Ｇ 突变 ） ， 但 在 治 疗 后 期
６ ５ ． ７ （ ２ ３ ／ ３ ５ ） 。此 外 ， 二 线 抗 结 核 药 物 的 耐 药 菌
型 。例 如 ， 利 福 平 耐 药 性是 由 于 Ｒ ＮＡ 聚 合 酶 ｐ亚
基编 码基 因（ ｒ ｐ ｏ Ｂ ） 耐 药 决 定 区 的点 突变 引起 ］ ， 异 烟肼 耐药性 主要 由过 氧 化 氢一 过氧 化 物 酶 编 码 基 因 （ ｋ ａ ｔ Ｇ） 的 突 变 导 致 ］ 。通 过 检 测 这 些 基 因 的 耐 药 相 关 突变 ， 可 以预 测 ＭＴ Ｂ 的 耐 药 情 况 。 在 检 测 临 床 分 离 培 养 的样 本 时 ， 经 常 会 发 现 敏 感 菌 株 和 耐 药 菌 株 共 存 的现 象 ， 即异 质性 耐 药 ｌ ＿ ５ ］ 。异 质 性 耐 药 因 为
影 响 药敏结果 以及治疗 方案 的正 确判 断和评 估而 逐 渐受 到人们 的重 视 。本 文将 对 目前 结核 分枝 杆菌 异 质性 耐药 的产 生及其对 临床 的影 响进行 综述 。

中图 分 类 号 ： Ｒ ９ ７ ８ ． ３
文献标志码 ： Ｂ
文章编号 ： １ ０ ０ ２ － ２ ６ ６ Ｘ （ ２ ０ １ ３ ） ４ ４ — ０ ０ ４ ２ ￣３
近年 来 ， 由于氟 喹诺 酮类 药物 的滥用 ， 结核 分枝 杆 菌对其 的耐 药程 度 越 来越 严 重 ， 严 重 影 响 氟 喹诺 酮类 药 物 在 耐 药 结 核 病 中 的治 疗 效 果 … 。结 核 分 枝 杆菌耐 氟 喹诺 酮类 药 物 主要 是 ｇ ｙ ｒ Ａ基 因 突变 所 致， 且 多位于 氟喹诺 酮 耐药 决定 区 （ Ｑ Ｒ Ｄ Ｒ） ， 其 中尤 以９ ０～ ９ ４位 点 的 突变 最 为多 见 。本 研究 对 青 岛地
有 限公 司 ） ； Ｙ Ｘ Ｊ ． ２离 心 机 （ 湘 仪 离 心机 仪 器 有 限公 司） ； Ｈ ６ ． １ 微 型 电泳槽 （ 上海精 益有 机玻璃 制 品仪器
厂） ； 凝 胶成 像系统 （ Ｇ ｅ ｎ ｅ Ｇ ｅ ｎ ｉ ｕ ｓ 公司） ； 移 液器 （ 范 围１ ０ ０—１ ０ ０ ０ ｍ Ｌ ， ２ ０～ ２ ０ ０ ｍ Ｌ， ０ ． ５～１ ０ ｍ Ｌ； 力 Ⅱ 拿 大
山东 医药 ２ ０ １ ３年第 ５ ３卷第 ４ ４期
青 岛地 区左 氧氟 沙 星 耐 药结 核分 枝 杆 菌 ｇ ｙ ｒ Ａ基 因 突 变 特 征 分 析
邹 悦， 王 军， 苏海 涛
（ 青岛市胸科 医院， 山东青 岛２ ６ ６ ０ ４ ３ ）
摘要 ： 目的
分析青岛地区左氧氟沙星耐药结核分 枝杆菌 ｇ ｙ ｒ Ａ基 因突 变特征 。方 法
院确诊 的肺 结核 患者 痰 标 本 ， 其 中左 氧氟 沙 星 敏 感
菌株 １ ４株 ， 耐 药菌株 ４ ６株 。根据 《 结核 病诊 断实 验

结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关基因研究进展曹志敏;陈玲【摘要】Pyrazinamide (PZA) is an important anti-tuberculosis drug especially for treating multidrug-resistant tuberculo sis (MDR-TB).In recent years,the incidence of Mycobacterium tuberculosis' resistance to pyrazinamide has increased.At present,the mechanism of drug resistance has not been clearly elucidated.In this review,the association between gene mutation and pyrazinamide resistance in Mycobacterium tuberculosis will be summarized.%吡嗪酰胺是治疗结核病的重要抗结核药物之一,特别是用于耐多药结核病的治疗.近年来结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药逐渐增多,其耐药机制尚未明确.本文针对结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药及其与基因变异之间的关系研究进展进行综述,以供研究者参考.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)010【总页数】4页(P923-926)【关键词】结核分枝杆菌;吡嗪酰胺;基因变异;耐药机制【作者】曹志敏;陈玲【作者单位】遵义医学院刚属医院呼吸二科,遵义 563000;遵义医学院刚属医院呼吸二科,遵义 563000【正文语种】中文【中图分类】R378吡嗪酰胺 (pyrazinamide，PZA)，又名异烟酰胺，为烟酰胺结构类似物，具有独特的灭菌活性，酸性条件下可杀灭处于半休眠期结核菌和持留菌，而其他抗结核药物却难以做到[1-2]。

一、生物学特性 (一) 形态与染色 典型形态为细长略带弯曲的杆菌，有时可 见分枝状；因衰老和抗结核药物的作用可出现 多种形态，如球状、串珠状或丝状。革兰染色 难以着色，但用5%石炭酸复红加温染色后，不 易被3%盐酸酒精脱色。若再用美蓝复染，则分 枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景呈兰色。齐尼染色法是常用的一种抗酸性染色法。该菌在 体内可形成L型，与细菌的耐药性或复发有关
（1）原发感染
结核分枝杆菌 侵入肺泡 被肺泡中 吞噬细胞吞噬 在吞噬细胞内繁殖 导致 巨噬细胞裂解释放出的细菌 释放出大量细 菌在肺泡内引起渗出性炎症即为原发性灶。细菌 随淋巴管到达肺门淋巴结，引起淋巴结肿大称原 发综合征 感染3-6周，机体产生特异性细胞免疫，同 时也产生迟发超敏反应
机体免疫力低下时，原发感染灶恶化，结核 分枝杆菌经气管淋巴道或血流播散，形成全身性 粟粒性结核 。 当机体抵抗力强时，使感染灶形成结核结节。 淋巴结病灶逐渐纤维化和钙化，不治自愈。但病 灶内常有一定量的细菌长期潜伏，不断刺激机体 产生免疫。也可成为以后内源性感染的来源
2 肺外感染 结核杆菌可经血液循环引起肺外感染， 如脑、肾、结核，痰被咽入可引起肠结核、 结核性腹膜炎等。一般认为血中播散的大 多是L细菌
(三) 免疫性 人类对结核分枝杆菌的感染率甚高，但发病率 不高。这表明人体对结核分枝杆菌有相当强的 免疫力。 （1）结核的免疫为有菌免疫或称传染性免疫 。这种免疫系指结核分枝杆菌(或BCG) 进入机 体后使机体对细菌再次入侵有免疫力；而当细 菌或其成分从体内彻底消失后机体的免疫力也 随之消失。遗传因素决定对结核病的易感染性 ， HLA-Bw15为易感个体。
（三）抵抗力 结核分枝杆菌因细胞壁含有大量脂类，故对 理化因素抵抗力较强。耐干燥，在干燥的痰内 可存活6-8个月。含有结核分枝杆菌痰液的尘埃 经8-10d仍有传染性。此菌对化学消毒剂的抵抗 力也较一般细菌强，在3%HCl或6%H2SO4中不被杀 死。因此常用于处理有杂菌污染的检材，以便 进行分离培养。对湿热敏感，60℃30min可杀死 细菌；在70%-75%乙醇中数分钟即被杀死 ，对 紫外线敏感

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展摘要】本文就报道的结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因katG、inhA、ahpC、kasA、ndh、OxyR-ahpC、mabA-inhA、furA-katG、fabG-inhA、efpA、ini (A,B,C)及其突变位点进行综述。

【关键词】结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的慢性传染病。

随着耐药结核病，尤其是耐多药和广泛耐药结核病的出现，给结核病的防控工作带来了严峻挑战。

异烟肼是治疗结核病主要药物之一，但MTB耐异烟肼率已达17.6%，其耐药机制尚不明确，大多认为与MTB相关基因突变有关[1]。

本文综述目前国内外报道的MTB耐异烟肼相关基因及其常见突变位点，以进一步了解MTB耐异烟肼的发生机制。

1 katG基因异烟肼经MTB katG基因编码的过氧化氢-过氧化物酶活化后产生杀菌作用，katG突变使过氧化氢-过氧化物酶失活，导致MTB对异烟肼耐药。

KatG最常见突变位点是Ser315Thr。

Khadka JB等研究尼泊尔地区107例耐异烟肼菌株中，Ser315Thr及Ser315Ile突变率分别为77.6%及17.1%。

陈玲等研究显示Ser315Thr突变频率为66.7%[2]。

315位点还有Ser→Asn、Ser→Thr、Ser→Arg和Ser→Gly突变形式。

此外，还存在Val230Met、Pro232Gln、Gly237Glu、Gly309Cys、Asp304Glu、Asp357His、Asp357Asn、Arg463Leu、His276Met、Gln295His、Glu454Arg等突变[2-5]。

2 inhA基因inhA基因编码NADH依赖的enoyl-Acp还原酶，该酶催化α-不饱和脂肪酸转化为饱和脂肪酸，产生的长链脂肪酸是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分。

异烟肼与分枝菌酸合成途径中的NADH依赖的enoyl-Acp复合体结合，阻断90%以上长链脂肪酸合成，从而抑制MTB生长。

某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析杨辉;张国良;张明霞;陈心春;陈建波;吴爱武【摘要】目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点.方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析.在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序.结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株.在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB 发生基因突变株的51.2%(21/45).在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41).kasA基因未发现常见突变形式.结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同.%Objective To investigate the characterization of gene mutation in Rifampin and Isoniazid resistant Mycobacterium tu berculosis isolated from Shenzhen. Methods 60 Mycobacterium tuberculosis clinical strains were identified and their drug resistance in phenotype were tested by BACTEC MGIT960 ,rpoB,katG315 ,inhA 15,kasA269 and kasA312 genes were amplified by PCR and the fragments were cloned into T vector andsequenced. Results Among the 60 Mycobacteria tuberculosis clinical strains,45 rifam picin resistant strains and 15 rifampicin susceptible strains;41 isoniazid resistant strains and 19 isoniazid susceptible strains;14 mul tiple drug resistance strains were detected. About 91. l%(41/45) of Mycobacterium tuberculosis isolates in 45 rifampicin drug re sistant strains has mutations in rpoB and there were 12 different mutations,gene locus 531,526,516,53s mutation had a higher fre quency especially gene locus 531 which had 51. 2 % (21/41) of mutational rate in 41 strains with rpoB gnen mutation. Point muta tions at gene locus katG315 includingkatG315(AGC ACC)in 28 isoniazid resistance strains and katG315(AGC AAC) in 1 isoniazid resistance strain,were found in 70. 7%(29/41) of isoniazid resistant strains. 21. 95%(9/41) of Mycobacterium tuberculosis isonia zid resistant strains had inhA 15(C T) mutations, no mutation in kasA was found in the study. Conclusion Ompared with other studies,the mutational gene site of Mycobacterium tuberculosis isolates with drug esistance of rifampicin and isoniazid in Shenzhen were consistant,but the gene mutation frequency in common gene locus of drug esistance were different.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)034【总页数】3页(P3591-3593)【关键词】分枝杆菌,结核;药物耐受性;突变【作者】杨辉;张国良;张明霞;陈心春;陈建波;吴爱武【作者单位】广州医学院医学检验系,510182;广东省深圳市第三人民医院肝病研究所,518112;广东省深圳市第三人民医院肝病研究所,518112;广东省深圳市第三人民医院肝病研究所,518112;广东省深圳市第三人民医院肝病研究所,518112;广东省深圳市第三人民医院肝病研究所,518112;广州医学院第一附属医院检验科,510120【正文语种】中文结核病是严重危害人们身体健康的重大公共卫生问题，根据世界卫生组织（WHO）报告，全球将近1／3的人口曾经或正在感染结核分枝杆菌，每年约900万人发展为活动性结核病，近300万人会发展成为耐多药结核病，并有180万人死于该病。

广州医学院硕士研究生学位论文结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析Detection and evaluation of common drug-resistance gene mutations in Mycobacterium tuberculosis专业名称: 临床检验诊断学研究生: 杨辉导师: 吴爱武教授陈心春教授二0一三年三月·广州目录中文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~1 英文摘要~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~4 英文缩略词~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 7 前言~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~8 第一部分利福平耐药结核分枝杆菌rpoB 基因的检测与分析~~~~~~~~~~~~ 111.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 112.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~163.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~184.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~20 第二部分异烟肼耐药结核分枝杆菌相关耐药基因的检测与分析~~~~~~~~~~~211.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 212.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~273.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~304.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~31 第三部分HRMA技术检测结核分枝杆菌利福平与异烟肼耐药~~~~~~~~~~~~ 321.材料和方法~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 322.结果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~363.讨论~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~424.小结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~44 全文总结~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 45 参考文献~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 46 综述~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~51 附录~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~59 攻读学位期间取得研究成果~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 61 致谢~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~63 学位原创性声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 学术论文知识产权声明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64 关于学术论文使用授权的说明~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~64结核分枝杆菌常见耐药基因突变的检测与分析研究生：杨辉导师：吴爱武教授陈心春教授中文摘要研究背景及目的结核分枝杆菌（结核菌，Mycobacterium tuberculosis，MTB)是引起结核病的病原菌，至今仍然是单一感染因素导致死亡率最多的疾病之一。

抗结核药物耐药性的研究随着人口的不断增长和城市化的迅速发展，传染病也变得越来越严重。

其中，结核病是一种严重的传染病，影响着全球许多国家的健康。

据世界卫生组织的数据显示，结核病每年导致超过100万人死亡，在全球范围内仍然是一个巨大的健康威胁。

抗结核药物是结核病治疗的关键，然而，近年来，结核病药物耐药性的问题日益突出。

据研究，全球每年有50万人被诊断为药物耐药性结核病，患者的治疗难度和治愈率也随之降低。

抗结核药物耐药性的原因有很多，其中最主要的原因是不规范、不恰当的抗结核药物使用。

据研究，如果患者没有遵循抗结核药物使用建议的话，他们患上耐药性结核病的风险将增加约4倍。

再加上全球的结核病患者大多生活在经济不发达国家，治疗经济负担重，因此规范抗结核药物使用是防治结核病、减少结核病药物耐药性的关键。

为了解决结核病耐药性的问题，并帮助开发有效的预防和治疗策略，许多机构和学者进行了大量的研究。

目前，抗结核药物耐药性的研究主要集中在以下三个方面。

首先，对抗结核药物的机制进行研究。

最终导致药物耐药性的原因是具体的药物突变，因此了解药物的作用原理和药物与细菌相互作用的机制是非常重要的。

通过对药物的研究，了解药物与结核框架形式的交互以及药物与治疗目标之间的相互作用，同时也可以针对药物突变进行分析和设计。

这项研究为研发新型的、高效的、药物耐药性低的抗结核药物提供了理论基础。

其次，研究药物耐药性的遗传基础。

结核分枝杆菌是一种不断进化的病原体，因此对药物耐药性的遗传基础的研究非常重要。

研究人员可以从结核病药物耐药性的分子机制、慢病毒进化过程以及传染性和治愈率之间的关系等方面探究耐药基因和普通基因的区别，预测某些变异基因的扩散趋势和决定耐药性。

最后，改善结核病的预防和治疗方法以减少药物耐药性的风险。

这包括提高药物的使用规范、增强公众的健康意识、改善病毒监测和控制的效率等方面。

此外，还需要加强结核病药物研究的全球合作和协调以及发展新型的治疗策略，例如联合疗法、药物早期筛选等。

结核分枝杆菌耐药基因结核病是一种由结核分枝杆菌引起的传染病，它可以影响人体的肺部和其他器官。

结核分枝杆菌耐药基因是指结核分枝杆菌在抗结核药物治疗中产生的耐药性基因，这些基因使得结核病治疗变得更加困难。

结核分枝杆菌耐药基因的发现结核分枝杆菌耐药基因的发现可以追溯到上世纪80年代。

当时，科学家们发现一些结核病患者在接受抗结核药物治疗后仍然没有痊愈。

经过研究，他们发现这些患者身体内的结核分枝杆菌已经产生了耐药性，这是由于结核分枝杆菌耐药基因的存在。

结核分枝杆菌耐药基因的类型结核分枝杆菌耐药基因可以分为两种类型：单点突变和基因重组。

单点突变是指结核分枝杆菌的DNA序列中发生了一个或多个碱基的改变，从而导致抗结核药物无法对其产生作用。

基因重组是指结核分枝杆菌的DNA序列发生了重组，从而产生了新的耐药性基因。

结核分枝杆菌耐药基因的危害结核分枝杆菌耐药基因的存在使得结核病治疗变得更加困难。

传统的抗结核药物对耐药菌株无效，需要使用更加昂贵和有毒的药物进行治疗。

此外，结核分枝杆菌耐药基因的传播也会导致结核病的传播加剧，从而对公共卫生造成威胁。

结核分枝杆菌耐药基因的防治为了防止结核分枝杆菌耐药基因的传播，需要采取一系列措施。

首先，需要加强对结核病的监测和诊断，及时发现和治疗耐药菌株。

其次，需要加强对抗结核药物的管理和使用，避免滥用和不当使用抗结核药物。

此外，还需要加强结核病的宣传和教育，提高公众对结核病的认识和防范意识。

结语结核分枝杆菌耐药基因是结核病治疗中的一个重要问题，需要引起我们的重视。

只有加强对结核病的监测和诊断，合理使用抗结核药物，加强宣传和教育，才能有效地控制结核病的传播和耐药菌株的产生。

结核分枝杆菌耐药基因分布情况的初步探讨结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，在全球范围内都存在着高度耐药性的问题。

结核分枝杆菌耐药基因的分布情况对于疾病的流行和治疗具有重要的意义。

本文旨在对结核分枝杆菌耐药基因分布情况进行初步探讨。

结核分枝杆菌耐药基因主要包括耐药突变基因和耐药相关基因。

耐药突变基因是指结核分枝杆菌在长时间的抗结核药物治疗中，发生的基因突变导致对某些抗结核药物产生耐药性。

耐药相关基因是指与耐药性相关的基因，包括编码药物靶点的基因和药品转运蛋白的基因等。

目前，已经发现了多种耐药突变基因和耐药相关基因。

耐药突变基因主要包括rpoB、katG、inhA等。

rpoB基因编码RNA聚合酶的β亚基，在对利福平和利福四环酮产生耐药性的结核分枝杆菌株中，常常发生rpoB基因上的突变。

katG基因编码卡泼他尼的激活酶，而inhA基因编码过氧化物酶某抗结核药物的靶标。

耐药相关基因包括efpA、atpE和embB 等。

efpA基因与抗结核药物的转运相关，atpE基因编码ATP酶，与利福平和丙胺丁醇的耐药性有关，embB基因编码结核分枝杆菌的胺基甲酸酯酶。

在不同地区、不同亚型结核分枝杆菌株中，耐药基因的分布情况存在差异。

根据已有的研究资料显示，不同亚型结核分枝杆菌株中耐药基因的频率存在差异。

在北京株中，rpoB耐药突变基因的频率较高，而在非北京株中，katG和inhA耐药突变基因的频率较高。

耐药基因的分布还与不同的抗结核药物有关。

在对异烟肼和利福平耐药性的结核分枝杆菌株中，常见的耐药基因是katG和inhA。

而在对利福维林和对利福平耐药性的结核分枝杆菌株中，常见的耐药基因是rpoB和embB。

一些研究还发现耐药基因的分布与结核菌株的生物学特性有关。

结核分枝杆菌株的生长速度和致病能力可能与耐药基因的分布有关。

这些研究结果表明，耐药基因的分布情况不仅与种类和亚型有关，也与菌株的生物学特性有关。

结核分枝杆菌耐药基因的分布情况是复杂多样的，受到多种因素的影响。

ＡＢＳ ＴＲＡＣＴ： ｅｏ ｊｃｉｅｗａ ｏ ｕ ｄ ｒ ｔｎ ｈ ｈ ｒｃｅ ｉｔｃ ｆｒ ｓ ｅ ｅｍｕ ａｉｎｉ ｔｅ ｔ ｍｙ ｉ ｅ ｉｔｎ ｌ ｉａ — Ｔｈ ｂｅ ｔ ｓｔ ｎ ｅ ｓａ ｄ ｔ ｅｃ ａａ ｔｒｓｉｓｏ ｐ Ｌ ｇ ｎ ｔｔ ｌＳ ｒ ｐｏ ｃｎ ｒｓｓａ ｔｃｉ ｃｌｉ Байду номын сангаас ｏ ｌ ｎ
Ａｎａ ｙ ｉ ｎ ｔ ｅ ｃ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ｆｒ ｓ ｇ ｎｅ ｍ ｕ ａ ｉ ｎｓ ｌ ｓｓ ｏ ｈ ｈａ ａ ｔ ｒ ｓ ｉ ｓ ｏ ｐ Ｌ ｅ ｔ ｔｏ
ｉ ｔ ｅ ｔ ｍ ｙ ｉ ｅ ｉ ｔ ｎｃ ｓ ｌ ｔ ｓ ｏ ｙｃ ｂ ｃ ｅ ｉ ｍ ｕｂ ｒ ｕｌ ｓ ｓ ｎＳｒｐｏ ｃ ｎ ｒ ｓ ｓ ａ ｅ ｉ ｏ ａ ｅ ｆＭ ｏ ａ ｔ ｒ ｕ ｔ ｅ ｃ ｏ ｉ
魏 淑 贞 ， 秀芹 刘志 广 万康林 赵 ， ，
摘 要 ： 的 了解 我 国结 核 分 枝 杆 菌 （ ｃｂ ｃ ｒｕ ｔｂｒｕｏｉ，ＭＴＢ ｒ ｓ 基 因突 变 特 征 及 其 与链 霉 素耐 药 的 相 关 目 Ｍｙ ｏａｔ ｉｍ ｕ ｅｃ ｌｓ ｅ ｓ ）ｐ Ｌ 性， 并评 价 其 应 用 价 值 。方 法 对 ３ ２株 结 核 分 枝 杆 菌 临 床 分 离株 的 ｒ ｓ 基 因采 用 聚 合 酶 链 反 应 直 接 测 序 （ Ｃ － Ｓ 进 行 ０ ｐＬ Ｐ ＲＤ ） 检 测 。 结 果 ５ ９株 对 Ｉ ＮＨ、 Ｐ Ｓ 、 ＭＢ 和 Ｐ ＲＦ 、 Ｍ Ｅ ＡＳ全 部 敏 感 ，ｐＬ 基 因 没 有 突 变 ， １株 对 Ｓ 敏 感 的 耐 药 株 有 ６株 突 变 ， ｒｓ ６ Ｍ Ｓ 敏 感 菌 株 突 变 率 为 ５Ｏ （ ／ ２ ） ８ Ｍ ． ０ ６ １ ０ 。１ ２株 Ｓ 耐 药 ＭＴ ｒ ｓ 基 因突 变 率 为 ７ ． ３ ， 中 ４ Ｍ Ｂ，ｐ Ｌ ０ ３ 其 ３位 密 码 子 赖 氨 酸 转 变 为 精 氨 酸 （ ｙ４ Ａｒ） 变 率 为 ５ ． Ｏ ； ８位 密 码 子 有 ４种 突 变 类 型 ， 变 率 为 １ ． ８ ；６位 密 码 子 精 氨 酸 转 变 为 谷 氨 酰 胺 Ｌ ｓ３ ｇ 突 ２２ ８ 突 ７ ５ ８ （ ｇ ６ ｌ） 变 率 为 ０ ５ 。Ｓ 耐 药株 的 ｒ ｓ 基 因突 变 率 明 显 高 于 Ｓ 敏 感 株 的基 因突 变 率 ， 者 之 间 的 差 异 有 统 计 学 Ａｒ８ Ｇ ｎ 突 ．５ Ｍ ｐＬ Ｍ 两 意 义 ， ｚ ２ ． ５ Ｐ＜ ００ 。 结 论 ｒ ｓ 基 因突 变 与结 核 分 枝 杆 菌链 霉 素 耐 药 高度 相 关 ， 中 Ｌ ｓ３ ｇ突 变是 主 要 突 变 类 Ｙ ：１ ５ ０ ， ．５ ｐＬ 其 ｙ４ Ａｒ

结核分枝杆菌形态染色特点结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是一种革兰氏阳性、抗酸染色阳性的细菌，是引起人类结核病的主要病原体。

在形态和染色特点方面，结核分枝杆菌具有以下特征：1. 形态特点：结核分枝杆菌呈细长、略弯曲的杆状，有时呈Y字形或V字形。

菌体长度为0.2-0.6微米，直径为0.05-0.2微米。

菌体表面光滑，无鞭毛、荚膜和芽孢。

在固体培养基上，结核分枝杆菌可形成黄色、干燥、不透明、边缘不规则的结节状菌落。

2. 染色特点：结核分枝杆菌对多种染料具有抗酸性，因此常用抗酸染色法进行染色。

常用的抗酸染色方法有齐尔-尼尔逊（Ziehl-Neelsen）染色法和金胺O（Auramine O）染色法。

在这两种染色方法中，结核分枝杆菌均呈现红色，与其他细菌的蓝色或绿色背景形成鲜明对比。

3. 细胞壁结构：结核分枝杆菌的细胞壁较厚，主要由肽聚糖、脂肪酸、磷脂和蛋白质组成。

其中，肽聚糖层由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸交替连接而成，具有高度分支的特点。

这种分支结构使得结核分枝杆菌具有较强的抵抗外界压力的能力。

4. 生长特性：结核分枝杆菌生长缓慢，需要较长时间才能在固体培养基上形成可见的菌落。

在液体培养基中，结核分枝杆菌以球形、棒状或螺旋状的形式存在。

此外，结核分枝杆菌对营养要求较高，需要丰富的碳水化合物、氨基酸和维生素等营养物质才能正常生长。

5. 耐药性：结核分枝杆菌具有一定的耐药性，尤其是在长期使用抗结核药物治疗的情况下。

耐药性的产生与菌体内的突变、基因重组和外源性基因的引入等多种因素有关。

为了克服耐药性问题，临床治疗中常采用联合用药的方法，以提高治疗效果。

台州地区结核分枝杆菌分离及耐药特征分析池宏波1， 杨英梅2[1.浙江省台州市台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院检验科，浙江 台州 318000；2.浙江省台州市中心医院 台州学院附属医院检验科，浙江 台州 318000]摘要：目的 了解台州地区结核分枝杆菌（MTB ）和非结核分枝杆菌（NTM ）的分离情况及MTB 对利福平、异烟肼耐药基因突变位点分布特征，为结核病的诊断和临床用药提供参考。

方法 采用DNA 微阵列芯片法对3 334份临床样本进行分枝杆菌菌种鉴定，并检测384株MTB 对利福平、异烟肼的耐药基因。

结果 3 334份临床样本中MTB 阳性837例（25.10%），NTM 阳性265例（7.95%），居前3位的依次是胞内分枝杆菌（4.44%）、浅黄分枝杆菌（1.32%）和鸟分枝杆菌（0.75%）。

不同性别和年龄患者MTB 感染率不同（P <0.05）。

384株MTB 中，对利福平耐药32株（8.33%），对异烟肼耐药27株（7.03%），双重耐药57株（14.84%）。

利福平耐药基因突变位点主要是rpoB 基因531位点（53.93%）和526位点（26.97%），异烟肼耐药基因突变位点主要是katG 基因315位点（91.67%）。

结论 台州地区MTB 感染较普遍，NTM 感染也不容忽视。

应根据MTB 耐药基因检测结果合理用药。

关键词：结核分枝杆菌；非结核分枝杆菌；DNA 微阵列芯片；耐药基因作者简介：池宏波，男，1988年生，硕士，技师，主要从事临床检验分子诊断工作。

通信作者：池宏波，E-mail ：*****************。

文章编号：1673-8640（2020）05-0455-03 中图分类号：R521 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2020.05.013结核病是传染病的首要死因，是严重威胁人类健康的公共卫生问题[1]。

54例复治利福平耐药结核病患者菌株遗传特征及耐多药基因分析张洁，任怡宣，杨新宇，田丽丽，易俊莉，丁北川北京市疾病预防控制中心，北京100013摘要：目的　分析54例复治利福平耐药结核病（RR -TB ）患者的结核分枝杆菌（MTB ）菌株遗传特征及耐多药基因突变情况。

方法　选择同时留存有初治及复治MTB 菌株的复治RR -TB 患者54例，取其初治及复治时的MTB 共54对（108株），采用RD105基因缺失法检测其基因型，15位点可变数目串联重复序列基因分型实验（MIRU -VNTR ）判断其复治发病原因；取复治时的MTB 54株，通过MIRU -VNTR 结果构建最小生成树（MST ），分析群体遗传特征；采用分子线性探针药敏实验分析复治MTB 的耐多药基因（利福平耐药rpoB 基因及异烟肼耐药katG 、inhA 基因）突变情况。

结果　108株复治RR -TB 患者的MTB 均为北京基因型，内源性复燃占比77.8%（42/54）、外源性再感染占比22.2%（12/54）。

MST 显示，54株复治MTB 分为3个克隆复合群（CC1、CC2、CC3）和13个独特基因型；共48种基因型，成簇率为11.1%。

分子线性探针药敏试验结果显示，异烟肼耐药katG 、inhA 基因突变40株，耐多药率为74.1%（40/54）；利福平耐药rpoB 基因以S531L 位点突变为主（63.0%，34/54），异烟肼耐药katG 基因以S315T1位点突变为主（75.0%，30/40）。

结论　北京地区复治RR -TB 患者发病原因主要是内源性复燃，主要流行菌株为北京基因型，呈现出较高的遗传多样性，成簇率较低，MTB 耐多药基因突变位点多为rpoB 基因S531L 及katG 基因S315T1。

关键词：结核分枝杆菌；结核病；内源性复燃；耐药基因；利福平；异烟肼doi ：10.3969/j.issn.1002-266X.2024.11.006中图分类号：R521 文献标志码：A 文章编号：1002-266X （2024）11-0027-04Analysis of genetic characteristics of MTB and multi -drug resistance genes of 54 retreated rifampicin -resistant tuberculosis patientsZHANG Jie ， REN Yixuan ， YANG Xinyu ， TIAN Lili ， YI Junli ， DING Beichuan Beijing Center for Disease Prevention and Control ， Beijing 100013， ChinaAbstract ： Objective To analyze the genetic characteristics of Mycobacterium tuberculosis （MTB ） strains and drug resistance gene mutations in 54 cases of retreated rifampicin -resistant tuberculosis （RR -TB ） patients. Methods Fifty -four retreated RR -TB patients who retained both initial and recurrent MTB strains were included in the study. A total of 54 pairs （108 strains ） of MTB were collected at the time of initial and recurrent treatment ， and their genotypes were detected by RD105 gene deletion method. 15-locus variable number tandem repeat genotyping experiment （MIRU -VNTR ） was used to determine the cause of the recurrent disease. We constructed a minimum spanning tree （MST ） based on the MIRU -VNTR results of 54 cases of recurrent MTB ， and analyzed the genetic characteristics of the strains. Molecular linear probe assay was used to analyze the mutations of rifampicin -resistant rpoB gene and isoniazid -resistant katG and inhA genes in re‐treated RR -TB strains. Results All 108 MTB strains from the patients with retreated RR -TB were Beijing genotype. The proportion of endogenous reactivation in retreated RR -TB patients was 77.8% （42/54）， while the proportion of exogenous reinfection was 22.2% （12/54）. MST showed that 54 retreated RR -TB strains were divided into 3 clone complexes （CC1， CC2， CC3） and 13 unique genotypes ； they had 48 genotypes in total ， with a clustering rate of 11.1%. Molecular linear probe assay showed that there were 40 cases of mutations in the isoniazid -resistance genes katG and inhA ， with a multidrug resistance rate of 74.1% （40/54）. The rifampicin -resistant rpoB gene was mainly mutated at the S531L site （63.0%， 34/54）， while the isoniazid -resistant katG gene was mainly mutated at the S315T1 site （75.0%， 30/40）. Conclusions En‐dogenous reactivation was the main cause of retreated RR -TB patients in Beijing area. The predominant strain was the Bei‐基金项目：首都卫生发展科研专项（首发2020-2-1042）。

结核分枝杆菌对抗生素耐药性的分析结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）是引起结核病的主要病原体，其对抗生素的耐药性已成为全球范围内公共卫生领域的一个严重问题。

对抗生素耐药性的分析对制定有效的预防和治疗策略至关重要。

本文将对结核分枝杆菌对抗生素耐药性的分析进行探讨。

一、背景介绍结核病是一种由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，主要通过空气飞沫传播。

长期以来，结核病一直是全球范围内的主要公共卫生问题之一。

然而，结核分枝杆菌对抗生素的耐药性呈现出不断上升趋势，使得传统的治疗方法日益失效。

二、耐药机制结核分枝杆菌的耐药性主要是通过基因突变或外源性基因转移来获得的。

突变会导致结核分枝杆菌在受到抗生素作用时能够存活下来，从而形成耐药菌株。

而外源性基因转移可以使结核分枝杆菌获得抗生素的降解酶等耐药基因，从而产生耐药性。

三、常见耐药类型1. 多药耐药结核菌（MDR-TB）：对两种主要的一线抗结核药物——异烟肼和利福平耐药。

MDR-TB的治疗相对困难，通常需要采用二线抗结核药物进行联合治疗。

2. 广谱耐药结核菌（XDR-TB）：在MDR-TB基础上，还对氟喹诺酮类和抗结核药物硫胺基酸类耐药。

XDR-TB的治疗难度更大，并且治疗成功率较低。

四、耐药性传播机制耐药性的传播主要通过感染者之间的直接接触和长时间的密切接触传播。

结核分枝杆菌可在体内长期潜伏，并在免疫功能低下的情况下复发。

耐药菌株的传播加剧了结核病的传播和流行。

五、预防和控制策略为了预防和控制结核分枝杆菌对抗生素的耐药性，需采取以下策略：1. 加强结核病的早期筛查和诊断，尽早发现和治疗感染者。

2. 严格执行结核病患者的规范化治疗方案，确保疗程和药物的规范使用。

3. 推广有效的结核疫苗，如卡介苗，增强人群的免疫力，减少感染和传播风险。

4. 提高公众对结核病的认知水平，加强宣传教育，促进保健行为的养成。

5. 加强监测和研究，及时发现和分析耐药菌株的变化趋势，为制定相应的防控策略提供依据。

结核杆菌及其耐药性快速检测一、结核杆菌及其检测方法介绍结核分枝杆菌，又被称作结核杆菌，它是引发结核病的病原细菌。

主要通过呼吸系统结核患者传播，能够侵犯全身各个器官，最常见的为肺结核。

根据世界卫生组织的估算，全球每年增加的结核病人大约在800万左右，死于结核病的人大约在300万左右，全世界人口的三分之一，也就是大约17亿人曾经感染过结核杆菌。

在发展中国家，目前结核病的发病概率依然在持续地上升，在发达国家的病人也是有所上升的，比较常见于高危人群中（比如慢性酒精中毒的人、感染过HIV的病人、滥用药物的人以及无家可归的人）。

在控制结核的过程中，建立敏感、快速、特异的检测结核杆菌的手段具有非常重大的现实意义。

直到目前为止，结核的诊断依然主要依靠透视检查、临床症状、痰标本镜下检查、结核菌素试验或者痰标本结核杆菌培养等。

通过临床症状以及透视检查不能够发现早期的结核病人，并且特异性不是很强；结核菌素试验的特异性不是很强，阳性也只能说明在以前有否暴露在分枝杆菌下；痰标本镜检的敏感性和特异性也不能达到要求；培养的方法来分离结核杆菌是判断结核的重要标准，但是常规的培养方法需要的时间比较长，一般需要几个周的时间。

近年来，结核杆菌（包括牛型、人型、非洲型）在快速检测方面取得了快速的发展，主要包括基因扩增技术和改良液体培养方法。

建立准确、快速的耐药性检测方法，能够有效指导并制定科学合理的治疗方式，及时判断治疗是否成功，并且是否产生了耐药性，也有利于展开大规模的结核杆菌的耐药性调查。

之前基于培养方法来检测结核杆菌的耐药性，耗时比较长，并且结果不一定准确，这些年来，耐药性的快速检测方法已经取得了较大的进展，大体包括：噬菌体检测方法、改良液体培养方法以及基因检测方法等。

二、结核杆菌的快速检测方法（一）改良液体培养方法这些年来，已经建立了多种多样的改良液体培养方法，大大缩短了培养所需要的时间，这类的试剂盒包括了Bactec 9000MB、Bactec 460TB以及MGIT等。

结核分枝杆菌基因分型及耐药性研究目的：探讨新疆喀什地区结核病患者的结核分枝杆菌基因分型及耐药性。

方法：采用比例法对笔者所在医院确诊的100例结核患者的结核分枝杆菌进行药物敏感检测，分析其基因分型及耐药性关系。

结果：本組研究的100株结核分枝杆菌通过检测，18例（18.00%）为牛结核分枝杆菌，其总耐药率11.11%（2/18）；82例（82.00%）为人结核分枝杆菌，其总耐药率达29.27%（24/82）；人结核分枝杆菌总耐药率远高于牛结核分析杆菌，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

结论：人结核分枝杆菌是喀什地区结核分枝杆菌主要流行菌株，且耐药性较高，应该加强主要结核菌株的防控措施。

标签：结核分枝杆菌；基因分型；耐药性随着全球经济和卫生事业的飞速发展，结核疾病得到有效控制。

但结核病依然是严峻的全球性公共健康问题，结核病是中国最主要的传染病之一，结核分枝杆菌耐多药率偏高，严重威胁着患者的生命健康，并不断对医疗专家提出新的挑战[1]。

新疆喀什地区由于经济发展水平和医疗卫生条件因素，结核病耐药性较高，尤其是耐多药结核疫情较严重，应该引起本地区医务工作者的高度关注，应该加强相关检测和防控措施[2]。

笔者针对喀什地区结核病患者的结核分枝杆菌基因分型、耐药性进行药物敏感检测分析，确定主要流行菌株为人结核分枝杆，其耐药性较高，为今后结核病防治工作的开展提供宝贵参考依据，现将结果报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料本次研究采用喀什地区结核病防治所提供的结核患者结核分枝杆菌临床菌株100例，其中男43例，女57例，年龄37～78岁，平均51.4岁。

1.2 方法（1）采用鉴别培养基PNB和TCH将临床分离菌株100例进行菌株鉴定，观察100例菌株在培养基上生长情况鉴别结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌。

（2）采用比例法在罗氏（L-J）培养基中对8种抗结核药物进行药物敏感试验，所采用的8种药物有异烟肼、链霉素、阿米卡星、乙胺丁醇、氧氟沙星、卷曲霉素、利福平、卡那霉素；耐药标准含药培养基菌落数对照培养基菌落数≥1%为耐药。