复方茵陈糖浆中丹参素钠含量的测定

江西医学院学报２００８年第４８卷第６期　Ａｃｔａ　Ａｃａｄｅｍｉａｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ　Ｊｉａｎｇｘｉ　２００８，Ｖｏｌ　４８，Ｎｏ　６　・３７　ｊ　复方茵陈糖浆中丹参素钠含量的测定　杨　乐　（南昌大学第二附属医院药剂科，南昌３３０００６）　

摘要：目的建立复方茵陈糖浆中丹参素钠含量的方法。方法　以固相萃取小柱富集，甲醇一ｏ．１　磷酸溶液（１Ｏ：　９０）为流动相，Ａｌｌｔｉｍａ　Ｃ　色谱柱（５　ｍ，４．６　ｍｍ×２５０　ｒａｍ）为固定相，体积流量为１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，紫外可见检测器在　２８１　ｎｍ波长下测定复方茵陈糖浆中丹参素钠的含量。结果丹参素钠在０．７８４　４．７０４　ｇ具有良好的线性关系，　平均回收率为９８．７　，ＲＳＤ为０．３８　。结论　高效液相色谱法可以作为复方茵陈糖浆中丹参素钠的测定方法，以　控制其质量。　关键词：复方茵陈糖浆；丹参素钠；高效液相色谱法　中图分类号：Ｒ９２７．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１ＯＯｏ一２２９４（２００８）０６－－００３７－－０２　

复方茵陈糖浆由茵陈、丹参、龙胆、大青叶和车　前草等五味药组成，具有活血化瘀、清热解毒的功　效，临床上用于治疗急、慢性黄疸型、病毒型肝炎，经　临床多年应用验证，疗效确切。由于此方的提取工　艺为水提醇沉法，为了更好地控制其内在质量，作者　采用固相萃取小柱富集、高效液相色谱法分析，对其　水溶性活性成分丹参素钠含量进行测定，以期为完　善该制剂的质量。　

ｌ　材料　复方茵陈糖浆（江西济生制药厂生产，批号：　０４０６０８、０４０６０９、０４０６１０、０４０６２０、０４０６２１、０４０７２０、　０４０７２１、０４０７１５、０４０７１６、０４０７１７），Ｗａｔｅｒｓ　２６９５高　效液相色谱仪、Ｗａｔｅｒｓ　２９９６　ＰＤＡ紫外可见检测器　均为美国Ｗａｔｅｒｓ公司生产，甲醇（色谱纯，美国　Ｂ＆Ｊ公司生产），Ｍｉｌｌｉ—Ｑ超纯水（美国Ｍｉｌｌｉｐｅｒ纯　水机生产），磷酸（分析纯，上海化学试剂厂生产），丹　参素钠对照品（１１０８５５—２００４０５）由中国药品生物制　品检定所提供，Ａｌｌｔｅｅｈ固相萃取柱（Ｃ　。，５００　ｍｇ，　２　ｍＬ；美国Ａｌｌｔｅｃｈ公司生产）。　

２方法与结果　２．１色谱条件　Ａｌｌｔｉｍａ　Ｃ１８色谱柱（５　ｍ，４．６　ｍｍ×２５０　ｒａｍ）为　固定相；流动相为甲醇一０．１　磷酸溶液（１０：９０）［１　；　体积流量：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长２８１　ｎｍ；柱温：　３Ｏ℃。实验选择该流动相，丹参素钠出峰时间约　１５　ｍｉｎ，样品中丹参素分离效果较好，干扰小，重现　性较好，且阴性无干扰。用５　ｍＬ水洗脱萃取小柱，　丹参素钠损失小，洗脱完全。见图１。　

收稿日期：２００８—０６—１６　

Ｊｆ＾　一　Ａ　Ｏ　Ａ：丹参素钠对照品；Ｂ：复方茵陈糖浆；Ｃ：缺丹参的阴性样品溶液　图１　复方茵陈糖浆中丹参素钠的高效液相色谱图　

２．２线性关系考察　精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成　０．３９２　ｍｇ／ｍＬ的溶液，分别精密量取１．０、２．０、　３．０、４．０、５．０、６．０　ｍＬ，分别置１Ｏ　ｍＬ量瓶中，用水　稀释至刻度，摇匀。精密量取２Ｏ　Ｉ　，注入高效液相　色谱仪，测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为　纵坐标，绘制标准曲线。统计学分析：采用直线相关　性分析。Ｙ一６３３　３８９Ｘ一１８　５９７，ｒ＝＝：０．９９９　８。结果　表明丹参素钠在０．７８４￣４．７０４　ｇ具有良好的线性　关系。见图２。　

３＿加０　０００　３　０００　０００　２　５００　０００　２　０００　０００　Ｉ｛ｊ００　０００　１　０００　０００　５００　０００　Ｏ　

图２丹参素钠线性回归方程　・　３８　・　江西医学院学报２００８年第４８卷第６期　ＡｃｔａＡｃａｄｅｍｉａｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ　Ｊｉａｎｇｘｉ　２００８，Ｖｏｌ　４８，Ｎｏ　６　２．３精密度试验　取同一供试品溶液，重复进样６次，每次２０　Ｌ。　丹参素钠峰面积的ＲＳＤ为０．７６　９／６。表明仪器精密　度良好。　２．４稳定性试验　取同一供试品溶液６份，于０、２、４、８、１２、２４　ｈ　各测定１次，共测定２４　ｈ。丹参素钠峰面积的ＲＳＤ　为１．８６　（ｎ＝＝＝６）。实验结果表明，供试品溶液在　２４　ｈ内稳定。　２．５重现性试验　取同批号样品５份，按样品测定项下处理并测　定、计算。结果丹参素钠的含量为０．３２　ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ　为１．１５　。　２．６加样回收率试验　精密称取已知含量的复方茵陈糖浆９份，每份　约１　ｇ；分别加入丹参素钠溶液（０．３４５　ｍｇ／ｍＬ）　０．８、１．０、１．２　ｍＬ，按样品测定项下处理并测定、计　算。回收率为９８．７　，ＲＳＤ为０．３８　，见表１。　

表１　复方茵陈糖浆加样回收率实验结果（，ｌ＝９）　

０．９３１　１　０．２９８　０　０．２４２　２　０．９８０　９　０．３１３　９　ｏ．９８０　７　０．３１３　８　１．Ｏ６１　８　ｏ．３３９　８　１．１３Ｏ　４　０．３６１　７　０．３０２　７　１．０６１　７　０．３３９　７　１．０３０　９　０．３２９　９　１．０５２　２　０．３３６　７　０．３６３　２　１．０７４　６　０．３４３　９　ｏ．５３５　９　０．５３５　８　０．５５４　８　０．５５４　８　０．５５５　５　ｏ．５５５　４　０．６３９　２　Ｏ．６３９　２　Ｏ．６６５　７　Ｏ．６６５　７　０．６４０　５　ｏ．６４０　４　０．６９１　Ｏ　０．６９１　０　Ｏ．６９６　１　０．６９６　１　０．７００　ｏ　Ｏ．６９９　９　９８．２４　９９．２　０．３８　９８．２３　９９．４８　９９．４６　９９．７８　９９．７７　９８．９２　９８．９１　１０Ｏ．４４　１００．４２　９９．３６　９９．３５　９９．４３　９９．４２　９８．９５　９８．９４　９８．０４　９８．Ｏ３　

２．７样品测定　精密称取丹参素钠对照品适量，加水制成含　０．１５　ｍｇ／ｍＬ的溶液作为对照品溶液。精密称取复　方茵陈糖浆约２　ｇ，加水１Ｏ　ｍＬ稀释，通过Ｃ　固相　萃取柱收集流出液，用５　ｍＬ水洗脱萃取柱，收集洗　脱液，与流出液合并，置水浴上蒸干；残渣加水适量　使溶解，置５　ｍＬ量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过　０．４５　ｍ滤膜，取续滤液，分别精密吸取对照品溶液　和供试品各２０　Ｌ，注入高效液相色谱仪测定。结　果显示，复方茵陈糖浆中含丹参素钠在０．２４～　０．３２　ｍｇ／ｇ。见表２。　表２　复方茵陈糖浆样品测定结果　批号　称样量　（ｇ）　含景　（ｒａｇ／ｇ）　平均含量　（ｍｇ／ｇ）　ＲＳＤ　（　）　０４０６０８—１　２．０４６　７　０４０６０８—２　１．８７７　６　０４０６０９—１　２．２２３　１　０４０６０９—２　１．９５８　２　０４０６１０—１　２．２９８　７　０４０６ｌＯ一２　２．０９７　７　０４０６２０—１　２．０４９　８　０４０６２０——２　２．０２４　５　０４０６２１—１　２．１１３　３　０４０６２１——２　２．１０６　９　０４０７２０—１　２．２Ｏ１　２　０４０７２０—２　２．１７８　８　２．１６５　５　０４０７２１—２　２．１５８　９　０４０７１５—１　２．０ｏ０　２　０４０７１５—２　２．Ｏ９４　３　０＇４０７１６—１　２．２３１　１　０４０７１６—２　２．２５３　７　０４０７１７—１　２．１０５　６　０４０７１７—２　２．１１３　８　０．３１１　Ｏ．３１４　０．３１０　０．３１３　０．２６６　ｏ．２６８　０．２６２　０．２６４　０．２４４　０．２４６　０．２４３　Ｏ．２４５　Ｏ．２９ｌ　Ｏ．２９４　ｏ．２９１　ｏ．２９３　Ｏ．２７９　０．２８１　０．２７４　Ｏ．２７６　０．２７２　０．２７４　０．２７１　Ｏ．２７３　０．２３７　０．２３９　０．２３８　０．２４０　ｏ．２９９　０．３０１　０．２９４　０．２９７　ｏ．３０７　０．３０６　０．３１２　０．３１２　０．３２２　０．３２２　０．３２４　Ｏ．３２４　Ｏ．３１　Ｏ．５２　ｏ．２７　０．９７　Ｏ．２４　０．６０　０．２９　０．４８　ｏ．２８　１．１２　Ｏ．２７　０．５４　０．２４　０．４８　０．３Ｏ　１．０１　０．３１　１．０４　０．３２　ｏ．３３　３讨论　本实验比较了乙醚、三氯甲烷和正丁醇等萃取　溶剂，由于复方茵陈糖浆含糖量较大，用乙醚、氯仿　和正丁醇振摇提取时容易发生较严重的乳化现　象　，萃取之后难以分层。作者做了相应的实验，　（下转第４１页）　江西医学院学报２００８年第４８卷第６期　ＡｃｔａＡｃａｄｅｍｉａｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ　Ｊｉａｎｇｘｉ　２００８，Ｖｏｌ　４８，Ｎｏ　６　・４１・　式相似；（３）肿瘤供血丰富，适合介人栓塞实验研究；　（４）可随设计要求选择肿瘤移植生长部位；（５）ＭＲＩ　表现与人类肿瘤相似。　制作Ｗａｌｋｅｒ一２５６大鼠肝癌模型应注意的问题：　（１）严格无菌操作，努力将手术打击降到最低，防止　因感染影响大鼠的自然生存期。（２）肝脏肿瘤种植　部位选择在肝左外叶稍靠近肝边缘１～２　ｃｍ处，可　防止损伤大血管，避免增加止血难度和时间。种植　完成后必须充分止血，防止大出血及瘤块被血流冲　出肝脏而种植于腹腔。（３）种植时瘤块为手工切取，　因为无较客观的标准，具有一定的随意性，易造成肿　瘤大小的差异性，对治疗效果可能会产生一定影响，　所以肝内肿瘤种植术时应尽可能选取大小一致的瘤　块。（４）在进行ＭＲＩ检查时，大鼠需要充分麻醉，防　止其在检查时移动体位。　总之，大鼠移植性肝癌模型，其肿瘤血供与人类　原发性肝癌相似，造模周期短，适用于肝癌的介入治　疗和ＭＲＩ检查的研究。　

参考文献：　［１］Ｂｒｕｉｘ　Ｊ，Ｌｌｏｖｅｔ　Ｊ　Ｍ，Ｃａｓｔｅｌｌｓ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ　Ｅｍｂｏｌｉｚａ—　ｔｉｏｎ　Ｖｅｒｓｕｓ　Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｈｅｐａｔ０ｃｅｌ１ｕｌａｒ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ：Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａ　Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｔｒｉａｌ　ｉｎ　ａ　Ｓｉｎｇｌｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，１９９８，２７（６）：１５７８—　１５８３．　［２］Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ　Ｇ，Ｄｕｃｒｅｕｘ　Ｍ，Ｇａｙ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｕｎｒｅｓｅｃｔ—　

ａｂｌｅ　Ｈｅｐａｔ０ｃｅＵｕｌａｒ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｗｉｔｈ　Ｉ　ｉｐｉｏｄｏｌ　Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａ—　ｔｉｏｎ：Ａ　Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ　Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　Ｔｒｉａ１．Ｇｒｏｕｐｅ　ＣＨＣＥＪＪ．Ｈｅｐａ—　ｔｏｌ，１９９８，２９（１）：１２９－１３４．　Ｅ３］Ｌｉ　Ｘ，Ｚｈｅｎｇ　Ｃ　Ｓ，Ｆｅｎｇ　Ｇ　Ｓ．Ａｎ　Ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅ　Ｒａｔ　Ｌｉｖｅｒ　Ｔｕｍｏｒ　Ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ　Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｉｍａｇｉｎｇ　Ｆｅａｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，　２００２，８（６）：１０３５—１０３９．　Ｅ４］Ｔａｎｃｒｅｄｉ　Ｔ，ＭｃＣｕｓｋｅｙ　Ｐ　Ａ，Ｋａｎ　ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　Ｒａｔ　Ｌｉｖｅｒ　Ｍｉｃｒ０ｃｉｒｃｕｌａｔｉ０ｎ　ａｆｔｅｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｈｅｐａｔｉｃ　Ａｒｔｅｒｉａｌ　Ｅｍｂｏｌｉ—　ｚａｔｉｏｎ；Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｅｍｂｏｌｉｅ　Ａｇｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｒａｄｉｏｌｏ—　ｇＹ，１９９９，２１１（１）：１７７—１８１．　Ｅ５］Ｔｒｔｉｂｅｎｂａｃｈ　Ｊ，Ｇｒａｅｐｌｅｒ　Ｆ，Ｐｅｒｅｉｒａ　Ｐ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｇｒｏｗｔｈ　Ｃｈａｒａｃ—　ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｉｍａｇｉｎｇ　Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍｏｒｒｉｓ　Ｈｅｐａｔｏｍａ　３９２４Ａ　ｉｎ　ＡＣＩ　Ｒａｔｓ：Ａ　Ｓｕｉｔａｂｌｅ　Ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ　Ｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉ—　ｚａｔｉｏｎｆＪ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ　Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔ　Ｒａｄｉｏｌ，２０００，２３（３）：２１卜２１７．　［６］范林军，何振平，马宽生，等．兔肝ＶＸ２肿瘤移植模型的复制及　其意义厂Ｊ］．中国普外基础与临床杂志，２００４，Ｉ１（１）：４５—４８．　Ｉ－７］Ｙａｎｇ　Ｒ，Ｌｉｕ　Ｑ，Ｒｅｓｃｏｒｌａ　Ｆ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｌｉｖｅｒ　Ｃａｎｃｅｒ：　Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ａｆｔｅｒ　Ｈｅｐａｔｉｃ　Ａｒｔｅｒｙ　Ｌｉｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｎｆｕｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒ　Ｎｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｇａｍｍａ［Ｊ］．　Ｓｕｒｇｅｒｙ，１９９５，１１８（４）：７６８—７７２．　［８］Ｑｉａｎ　Ｊ，Ｔｒｕｅｂｅｎｂａｃｈ　Ｊ，Ｇｒａｅｐｌｅｒ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｌｙ－Ｉ—　ａｃｔｉｄｅ—。ＣＯ—。ｇｌｙｅｏｌｉｄｅ—。ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｔｒａｎｓａｒｔｅｒｉａｌ　Ｃｈｅｍｏ——　ｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｎ　Ａｎｉｍａｌ　Ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｃａｒｃｉｎｏｍａ　口］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００３，９（１）：９４—９８．　［９］徐静，李旭．肝癌动物模型的建立［Ｊ］．实用肝脏病杂志，２００５，８　（２）：ｌ１６—１１８．　（责任编辑：胡炜华）