产品初始污染菌检测作业指导书

初始污染菌测试作业指导书1 目的建立产品的初始污染菌的检验规程，规范检验人员操作，确保产品质量。

2 范围适用于本公司产品灭菌前和非灭菌产品的初始污染菌检测。

3 职责质量部负责作业指导书的制定及执行。

4 检验依据4.1 ISO11737.1-2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定4.2 中华人民共和国药典(2015年版)1105非无菌产品微生物限度检查法:微生物计数法。

4.3 中华人民共和国药典(2015年版)1106非无菌产品微生物限度检查法:控制菌检查法5 作业内容5.1试验前准备事先准备好试验指导书、记录本等。

5.2主要仪器、器具及用品微生物限度检查仪、无菌滤杯、0.45um无菌滤膜、无菌锥形瓶、胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、恒温培养箱恒温培养箱、90mm培养皿、无菌生理盐水。

5.3培养基的配置TSA：取40g胰蛋白胨大豆琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。

SAB：取65g沙氏葡萄糖琼脂培养基溶解于1000ml纯化水，加热煮沸后密封灭菌，无菌检测后备用。

0.9%生理盐水：9gNaCl溶解于1000ml纯化水，每份250ml 分装于锥形瓶中，灭菌后备用。

5.4取样5.4.1同一批次产品数<50件，抽取3件；同一批次产品数为50~100件，抽取5件；同一批次产品数>100件，抽取10件。

5.4.2新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS的原则抽取）按照测试初始污染菌和校正因子。

5.5试验5.5.1每瓶一份样品，按无菌操作原则剪成2～5cm的碎片，移入装有250ml生理盐水的无菌锥形瓶中,充分震荡后备用。

5.5.2滤膜和滤杯安装好在微生物限度仪上，将5.4.3的洗脱液分别加入两个滤杯中，开启微生物限度仪过滤。

5.5.3过滤完成后无菌操作取下滤杯将两张滤膜载菌面分别放入TSA皿和SAB皿中，并做好标识。

检测环境 和检验量
✓ 在环境洁净度10000级下的局部洁净度 100级的单向空气区域内进行。洁净区 设置可在微生物室操作
✓ 各类产品每批随机抽样10件样品（10个 包装）
方法主要步骤
采样
供试液制备
培养
菌落计数
初始污染菌检测
采样方法
•供试液制备
1. 供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中 充分振荡后取样。作为1：10的供试液。
菌落特征
⑴ 形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦 有淡褐色、 淡黄色（如果培养基中加入 0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为 红色）
⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱 褶、突起或扁平。
⑶ 大小差异很大。
细
平
1：10
菌
皿
号 37℃48h菌落计数
数
平
行
行 间
Ⅰ
1:100 37℃48h菌落计数
计算公式
菌数/m3= 50000 N AT
式中： A——平板面积，cm2； T——平板暴露时间，min； N——平均菌落数。
标准限值：灭菌和消毒产品分别≤500和 ≤2000cfu/m3
物体表面和生产人员手细菌总 数检测方法
采样方法:
将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表 面，根据物体表面积大小，采平行样1～4个，用浸 有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次 （往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水 的采样管中。
对生产人员手采样：被检人五指并拢，将浸有灭菌生 理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根 处往返涂抹10次后，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐 水的试管中。
检验方法和结果计算

文件编号版本初始污染菌检测作业指导书1. 目的：通过生物实验方法，检测未灭菌产品的微生物污染数量。

2. 主要设备：3. 试剂：pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液大豆酪蛋白琼脂沙氏葡萄糖琼脂4. 试验前准备：试验前配制需要的培养基﹑pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液并灭菌，准备灭菌的培养皿和三角瓶等。

5. 试验步骤：5.1. 样品数量:：同一批号产品5件。

5.2. 浸提液制备：5.2.1 浸提介质为pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

5.2.2 已提前30 min开启净化工作台。

使用前用75%乙醇消毒净化工作台的内表面。

5.2.3 用75%乙醇消毒受检样品的外包装。

5.2.4 本操作以无菌操作方式在净化工作台内进行。

打开样品的内包装，取出样品，用己灭菌的剪刀剪切样品为3 ~5cm的小段（包括样品Hub段），放入己灭菌的150ml的带盖三角瓶内。

加入20ml已灭菌的pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，盖好瓶塞。

5.2.5 依据上述方法，完成所有样品的处理。

5.2.6 提前30~60min开启超声波清洗机，设定温度为37℃。

如需快速达到设定温度，可用温水注入超声波清洗机内。

确认达到设定温度后，将上述完成的三角瓶放入超声波清洗器内（注意：不得打开瓶塞，否则弃之！），启动超声波发生器，振荡样品10min，取出擦干三角瓶外表面。

5.2.7 再将上述盛有样品的三角瓶置于混匀器振荡1min。

此液体即为样品浸提液。

此液体浸提液制取后1h内使用。

5.3. 使用75%乙醇消毒上述制备的浸提液的三角瓶外表面，并将其转入超净工作台内。

5.4. 使用无菌吸管，吸取2ml浸提液，移入已灭菌的空培养皿内。

每一份浸提液制备２份平行的培养皿。

将灭菌完毕，已冷至约45~50℃（水浴锅保温）的大豆酪蛋白琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基逐一加入上述培养皿内，每种培养基分别倾注2个平行的培养皿。

每一培养皿加入约15~20ml的培养基，盖上培养皿外盖。

放置于净化工作台内表面，轻轻摇动使溶液与培养基充分混合。

文件名称编制/修订审核批准作业指导书编号No.版本页次生效日期第 1 页共4 页产品初始污染菌检测日期日期日期文件履历表时间版本编写/修订人员内容文件名称产品初始污染菌检测页次第 2 页共4 页生效日期：检测依据:ISO11737-1:2018医疗器械的灭菌微生物学方法第一部分：产品上微生物总数的测定Normative Reference: ISO11737-1 2018 Sterilization of medical devices —Microbiological methods —Part 1: Determination of a population of microorganisms on products1仪器设备微生物限度检查仪、无菌滤杯（容积125ml，已安装0.45um无菌微孔滤膜）、500ml或1000ml三角瓶，无菌胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板、无菌沙氏琼脂（SAB）平板、恒温培养箱2采样方法2.1抽取灭菌前包装封口后的样品，按照随机抽样的原则，随机抽取要求的数量，抽样后标识样品的抽取时间。

2.2正常生产的产品，每个产品族每周抽样一次（可在净化区环境检测的同时抽样），抽取3 PCS样品作为平行样。

具体产品族的划分及抽样规则见下表。

产品族名称族产品清单生产区间代表产品一次性硅胶导尿管18FR一次性硅胶喉罩4# 测试样品备注按照产品的生产环境、生产工艺将产品划分为不同的产品族。

抽取族内生产量比较大，代表性强的产品，测试其初始污染菌。

硅胶产品硅胶导尿管硅胶喉罩普通气管插管带吸痰腔气管插管整个样品插管产品加强型气管插管双腔支气管插管带导丝气管插管带导丝加强型气管插管气管切开插管普通气管插管ID7.5 整个样品2.3新产品在首次生产时，抽取10 PCS（若有多个规格，按照最大规格3 PCS，最小规格3PCS，中间规格4 PCS 的原则抽取）按照5测试初始污染菌和校正因子。

2.4其它的测试需要，按照预订的测试方案抽取样品。