机能学设计性实验急性肾衰竭动物模型的建立

急性肾衰竭动物模型的复制及实验性治疗葛贺;李冰;黄晓莉;杨丽娟;陈立松;芦丽莉;刘艳波【摘要】Objective To copy the acute renal failure ( ARF) animal model and execute an experimental treatment of it in rabbits, to lay a foundation for the implementation of comprehensive experiment for undergraduate students. Method ARF model was set up through the injection of 50% glycerol (10 mL/kg). All the rabbits were monitored with ECG, Sodium bicarbonate solution, furosemide solution and CaCl2 solution were infused through the external jugular vein to the rabbits in the treatment group. Serum urea nitrogen ( BUN), serum creatinine (Cre)level,plasma pH,urine volume and urine creatinine changes of the rabbits were detected after 24 hours. Results The application of 50% glycerol intramuscular injection could replicate typical animal models with acute renal failure. Serum BUN and Cre levels concentration in the model group were obviously higher than those in the negative control group, the urine Cre concentration was also higher, while the urine volume per minute was less and a metabolic acidosis happened at the same time. In the treatment group, serum BUN and Cre levels were significantly lower than those in the model group, while urine volume per minute was more than that in the control group, and the metabolic acidosis was improved. The blood pressure of animals in the treatment group was a litter higher,but there was no difference compared with that in the negative control group, T wave was high and giant, and the QRS wave was widened in the model group compared withthose in the negative control group. After the treatment,ECG of the animals in the model group gradually returned to normal state. Conclusion The method of intramuscular injection of 50% glycerol could be reliable to replicate the animal model with acute renal failure, and can be taken as a comprehensive experimental teaching method and widely used in the teaching of medical functional experiment.%目的复制家免急性肾衰竭动物模型并进行实验性治疗,为本科学生综合性实验的实施奠定基础.方法通过肌肉注射50％甘油(10 mL/kg)复制家兔ARF模型,各组动物进行心电图监测,治疗组通过颈外静脉滴注碳酸氢钠溶液、呋塞米溶液及CaCl2溶液进行治疗,对比观察24h后血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Cre)水平、pH变化、尿量及尿肌酐变化.结果 50％甘油肌肉注射可复制出明显的急性肾衰的动物模型,模型组动物血清中BUN,Cre水平明显高于阴性对照组,其尿肌酐含量较高,每分钟尿量明显减少,并出现明显的代谢性酸中毒；而治疗组动物血清BUN,Cre水平明显低于模型组,其尿肌酐含量减少,每分钟尿量明显多于模型组,酸中毒缓解.模型组动物血压偏高,但与阴性对照组无明显差别,而心电图发现T波高耸,QRS波增宽.治疗后其心电图逐渐恢复正常.结论肌肉注射50％甘油复制急性肾衰模型的方法可靠,可作为综合性实验教学方法在基础实验教学中广泛应用.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(014)001【总页数】4页(P39-42)【关键词】急性肾衰竭;甘油;综合性实验【作者】葛贺;李冰;黄晓莉;杨丽娟;陈立松;芦丽莉;刘艳波【作者单位】北华大学基础医学院,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R586急性肾衰竭(acute renal failure，ARF)是指由各种原因引起的双肾泌尿功能在短期内急剧障碍，可导致代谢产物在体内迅速积聚，水、电解质和酸碱平衡紊乱，出现氮质血症、高钾血症和代谢性酸中毒，并由此发生的机体内环境严重紊乱的临床综合征［1］．ARF按发病可分为肾前性、肾性和肾后性三大类．ARF是临床常见的危重病之一，其病情复杂、发展急骤，常常伴有尿毒症的发生，死亡率较高，一直受到医学界的高度重视，因此在实验教学及基础研究中经常进行动物模型的复制［2］．本文以50%甘油大腿肌肉注射的方法复制家兔ARF的动物模型并进行实验性治疗，进而探讨ARF的发病机制及治疗原则，为后续临床课的学习奠定坚实的基础．1 材料与方法1．1 药品与器材BL-420E+生物机能实验系统;婴儿秤;兔手术台;哺乳动物手术器械一套;分光光度计;离心机;水浴锅;pH计;25%水合氯醛溶液;50%甘油;0．1%呋塞米溶液;10%葡萄糖酸钙溶液;5%碳酸氢钠溶液;肌酐测定试剂;尿素氮测定试剂等．1．2 实验动物成年家兔15 只，体质量2．5 ～3．0 kg，雌雄不限．1．3 ARF 造模方法1)实验前24 h，采血5 mL备用．然后称重，向其后腿肌肉内注射50%甘油溶液(10 mL/kg体质量)，在对照兔的相同部位肌内注射生理盐水(10 mL/kg)，注射后多喂蔬菜．2)24 h后捉拿家兔，称重并麻醉(耳缘静脉注射25%乌拉坦溶液4 mL/kg)，并仰卧固定于兔手术台上．3)自尿道口插入以液状石蜡润滑的导尿管导尿．如尿量过少，则下腹部剪毛，在耻骨联合处上1．5 cm处正中切口，长约4 cm，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，并将膀胱翻向体外，在膀胱底部找到2条黄白颜色柔软的输尿管，在输尿管靠近膀胱处用线结扎．略等片刻(待输尿管略充盈后)，用眼科剪剪一小口，向肾盂方向插入导尿管，结扎固定，收集尿液，用于尿蛋白及尿液肌酐浓度测定．4)颈部剪毛，切口，分离一侧颈总动脉，做颈总动脉插管(以备取血用)，并与压力换能器相连，描记血压曲线．连接肢体导联电极，记录心电图变化．5)分离另一侧颈静脉，做颈外静脉插管后，输入5%葡萄糖溶液(100 mL/kg，速度为50滴/min)，以保证有足够的尿量，自输液开始记录1 h尿量．6)颈总动脉取血5 mL，离心(2 500 r/min，10 min)，取血清测定pH、尿素氮、肌酐等含量．1．4 治疗方法1)纠正酸中毒:当 pH＜7．2、或 CO2CP＜13．5 mmol/L时，在颈外静脉注射5%碳酸氢钠溶液4 mL/kg．2)纠正高钾血症:2 min后在颈外静脉缓慢注射10%葡萄糖酸钙溶液2 mL/kg．3)利尿剂:5 min后给予0．1%呋塞米溶液0．4 mL/kg静脉缓慢滴注．1．5 观察指标对比观察动物阴性对照、模型组及治疗组血肌酐、血尿素氮、血液pH、尿量、尿蛋白及尿肌酐的含量;对比观察血压及心电图的改变．1．6 统计学方法数据采用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11．0统计软件包处理，用Excel作图．应用F检验进行方差分析，以q检验判断差异显著性．2 结果2．1 血压及心电图变化2．1．1 正常家兔血压、心电图描记应用BL-420E+生物机能实验系统描记家兔血压及心电图，其结果如图 1所示，家兔心率256次/min，收缩压约 96 mmHg，舒张压约77 mmHg，平均血压约80 mmHg;其二导联心电图为:P波振幅(0．082 ±0．008)mV，R 波(0．232 ±0．010)mV，T 波(0．093 ± 0．010)mV，PR 间期(52．940 ± 4．282)ms，QRS 间期 (138．20 ±1．083)ms，QT 间期(189．40 ± 5．235)ms，ST 间期(7．932 ±0．682)ms．图1 正常家兔血压及心电图Fig．1 Blood pressure and electrocardiogram in normal rabbits2．1．2 模型组家兔的血压、心电图描记如图2所示，模型组家兔心率为186次/min，收缩压约117 mmHg，舒张压约98 mmHg，平均血压约80 mmHg，与正常对照组比较，其心电图最明显的变化为T波高耸，QRS波增宽．图2 模型组家兔血压及心电图Fig．2 Blood pressure and electrocardiogram change in model group2．1．3 治疗组家兔血压、心电图描记如图3所示，治疗组家兔心率为235次/min，收缩压约115 mmHg，舒张压约93 mmHg，平均血压约80 mmHg，与模型组比较，其心电图逐渐恢复正常．图3 治疗组家兔血压及心电图Fig．3 Blood pressure and electrocardiogram change in treatment group2．2 血肌酐、尿素氮含量、血pH及尿肌酐检测为了判定家兔肾功能，对其血肌酐、血尿素氮、血pH及尿肌酐分别进行了检测，其结果见表1．表1 各组家兔血肌酐、尿素氮含量及pHTab．1 Creatinine，urea nitrogen contents in blood and plasm pH in each group*:与阴性对照组比较 P＜0．05;Δ:与模型组比较 P＜0．05．组别 c(血肌酐)/(μmol·L－1) c(血尿素氮)/(mmol·L－1) c(尿肌酐)/(μmol·L－1)pH阴性对照组11．25 ±6．02 3．48 ±1．16 25．25 ±9．34 7．42 ±0．02模型组 28．87 ±8．04* 7．23±2．12* 30．25 ±8．27 7．14 ±0．13治疗组 18．48±7．06Δ4．98±1．76Δ24．71 ±7．99 7．28 ±0．082．3 尿量变化3组动物经膀胱插管进行尿量检测，其结果如图4所示，与阴性对照组比较，模型组动物尿量明显减少，而治疗组动物尿量明显增加，表示肾功能逐渐恢复正常．图4 各组家兔尿量监测结果Fig．4 Urine volume monitoring results in each group3 讨论在机能实验学教学中，ARF动物模型的复制的方法主要有:给予硝酸铀，皮下注射HgCl2溶液，给予去甲肾上腺素，肾动脉夹闭及注射甘油溶液等．由于HgCl2、硝酸铀毒性较大，可对人及环境构成潜在危害，因而较少使用;而肾动脉夹闭法手术较繁琐，对于本科专业学生较难;注射去甲肾上腺素复制动物模型稳定性较差，因此，肌肉注射甘油简便可行，无毒，不污染环境，因此，是ARF模型复制常采用的方法［2］．确定ARF模型复制是否成功需测定血清中BUN和Cre的含量，而这两项指标与食物中的蛋白摄入量有关，因此，采用家兔这种非食肉动物复制ARF模型可减少食物蛋白干扰，同时有足够的血量进行实验，具备一定的优越性［3］．家兔肌肉注射甘油后，由于甘油的高渗透性造成局部体液外渗，肢体肿胀，引起血容量降低;同时血管受压，回来不畅，进一步加剧了有效循环血量的降低，导致交感神经系统兴奋性增加，使肾血流量减少;血浆外渗，血液黏度增高，肾血管阻力进一步增加，肾小球滤过率下降进一步降低，出现少尿及代谢产物在体内潴留;另外，甘油的高渗透性使肌肉及肌肉血管溶解，肌红蛋白、血红蛋白释放入血，短时间内产生大量肌红蛋白管型，阻塞肾小管导致管内压力升高，进而引起囊内压增加及肾小球有效滤过压的降低，过滤率随之减少［4-5］;高肌红蛋白血症使其滤过而进入肾小管，在酸性环境下易解离为铁色素及铁蛋白，通过铁色素脂质过氧化作用释放大量的氧自由基而直接损伤肾小管上皮细胞，进而引起原尿返流至肾间质，间质水肿反过来又压迫肾小管，使肾小球的滤过率进行性降低［6-7］．本实验发现，应用50%甘油10 mL/kg肌注，可复制出较稳定的ARF模型，模型组动物血清中BUN，Cre水平明显高于阴性对照组，血液pH降低，出现代谢性酸中毒．二导联心电图显示:其T波高耸，QRS波增宽，Q-T间期缩短，尿液中肌酐含量亦较高．经碳酸氢钠、氯化钙及呋塞米溶液治疗后，其血中尿素及肌酐含量明显降低，pH逐渐恢复正常，尿肌酐含量稍降低，但无统计学意义，而每分钟尿量明显增加，与模型组比较差异具有统计学意义(P ＜0．05)．鉴于此，本综合性实验在北华大学2009级临床医学及2009级影像学专业机能学实验教学中率先使用，结果证实该实验方法可靠，结果较稳定，重复性好．不仅能进一步加强学生对教材知识的理解，而且还能树立本科医学生动手能力及对科研的信心，为完善本科学生泌尿系统的综合性实验奠定了坚实的基础．综上所述，甘油复制ARF模型的特点是:建模简单易行，只需一次性注射，整个模型周期较短，模型稳定性及动物存活率都较高［8］．另外，甘油引起的ARF兼有肾缺血及内源性毒性物质对肾脏损伤的双重作用，对理解异型输血、挤压综合征等病因引起的肾衰具有重要指导意义［9］．参考文献:【相关文献】［1］李桂源．病理生理学［M］．北京:人民卫生出版社，412-421．［2］万洁，许崇泰．两种方法复制家兔急性肾衰模型的对比研究［J］．科技创新导报，2010(14):6-8．［3］ Wan Jie，Xu Chongtai．The Comparative Study in Rabbits with Acute Renal Failure Models Copied with Two Different Methods［J］．Technology Innovation Herald，2010，14:6-8．［4］ Chow K M，Szeto C C．Myoglobinuric Renal Failure［J］．J Emerg Med，2004，26(4):461-462．［5］ Rodrigo R，Bosco C，Herrera P，et al．Amelioration of Myoglobinuric RenalDamage in Rats by Chronic Exposure to Flavonol-Rich Red Wine［J］．Nephrol Dial Tmnsplant，2004，19(9):2237-2244．［6］ Singh D， Chander V， Chopra K． Carvedilol， an Antihypertensive Drug with Antioxidant Properties，Protects against Glycerol-induced Acute Renal Failure［J］．Am J Nephrol，2003，23(6):415-421．［7］ Hobbs J B，Chusilp S，Kincaid-Smith P，etal．The Mechanism of Glycerol-Induced Acute Renal Failure［J］．J Lab Clin Med，1976，88(1):44-53．［8］ Hu W L，Ma Y J．Effect of Glycerol-Induced Acute Renal Failure in Rabbit with Ligusticum Wallichii on Thromboxane B2，6-Keto-Prostaglandin F1 Alpha/thromboxaneB2［J］．Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi，1993，13(9):549-500．［9］赵自刚，牛春雨，侯亚利，等．两种家兔急性肾功能衰竭模型复制的方法学比较［J］．张家口医学院学报，2004，28(5):21-26．。

缺血性急性肾功能衰竭动物模型的建立
栾韶东;孙连杰;何永成;万启军;徐艺;许慧丽
【期刊名称】《深圳中西医结合杂志》
【年(卷),期】2005(15)4
【摘要】目的探讨大鼠缺血性急性肾功能衰竭模型建立。

方法采用切除大鼠右肾并钳闭左肾动脉的方法,分别在1、6、12、24、36h测定肾功能,观察肾组织形态学改变。

结果模型建立后血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)于再灌注后6h开始上升,于24h达到高峰,肾组织24h后出现肾小管细胞坏死脱落,管腔内可见细胞碎片及管型,管腔明显扩张,肾小球无明显改变。

结论通过切除大鼠右肾并钳闭左肾动脉的方法可成功建立缺血性急性肾功能衰竭动物模型。

【总页数】3页(P197-198)
【关键词】肾功能衰竭;大鼠;动物模型
【作者】栾韶东;孙连杰;何永成;万启军;徐艺;许慧丽
【作者单位】深圳市第二人民医院肾内科;深圳市高级职业技术学院
【正文语种】中文
【中图分类】R-332
【相关文献】
1.短暂肾缺血建立急性肾功能衰竭动物模型 [J], 陈宁;黄迪;李卓然;盛旦;赵娟;叶静;刘欣;裴爱萍
2.建立急性肾功能衰竭实验动物模型的研究进展 [J], 梁自豪;徐强;陈臻毅;饶军华
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4.新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型的建立及神经干细胞在缺氧缺血性脑病中的变化规律探讨 [J], 尹晓娟;巨容;封志纯
5.新生鼠缺氧缺血性脑病动物模型的建立及神经干细胞在缺氧缺血性脑病中的变化规律探讨 [J], 尹晓娟;巨容;封志纯
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急性脏器功能衰竭动物模型的建立及其机理探讨
马兰
【期刊名称】《中国急救医学》
【年(卷),期】1996(000)003
【摘要】按Ｓｈｗａｒｔｚｍａｎ反应原理，用内毒素或疫苗加肾上腺素类药物建立兔急性呼吸窘迫综合征，急性出血性胰腺炎和稳性肝损实验模型，证实感染所致受侵脏器循环对肾上腺素类物质性增高是其致敏表现之一。

【总页数】1页(P1)
【作者】马兰
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R590.2
【相关文献】
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一、实验目的1. 了解大鼠肾衰竭模型的建立方法；2. 观察肾衰竭大鼠的病理变化；3. 探讨肾衰竭大鼠的肾脏功能改变。

二、实验材料1. 实验动物：雄性SD大鼠，体重200-220g；2. 实验试剂：血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿蛋白定量试剂盒；3. 实验仪器：电子天平、显微镜、离心机、生化分析仪等。

三、实验方法1. 实验动物分组：将大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组和对照组，每组10只。

2. 建立肾衰竭模型：采用5/6肾切除术方法建立肾衰竭模型。

具体操作如下：（1）大鼠麻醉后，消毒腹部皮肤；（2）切开腹腔，找到左肾；（3）切除左肾上、下极；（4）缝合腹腔，术后给予抗生素预防感染。

3. 观察指标：（1）血清Scr、BUN、尿蛋白定量；（2）肾脏病理变化；（3）肾脏功能。

4. 治疗方法：治疗组在术后第2天开始给予中药灌胃，每天1次，连续灌胃8周。

对照组给予等体积的生理盐水灌胃。

5. 数据处理：采用SPSS 20.0软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）。

四、实验结果1. 血清Scr、BUN、尿蛋白定量结果：（1）与正常组相比，模型组大鼠血清Scr、BUN、尿蛋白定量显著升高（P<0.01）；（2）与模型组相比，治疗组和对照组血清Scr、BUN、尿蛋白定量显著降低（P<0.05）。

2. 肾脏病理变化：（1）正常组肾脏组织结构完整，肾小球、肾小管和肾间质无明显病变；（2）模型组肾脏组织结构破坏，肾小球萎缩，肾小管扩张，肾间质纤维化明显；（3）治疗组和对照组肾脏组织结构较模型组有所改善，肾小球萎缩减轻，肾小管扩张减少，肾间质纤维化程度降低。

3. 肾脏功能：（1）与正常组相比，模型组大鼠肾脏功能显著降低（P<0.01）；（2）与模型组相比，治疗组和对照组肾脏功能显著提高（P<0.05）。

五、实验讨论1. 肾衰竭模型的成功建立：通过5/6肾切除术方法成功建立了肾衰竭大鼠模型，模型组大鼠血清Scr、BUN、尿蛋白定量显著升高，肾脏组织结构破坏，肾脏功能降低，符合肾衰竭的临床表现。

急性肾功能衰竭及肾功对药物作用的影响肾脏是人体重要器官之一，对调节和维持人体内环境的稳定有重要作用。

当各种病因引起肾脏的泌尿功能在短期内急剧下降，机体内环境将会发生严重紊乱，临床表现有尿量和尿成份的变化、•氮质血症、高钾血症和代谢性酸中毒。

其发病机制主要与肾血液灌流减少、肾小管阻塞、肾小管原尿返漏等因素有关。

【实验目的】复制中毒性肾功能衰竭的动物模型。

观察急性肾功能衰竭时家兔出现的各种功能代谢变化，•进一步探讨急性肾功能衰竭发生的机理。

【实验原理】用升汞引起急性肾小管坏死（ATN）复制中毒性肾病，并观察少尿期主要机能代谢变化。

【实验对象】家兔(体重在2-2.5kg)【器材、药品】1%HgCl2、0.9%NaCl溶液、1%普鲁卡因、0.2%肝素钠溶液、肌酐标准应用液、苦味酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、3%焦锑酸钾溶液、无水乙醇、氢氧化钙、钠标准应用液、pH 12.0磷酸盐－氢氧化钠缓冲液、724型分光光度计、离心机、恒温水筒、5ml离心管、5ml 注射器、0.5ml、2ml、5ml•刻度吸管、手术器械、火焰光度计、血气分析仪。

【方法步骤与观察项目】本实验以一般状态、尿量、尿蛋白、血浆肌酐、尿肌酐、内生肌酐清除率、•血浆钠、尿钠、血浆钾、滤过钠排泄分数、酚红排泄率、肾形态学观察为观察指标。

(一)复制模型：在实验前•24•小时取两只家兔称重后，•一只肌肉(或皮下)注射1%HgCl2(1.2ml╱kg)造成急性肾功能衰竭，另一只在相同部位注射等量的生理盐水作为正常对照。

(二)取上述两只家兔分别称重固定于兔台上，耳缘静脉注射5%葡萄糖溶液（15ml/kg），以保证有足够的尿量。

(三)颈部剪毛、局麻、作颈动脉插管，取血置于盛有肝素的离心管内，离心(2000rpm，15min)后取血浆以备测定血中肌酐钠浓度。

(四)腹部剪毛、局麻，在耻骨联合上1.5cm处作腹正中切口，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，抽取膀胱中的尿液以备作尿肌酐、尿钠浓度测定，•分离两侧输尿管，作输尿管插管，收集1h尿液，换算成每分钟排尿量。

肾衰竭大鼠模型实验技术原理
肾衰竭大鼠模型制备：
1. 肌肉注射麻醉，选取背部左侧切口，暴露左肾，剥离肾包膜，将肾的上下级各1/3切除，明胶海绵压迫止血。

一期手术后7天，开始进行二期手术。

同样方法麻醉，背部右侧切开暴露右肾，结扎肾蒂，摘除右肾。

假手术组与5/6NT动物同时进行二次手术，但仅剥离肾包膜暴露肾脏后关腹。

5/6NT组于二期手术后30、60、90天时，每组随机选取15、15、18只大鼠处死，进行分析。

2. 样本采集和指标测定：麻醉下心脏采血，收集后经离心分离出血清，尿液和血清均保存于-20°冰箱。

取左肾组织称重，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。

检测24小时尿蛋白、血清CR及BUN，肾组织做病理分析。

肾衰竭大鼠模型特点：5/6肾切除后，系膜细胞和系膜基质增生，肾小球硬化，肾小管灶状萎缩，间质纤维化，表现出于人类肾脏纤维化相一致的病理过程。

5/6肾切除组24小时尿蛋白量、血BUN、血cr 水平明显升高。

残肾的肾重/体重逐渐增加，到术后90天几乎接近假手术组大鼠左肾肾重，体重。

肾衰竭大鼠模型模型评估和应用：5/6肾切除CRF模型符合肾小球高度滤过致肾衰竭学说，其优点是在保护残存肾组织相对正常的情况下造成残存肾组织超负荷工作模型，排除了各种原发性肾脏病的致病因素对残存肾单位的影响，使影响因素简单化。

该模型的缺点是需要有相应的手术场地，对操作技能要求高，且要防止出血和术后感染，模型制备周期较长。

急性肾功能不全10级临床医学滨1班潘彬彬20102090127【实验目的】学习用氯化汞复制急性中毒性肾功能不全的动物模型；观察急性肾功能不全时蛋白尿、血肌酐、尿肌酐、酚红排泄率的变化及肾形态学的改变，并根据实验结果分析和讨论致病因素及导致急性肾功能不全的可能发病机制。

【实验材料】家兔；分光光度计，光学显微镜，离心机，恒温水浴锅；氯化汞，氨基甲酸乙酯，酚红，NaOH，醋酸，碱性苦味酸，肌酐标准应用液，生理盐水，葡萄糖。

【实验方法】1.急性肾功能不全模型复制：于实验前24h，取8只家兔，称重，一半作为实验兔，按0.8~1.0ml/kg体重剂量皮下或肌肉注射10g/L氯化汞造成急性肾功能不全备用（已经造好）；另一半皮下或肌肉注射等量生理盐水作为对照兔.2.动物手术（1）麻醉固定：按5ml/kg体重剂量经耳缘静脉注射200g/L氨基甲酸乙酯麻醉家兔。

兔麻醉后，仰卧固定。

（2）颈总动脉插管：颈部正中剪毛，切开皮肤分离一侧颈总动脉，结扎颈总动脉远心端，用眼科剪在动脉壁上剪一小口，向近心端方向插入动脉插管并结扎固定，以备采血。

（3）采集尿液：下腹部剪毛，从耻骨联合向上沿中线作约4cm的切口，沿腹白线打开腹腔，暴露膀胱，用注射器抽取膀胱内尿液2ml，作尿肌酐、尿常规检查用。

（4）膀胱插管，并结扎尿道。

手术完毕后，用温热的生理盐水纱布覆盖颈部和腹部的创口。

3.实验观察（1）血清和尿液肌酐含量测定（苦味酸沉定蛋白法）：静脉输液前打开动脉夹，经动脉导管放血3ml于干燥试管内，静置10min后，3000r/min离心15min，小心吸取血清置于另一干净试管中，测血肌酐用。

取硬质试管3支编号，分别为空白管、标准管及测定管。

按下表加样，混匀，37℃水浴30min，用分光光度计以波长510nm，空白管调零，读OD值。

然后，各管加50%乙酸溶液两滴，放置6min后，再测OD’值。

按（1）式计算血清肌酐（[Cr]p）：血清肌酐测定单位/ml 标准管测定管空白管肌酐标准应用液/(0.05mg/ml) 0.20 ——血清—0.20 —蒸馏水——0.20 碱性苦味酸 2.0 2.0 2.0[Cr]]p（mg%）=(OD测-OD’测)/(OD标-OD’标)*0.01*0.2*100 (1)按下表加样，混匀，放10min后加蒸馏水6.0ml，混匀，用分光光度计以波长530nm，空白调零，读OD值。

急慢性肾功能衰竭动物模型研究进展作者：何鹏飞高敏张娅来源：《云南中医中药杂志》2017年第12期摘要：人类疾病动物模型是现代中药药理药效研究的重要方法和手段。

近年来，急性肾功能衰竭（ARF）和慢性肾功能衰竭（CRF）动物模型的建立方法不断完善，不同的动物模型均有其各自的特点及运用范围。

笔者对近年来文献中建立ARF和 CRF 动物模型的操作方法、模型特点与临床运用进行归纳和总结，以期为中医药研究者根据各自研究的侧重点合理选用模型提供有益参考。

关键词：急性肾功能衰竭（ARF）；慢性肾功能衰竭（CRF）；动物模型；综述中图分类号：R965.1文献标志码：A文章编号：1007-2349（2017）12-0080-05中医药是中华传统文化之瑰宝，近年来，随着中医中药的广泛运用，肾衰竭患者看到了治疗自身疾病的希望。

中医药治疗肾衰竭有悠久历史，古代医学典籍中记载颇多，用现代科学方法阐明中医药治疗肾衰竭的科学内涵，对中医药学的发展具有极大的促进作用。

其中，人类疾病动物模型是现代中药药理药效研究的重要方法和手段。

笔者对近年来文献中建立ARF和CRF 动物模型的操作方法、模型特点与临床运用进行归纳和总结，以期为中医药研究者根据各自研究的侧重点合理选用模型，明确中医药治疗疾病的科学内涵提供有益参考。

当各种病因引起肾功能严重障碍时，人体内环境就会发生紊乱，其主要表现为代谢产物在体内蓄积，水、电解质和酸碱平衡紊乱，并伴有尿量和尿质的改变以及肾脏内分泌功能障碍引起一系列病理生理变化，称之为肾功能衰竭。

根据发病的急缓和病程长短分为：急性肾功能衰竭（acute renal failure，ARF）和慢性肾功能衰竭（chronic renal failure，CRF）。

动物模型是有效认识疾病发生，发展规律和研究防治措施的重要途径之一。

近年来随着实验研究的不断深入，肾功能衰竭实验动物模型的造模方法有了长足发展。

笔者对近年来建立肾功能衰竭实验动物模型的研究方法做一综述。

急性肾功能衰竭【摘要】目的：复制家兔升汞中毒致急性肾功能衰竭的动物模型。

观察升汞中毒的一般状态，尿质和量的变化,以及肾脏人体形态及病理组织学改变。

根据实验指标判断、分析和讨论急性肾功能衰竭的发病机制及病理生理变化。

方法：复制家兔升汞中毒致急性肾功能衰竭的动物模型，观察其病理特征。

结果：尿蛋白含量增高，出现管型。

结论：学习了制作了家兔升汞中毒致急性肾功能衰竭的模型，该模型的建立助于掌握急性肾功能衰竭的特点及其对动物机体的影响。

关键字：重金属类毒物、肾小管坏死、血尿素氮。

材料及方法：1.实验前一天取家兔12只，其中10只做为实验组，另外2只作为对照组，在实验组家兔的皮下注射1%氯化汞适量，在对照组家兔皮下注射等量的生理盐水作为对照。

2.实验时将家兔称重后，以20%乌拉坦溶液以5ml/kg的剂量由耳缘静脉慢慢推注，进行全身麻醉，期间观察动物的肌张力、呼吸频率、角膜反射作为观察麻醉的深度指标。

3.将家兔仰卧固定于兔试验台上，自尿道口插入导尿管导尿，如果尿量过少，下腹剪毛在耻骨联合上1.5厘米处正中切口，长约4厘米，分离皮下组织沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，用注射器取适量尿液备测尿蛋白、尿沉渣镜检。

4.颈部剪毛，做颈部切口，分离右侧颈总动脉、左侧颈静脉，分别做颈总动脉插管和颈静脉插管，经总动脉放血5ml，离心后取血清备测尿素氮。

5.尿蛋白定性检查：用吸管吸取尿液3ml加入试管内，用试管夹夹着在酒精灯外焰上加热至沸，多数情况下尿液煮沸后会变浑浊此时加入5%醋酸溶液3-5滴，继续加热煮沸，若尿液由浑浊变为透明则为尿酸所致；若仍浑浊则表示尿液中含有尿蛋白，⑴取收集的尿液2ml至于离心管内离心5分钟，使尿液中的有形成分沉淀，离心后去掉上清液。

⑵将试管内的尿沉渣混匀，吸取一滴加于载玻片中央，用盖玻片覆盖后镜检。

⑶暗视野下先低倍镜后高倍镜，移动视野，寻找并观察管型。

（注：管型是蛋白质、细胞及其碎片等物质在远曲小管、集合管中凝固形成的圆柱体蛋白聚体）7.血清尿素氮的测定：所需试剂：动物的血清、尿素氮标准应用液Ⅰ、尿素氮标准应用液Ⅱ、蒸馏水、二乙酰一污一氨硫脲液（试剂Ⅰ）、酸混合液（试剂Ⅱ）配置方法如下：721型分光光度计上用520mm波长比色，以空白管调零，读取各测定管及标准管的吸光度。