结核分枝杆菌耐药机制

耐药结核病的治疗及其进展耐药结核病指病原体对抗结核药物产生耐受性的疾病状态，已成为当前全球重要公共卫生问题。

根据当前流行性病学分析，全球结核病总耐药率高达20%，耐多药率达到5%。

2018-2019年全国对治疗结核病药物产生耐药性的调查结果表明，我国肺结核患者对多种药物产生耐药性的概率已经＞8%。

故研究耐药结核病的治疗具有非常重要的意义。

耐药结核病治疗新药速递1.PretomanidPretomanid 是一种口服硝基咪唑类药物，具有体外和体内抗结核分枝杆菌（MTB）活性。

它通过抑制分枝菌酸生物合成杀死活性MTB，阻断细胞壁的产生。

近期，《临床微生物学与感染》发表的一篇纳入8项有关pretomanid治疗利福平耐药结核病的Meta分析研究数据表明，Pretomanid在0-14天、0-2天、0-7天均有良好的早期杀菌活性（表1）。

表1含Pretomanid方案对结核分枝杆菌的早期杀菌活性2.DelpazolidDelpazolid是一种新型恶唑烷酮类药物，已在疗效和毒性的方面进行了非临床研究以及1期临床研究。

Delpazolid对革兰氏阳性菌（包括结核分枝杆菌）具有体外活性。

近期，《抗菌物和化学疗法》发表的一篇研究评估了Delpazolid在结核病患者中的杀菌活性、安全性和药代动力学。

79名年龄在19~79间的受试者被随机分配至各治疗组，应用delpazolid 800 mg QD，400 mg BID，800 mg BID，1200 mg QD和异烟肼，利福平，吡嗪酰胺和乙胺丁醇（HRZE）方案以及利奈唑胺600mg BID进行活性对照。

结果表明应用delpazolid 800mg QD, 400mg BID, 800mg BID，和1,200mg QD 后菌落形成单位（log-CFU）平均每天下降值分别为0.044±0.016，0.053±0.017，0.043±0.016和0.019±0.017：而应用HRZE和利奈唑胺（600mg BID）后1og-CFU平均每天下降值分别为0.192±0.028和0.154±0.023（表2）。

结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药相关基因研究进展曹志敏;陈玲【摘要】Pyrazinamide (PZA) is an important anti-tuberculosis drug especially for treating multidrug-resistant tuberculo sis (MDR-TB).In recent years,the incidence of Mycobacterium tuberculosis' resistance to pyrazinamide has increased.At present,the mechanism of drug resistance has not been clearly elucidated.In this review,the association between gene mutation and pyrazinamide resistance in Mycobacterium tuberculosis will be summarized.%吡嗪酰胺是治疗结核病的重要抗结核药物之一,特别是用于耐多药结核病的治疗.近年来结核分枝杆菌对吡嗪酰胺的耐药逐渐增多,其耐药机制尚未明确.本文针对结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药及其与基因变异之间的关系研究进展进行综述,以供研究者参考.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2017(033)010【总页数】4页(P923-926)【关键词】结核分枝杆菌;吡嗪酰胺;基因变异;耐药机制【作者】曹志敏;陈玲【作者单位】遵义医学院刚属医院呼吸二科,遵义 563000;遵义医学院刚属医院呼吸二科,遵义 563000【正文语种】中文【中图分类】R378吡嗪酰胺 (pyrazinamide，PZA)，又名异烟酰胺，为烟酰胺结构类似物，具有独特的灭菌活性，酸性条件下可杀灭处于半休眠期结核菌和持留菌，而其他抗结核药物却难以做到[1-2]。

最新：结核分枝杆菌抑制吞噬体-溶酶体形成机制结核病是由结核分枝杆菌传播所引起的一种全球流行性疾病，是造成人类死亡的十大原因之一。

该疾病每年造成140万人死亡，尽管目前有多种抗结核药物用于抗结核治疗，结核病依然对全球公共卫生造成极大威胁。

结核病是一种以空气传播为主要传播途径的肺部疾病，亦有少数可传播到人体其他器官引起肺外结核。

研究发现，结核菌通过阻断巨噬细胞的凋亡、促进细胞坏死、诱导细胞自噬以及避免凋亡等途径来避免机体产生免疫反应并诱发机体感染[1,2,3]。

正常的吞噬过程可以概括为细胞外受体与病原体发生初始相互作用后，信号通路诱导肌动蛋白丝聚合，使细胞膜伸长形成伪足包围病原体。

细菌等病原微生物一旦被巨噬细胞所吞噬，细胞膜就会闭合成为一种叫做初期吞噬体的结构，随后该结构与溶酶体融合成为晚期核内体或吞噬溶酶体。

同时该结构中的数种溶酶体裂解酶在酸性环境下(最适pH值为4.5～5.0)降解病原体。

结核分枝杆菌能通过以下几种机制阻止吞噬体成熟。

1 抑制吞噬体内的酸化结核分枝杆菌通过胞吞作用或与CR3、FcγR等特异性受体结合的方式进入巨噬细胞中，并聚集在吞噬体内。

巨噬细胞处于静息状态时，吞噬体未与溶酶体融合，吞噬体内呈弱酸性，pH值为6.2左右；当结核分枝杆菌进入巨噬细胞中将巨噬细胞激活后，含有结核分枝杆菌的吞噬体将会与溶酶体融合形成吞噬溶酶体，融合过程中溶酶体中的大量蛋白水解酶将被激活，这些被激活的蛋白水解酶分解细菌等大分子物质形成的终产物使得吞噬体酸化，其pH 值甚至可低至4.5[4]。

然而事实上结核分枝杆菌能在巨噬细胞中生存、繁殖，且生存的微环境pH值较高，这表明结核分枝杆菌可能抑制吞噬体的酸化[5]。

研究表明，巨噬细胞内结核分枝杆菌将LAM和脂多糖等成分分泌到吞噬体中，同时LAM、脂多糖被转运到囊泡内作为脂膜循环，吞噬体将会与胞内的某些囊泡发生融合。

在融合过程中，吞噬体与来自囊泡的膜蛋白结合，吞噬体对与之结合的膜蛋白具有一定选择性，能选择性地抑制其与H＋-ATP酶结合，导致吞噬体始终缺乏H＋-ATP酶参与酸化作用。

结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因及其突变的研究进展摘要】本文就报道的结核分枝杆菌耐异烟肼相关基因katG、inhA、ahpC、kasA、ndh、OxyR-ahpC、mabA-inhA、furA-katG、fabG-inhA、efpA、ini (A,B,C)及其突变位点进行综述。

【关键词】结核分枝杆菌异烟肼耐药基因突变结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的慢性传染病。

随着耐药结核病，尤其是耐多药和广泛耐药结核病的出现，给结核病的防控工作带来了严峻挑战。

异烟肼是治疗结核病主要药物之一，但MTB耐异烟肼率已达17.6%，其耐药机制尚不明确，大多认为与MTB相关基因突变有关[1]。

本文综述目前国内外报道的MTB耐异烟肼相关基因及其常见突变位点，以进一步了解MTB耐异烟肼的发生机制。

1 katG基因异烟肼经MTB katG基因编码的过氧化氢-过氧化物酶活化后产生杀菌作用，katG突变使过氧化氢-过氧化物酶失活，导致MTB对异烟肼耐药。

KatG最常见突变位点是Ser315Thr。

Khadka JB等研究尼泊尔地区107例耐异烟肼菌株中，Ser315Thr及Ser315Ile突变率分别为77.6%及17.1%。

陈玲等研究显示Ser315Thr突变频率为66.7%[2]。

315位点还有Ser→Asn、Ser→Thr、Ser→Arg和Ser→Gly突变形式。

此外，还存在Val230Met、Pro232Gln、Gly237Glu、Gly309Cys、Asp304Glu、Asp357His、Asp357Asn、Arg463Leu、His276Met、Gln295His、Glu454Arg等突变[2-5]。

2 inhA基因inhA基因编码NADH依赖的enoyl-Acp还原酶，该酶催化α-不饱和脂肪酸转化为饱和脂肪酸，产生的长链脂肪酸是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分。

异烟肼与分枝菌酸合成途径中的NADH依赖的enoyl-Acp复合体结合，阻断90%以上长链脂肪酸合成，从而抑制MTB生长。

《耐药结核病化学治疗指南（2019年简版）》要点第一章总论一、耐药结核病的定义1.单耐药结核病（MR-TB）: 结核病患者感染的结核分枝杆菌（MTB）经体外药物敏感性试验（DST）证实仅对1种一线抗结核药物耐药。

2.多耐药结核病（PDR-TB）: 结核病患者感染的MTB 经体外DST证实对1种以上一线抗结核药物耐药（但不包括同时对异烟月井和利福平耐药）。

3.耐多药结核病（MDR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实至少同时对异烟月井和利福平耐药。

4.准广泛耐药结核病（Pre-XDR-TB）：结核病患者感染的MTB 经体外DST证实在耐多药的基础上对1种氟唾诺酮类或1种二线注射类抗结核药物耐药。

5.广泛耐药结核病（XDR-TB）: 结核病患者感染的MTB 经体外DST证实在耐多药的基础上至少同时对1种氟I座诺酮类和1种二线注射类抗结核药物耐药。

6.利福平耐药结核病（RR-TB）：结核病患者感染的MTB经体外DST证实对利福平耐药，二、耐药结核病产生的原因三、我国CEF的耐药疫情特征（一）我国耐药结核病的流行现状（二）交叉耐药交叉耐药病原体对某种药品耐药后，对于结构近似或作用性质相同的药品也可显示耐药性，称之为交叉耐药；根据程度的不同，又有完全交叉耐药和部分交叉耐药之分（表1） O1.单向交叉耐药：MTB对A药品耐药时，对B药品并不耐药；但对B药品耐药时，对A药品也同时耐药。

2.双向交叉耐药：MTB对A药品耐药的同时对B药品也耐药，而对B药品耐药的同时也对A药品耐药。

（三）耐药的稳定性MTB产生耐药后其耐药的稳定性并非一成不变，随着MTB菌株的传代，耐药性会产生或多或少的变化，不同药品、不同程度的耐药性将表现出不同程度的稳定性或易变性。

1.耐药稳定性强类：（1）链霉素。

MTB对链霉素产生的耐药性比较稳定。

（2）氨硫腺，其耐药稳定性很好，少见有复敏现象。

（3）环丝氨酸和乙（丙）硫异烟胺，一旦耐药则不易恢复, 稳定性强，停药后亦是如此。

利福平和异烟肼抗结核分支杆菌耐药基因的研究【摘要】耐药结核病是全世界结核病疫情第三次回升的重要原因，结核病耐多药菌株的出现增加了结核病治疗的难度，目前，用于结核病治疗的一线要主要是利福平和异烟肼。

异烟肼耐药机制非常复杂，与之耐药相关的基因较多，如：katg，inha，aphc，kasa，ndh等。

其中最主要的耐药基因为katg 、inha 基因。

利福平相关耐药基因研究较为明确，目前认为rpob基因的突变是mdr-mtb菌株的标志。

迄今为止，对利福平和异烟肼抗结核分支杆菌耐药性的检测方法有多种，实际工作中需要将多种检测方法同时运用，以使检测结果真实可信，及时为临床治疗提供有效的依据。

【关键词】耐药结核病；利福平，异烟肼；耐药基因；检测方法肺结核是世界上主要的公共卫生问题，是严重危害人类身体健康的传染性疾病之一。

二十世纪五、六十年代人们便期望找到一种有效的方法来控制肺结核的传染，最后达到治愈结核病的目的，但目前肺结核仍是一个全球性的流行病，成为全球性的公共卫生问题，每年大概有2-3百万的人死于这种疾病。

近年来，肺结核在艾滋病患者中的广泛传播再一次引起了公众的关注1，耐药结核杆菌尤其是耐多药结核杆菌的出现和传播是导致结核病发病率升高的重要原因。

本文就结核杆菌对利福平和异烟肼产生耐药性的相关基因，以及耐药性检测的方法做一综述2。

1 异烟肼异烟肼（isoniazid，inh），是抗结核病的常用一线药物，在结核病的治疗中一直起着重要的作用。

但大多数结核病患者如果长期用药易产生耐药性，这主要是由于长期使用inh可诱导细菌产生基因突变，从而使细菌对inh的耐药性增强。

有研究表明。

1.1 katg 基因是过氧化氢酶‐过氧化物酶的编码基因，katg基因全长2223个核苷酸，上游与相隔44个碱基的fura基因（一种结核杆菌铁调控蛋白编码基因，可能为katg基因的启动子，并调控其表达）相连，下游与相隔2794个碱基的embc基因相连。

细菌耐药监测预警机制试题一、单选题1. 以下哪种细菌最容易产生耐药性？A. 大肠杆菌B. 金黄色葡萄球菌C. 流感嗜血杆菌D. 肺炎链球菌答案：B. 金黄色葡萄球菌解析：金黄色葡萄球菌是一种常见的耐药菌，它容易产生多种抗生素的耐药性。

2. 以下哪个国家最先建立了细菌耐药监测系统？A. 美国B. 英国C. 日本D. 中国答案：B. 英国解析：英国是最早建立细菌耐药监测系统的国家之一，该系统能够对细菌耐药情况进行实时监测和预警。

3. 以下哪种细菌的耐药性传播主要与医疗环境有关？A. 大肠杆菌B. 金黄色葡萄球菌C. 肺炎链球菌D. 结核分枝杆菌答案：D. 结核分枝杆菌解析：结核分枝杆菌的耐药性传播主要与医疗环境有关，特别是在医院中使用的抗结核药物不当时容易产生耐药性。

4. 以下哪种方法可以有效地减少细菌耐药性的产生？A. 频繁更换抗生素品种B. 长期使用同一种抗生素C. 使用具有多重耐药性的抗生素D. 根据药敏试验结果合理使用抗生素答案：D. 根据药敏试验结果合理使用抗生素解析：根据药敏试验结果合理使用抗生素可以有效地减少细菌耐药性的产生，因为药敏试验可以确定哪种抗生素对细菌最敏感，从而有针对性地使用药物。

频繁更换抗生素品种、长期使用同一种抗生素和使用具有多重耐药性的抗生素都容易导致细菌产生耐药性。

二、多选题1. 下列哪些因素容易导致细菌产生耐药性？A. 长期使用抗生素B. 患者不按医嘱用药C. 医院感染控制措施不到位D. 患者免疫力低下答案：ABC解析：长期使用抗生素、患者不按医嘱用药以及医院感染控制措施不到位等因素都容易导致细菌产生耐药性。

患者免疫力低下虽然也与细菌耐药性的产生有关，但并不是主要因素。

2. 下列哪些国家已经建立了细菌耐药监测预警机制？（）A. 美国B. 英国C. 日本D. 中国答案：ABCD解析：目前，美国、英国、日本和中国等国家已经建立了细菌耐药监测预警机制。

这些国家通过收集和分析细菌耐药数据，及时发现和预警细菌耐药情况，并采取相应的防控措施，以遏制细菌耐药性的传播。

重要致病菌的耐药机制1．甲氧西林耐药葡萄球菌(MRS) 金葡菌可产生一种特殊的青霉素结合蛋白PBP2a，其与β内酰胺类抗生素的亲和力减低，因而产生耐药性(MRSA)。

PBP2a 由mecA 基因编码，由转座子携带并整合至葡萄球菌染色体的mec 部位。

每株MRSA 菌都有mecA 基因，而敏感株则无。

MecRI-mecl 是调节基因，通过抑制mecA 的转录决定PBP2a 的合成水平而调节细菌的耐药程度。

在细菌基因组中还存在着辅助基因femA、femB、femC、femD，与甲氧西林耐药性的表达有关。

这些辅助基因与mecA 基因协调作用，产生对β内酰胺类抗生素的高度耐药。

MecA 基因广泛分布于金葡菌及凝固酶阴性葡萄球菌。

带有mecA 基因的菌株对青霉素类、头孢菌素类、单环β内酰胺类抗生素均呈耐药。

由于其所在的转座子常带有对其他抗生素的耐药基因，使耐甲氧西林葡萄球菌常可对红霉素、四环素类、夫西地酸、磺胺药、链霉素等氨基苷类及氟喹诺酮类同时耐药，但上述抗生素的耐药机制则各不相同。

1996 年欧洲首次报道了对万古霉素不敏感金葡菌，MIC 为8～16ug/ml，称为VISA(Vancomycin intermediate suscepitble 或GISA(Glycopeptide intermediate susceptible S aureus)，其机制尚未完全阐明，可能由于该菌产生过多的靶位，阻断了药物到达靶位，使之不能起抗菌作用。

2．耐万古霉素肠球菌肠球菌属对万古霉素的耐药性共有6 种基因型，即VanA、VanB、VanC1、VanC2/C3、VanD和VanE。

其中VanA、VanB、VanD、VanE为获得性耐药，VanC1和VanC2/C3为固有的耐药性。

万古霉素与细菌肽聚糖前体末端的D －丙氨酰－D－丙氨酸结合，抑制细胞壁肽聚糖的合成。

耐万古霉素菌株中VanA、VanB、VanD型可产生一组功能相似的连接酶，导致合成D－丙氨酰－D－乳酸取代正常的细胞壁肽聚糖末端的D－丙氨酰－D－丙氨酸，前者与万古霉素的亲和力仅为正常成分的，使万古霉素不能与其靶位结合，造成细菌对万古霉素耐药。

结核分枝杆菌耐异烟肼突变基因及分子检测方法研究进展李芊璘;冯福民;戴二黑【摘要】结核病是一种慢性感染性疾病.我国作为结核病的高负担国家,其高发率已成为严峻的公共卫生问题.异烟肼作为治疗结核病的重要一线药物之一,由于其治疗管理不规范等原因导致临床患者耐药日益严重.目前已知异烟肼最主要的耐药机制是基因突变,如何准确有效地检出耐药基因,是控制结核病的关键.本文从分子角度分别阐述了异烟肼常见耐药基因katG、inhA、ndh、ahpC、oxyR,以及罕见突变基因kasA、sigI、furA、mabA、iniABC、efpA,并针对其检测方法作了概述.%Tuberculosis is a chronic infection caused by Mycobacterium tuberculosis. The high financial burden and high incidence rate of tuberculosis have become a critical public health problem in China. Isoniazid, as one of the important first-line drugs in the treatment of clinical patients, drug resistance is becoming increasingly serious because of the lack of standard treatment. At present, the main mechanism of isoniazid resistance is known as gene mutation. How to detect drug resistance gene effectively and accurately is the key to control tuberculosis. In this article, we analyzed the frequent genes (katG, inhA, ndh, ahpC and oxyR) and novel genes (kasA, sigI, furA, mabA, iniABC and efpA) from the perspective of molecular biology, and summarized their diagnostic methods.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2017(045)012【总页数】4页(P1341-1344)【关键词】分枝杆菌,结核;异烟肼;耐药基因;分子检测;综述【作者】李芊璘;冯福民;戴二黑【作者单位】华北理工大学公共卫生学院 063210;华北理工大学公共卫生学院063210;华北理工大学附属石家庄市第五医院【正文语种】中文【中图分类】R378.91+1结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）感染引起的一种具有潜在致命性的慢性传染病，其中以肺结核最为常见。

354Chin J Lab Diagn,March.2021 ,Vol 25«No.3文章编号：1007 — 4287(2021)03 — 0354 —03荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用张汇征\李桓2,张珍'李俊刚、王静1，廖传玉1，周刚、陈耀凯1,严晓峰罗明^ (重庆市公共卫生医疗救治中心1.中心实验室；2.感染科；3.药剂科；4.结核科，重庆400036)摘要：目的评价荧光Pt’R熔解曲线法检测临床标本结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼敏感性的性能。

方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2016年7月至2018年7月进行过荧光P C R熔解曲线法结核检测的病例，分别 与结核菌培养和Gen e x p e r t比较检测结核菌的灵敏度，与比例法药敏比较药敏结果。

结果在结核菌检测上，荧光P C R熔解曲线法阳性率与结核菌培养相近，低于Genexpert:与比例法药敏相比，检测利福平药敏的灵敏度为93.2%,特异度为80. 2%,符合率为84. 3%;检测异烟肼药敏的灵敏度为92. 6%,特异度为86. 3%,符合率为88. 6%。

结论 荧光P C R熔解曲线法可以高灵敏地直接对临床样本快速检测结核菌及其耐药性。

关键词：焚光P C K熔解曲线法；结核分枝杆菌；耐药性；临床样丰中图分类号：R378.91 文献标识码：AApplication of fluorescence PCR melting curve assay to detect mycobacterium tuberculosis and its drug-resistance in clinical specimens Z H A N G H u i-z h e n g^L l H uan Z H A N G Zhen n et a l. (.Central Lab ^ Chongqing Public H ealth M edical Center •Chongqing A00036 ,Chi?iu)Abstract ：Objective To evaluate the ability of fluorescence PC'R melting curve assay in detection of mycobacterium tuberculosis in clinical samples. Methods The cases tested fluorescence quantitative PCR melting curve assay in C'hongqing public health medical center during Jul. 2016 to Jul. 2018 were collected. The sensitivities of fluorescence PCR melting curve assay were compared with MTB culture and Genexpert respectively. The results of rifampin and iso- niazid drug susceptibility of fluorescence PCR melting curve assay were compared with that of standard proportion method. Results The positive detection rate of MTB of fluorescence cjuantitative PCR melting curve assay was close to MTB culture，but lower than that of Genexpert; Compared with the proportion method, the sensitivity, specificity and concordance rates of rifampicin were 93. 2% ,80. 2%and 84. 3% respectively ； The sensitivity * specificity and concord­ance rates of isoniazid were 92. 6% ,86. 3%and 88. 6% respectively. Conclusion Fluorescence cjuantitative PCR melt­ing curve assay can be u.sed to detect MTB and its drug-resistance directly in clinical samples with high sensitivity.Key words：fluorescence quantitative PCR melting curve assay；mycobacterium tuberculosis；drug-resistance；clinical specimen(Chiti J Lab,2021,25 ：0354)结核病（TB)是由结核分枝杆菌（MTB)引起的 慢性传染病。