生化检验

绪论 临床生物化学检验：IFCC定义为“包含对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用”。 临床生物化学检验的主要任务：①②③④

临床生物化学检验的发展趋势 ①实验室高新技术的发展：分离与分析技术、自动化与酶法分析、标准物质和体外诊断试剂 ②快速小型化检验技术的发展：快速检测试条、小型化多用途检验仪器 ③检验质量控制和系统评估：检验结果可靠有用、检验与临床结合密切

临床生物化学检验与临床医学的关系 与探讨疾病发生机制的关系、与临床疾病诊断和治疗的关系(疾病诊断和早期诊断，判断疾病的严重程度和预后，治疗效果监测，健康普查和咨询)、与临床和基础医学研究的关系

第十章 急性时相反应、急性时相反应蛋白 在急性炎症性疾病如感染、手术、创伤、心肌梗死、恶性肿瘤等，血浆AAT、AAG、Hp、Cp、CRP，以及α1-抗糜蛋白酶、血红素结合蛋白、C3、C4、纤维蛋白原等浓度显著升高或升高；而血浆PA、Alb、TRF浓度则出现相应下降。这些血浆蛋白质统称为急性时相反应蛋白（APP），这种现象称为急性时相反应（APR）。

苯丙酮酸尿症（PKU）：是主要由苯丙氨酸羟化酶缺乏引起的常染色体隐性遗传病，因患儿尿液中排出大量的苯丙酮酸等代谢产物而得名。

同型半胱氨酸正常代谢： 代谢紊乱 一、同型半胱氨酸尿症：是最常见的以HCY（同型半胱氨酸）增高为特征的代谢紊乱。主要有三种原因： ①胱硫醚-β-合成酶缺失(常见)。体液HCY及其前体积聚，Cys和胱氨酸下降。 生化异常：血浆同型胱氨酸(HCY的氧化形式)达到可检测水平，血浆Met升高。尿含有同型胱氨酸和其他含硫氨基酸如Met、甲硫氨酸硫氧化物和Cys的二硫化物和HCY。 ②N5-甲基四氢叶酸转甲基酶缺失(罕见)。血浆Met不升高 ③食物营养缺乏：缺乏维生素B6（胱硫醚-β-合成酶的辅酶）、B12（甲硫氨酸合成酶的辅酶） 二、与心血管疾病：高水平HCY能增加人体自由基的生成，是引发心血管疾病的危险因子 【临床应用】： 血脂正常，胆固醇不高的人群。有严重AS性疾病和家族史人群。有早期(＜50岁)冠心病、脑血管或外周血管病症状的人群。服用氨甲喋呤、氨茶碱、苯妥英等人群中HCY升高的比例较高，有进一步引发血管疾病的可能，需要联合考虑。

继发性氨基酸代谢紊乱：主要发生在肝脏和肾脏疾患（蛋白质营养紊乱）以及烧伤等。 ①肝功能衰竭和氨基酸代谢失衡：肝衰竭时芳香族氨基酸（AAA）在肝脏中的降解减少，其血浆浓度升高；而支链氨基酸（BCAA）在肌肉等组织中的分解没有减少，相反因肝脏降解胰岛素减少、血浆胰岛素升高，促进BCAA进入肌肉，降解增多，导致血浆BCAA浓度下降。正常情况下BCAA/AAA=3.0~3.5，肝病时可显著下降，比值降至1左右往往发生肝性脑病。芳香族色氨酸、苯丙氨酸因血液浓度上升，进入脑组织的量也增加；血浆BCAA下降又导致AAA进入脑细胞的比例增加，这些AAA在脑组织中可形成假性神经递质，是引起肝性脑病和肝昏迷的重要原因。 ②肾脏疾病：由于肾小管损害、肾近曲小管功能障碍引起。某些肾脏疾病时仅有肾小管重吸收氨基酸障碍（氨基酸尿）；有些病人的肾近曲小管的所有重吸收功能均受影响，已经不仅仅是氨基酸尿。

高尿酸血症：是指37℃时，血清中尿酸含量男性超过420μmol/L，女性超过350μmol/L。 由尿酸排泄障碍或嘌呤代谢紊乱引起。肾脏尿酸排泄减少或体内嘌呤来源过多均可导致高尿酸血症。 ①排泄障碍：当GFR下降或近端肾小管对尿酸的重吸收增加或（和）分泌功能减退时，便导致~，一般在慢性肾病时出现。另一种是机制不明的多基因型遗传缺陷引起的原发性~。 ②嘌呤代谢合成紊乱：大多数属于多基因遗传缺陷，机制不明。由酶缺陷引起的占少数 痛风（gout）：是一组嘌呤代谢紊乱所致的疾病 ，由遗传性和（或）获得性的尿酸排泄减少和（或）嘌呤代谢障碍，导致高尿酸血症及尿酸盐结晶形成和沉积，从而引起特征性急性关节炎、痛风石、间质性肾炎，严重者呈关节畸形及功能障碍；常伴尿酸性尿路结石。（仅有高尿酸血症，即使合并尿酸性结石也不称之为痛风）

血清中的蛋白质因为都是由氨基酸组成，性质相似，除清蛋白等少数蛋白质有某种特性可利用染料结合法等方法测定外，其他都需制备特异的抗血清，采用免疫比浊法、免疫扩散法、化学发光免疫法、放射免疫法等方法测定，这些蛋白质就是特定蛋白。 临床所指的特定蛋白质主要有：Alb、PA、AAT、AAG、Hp、AMG、CER、TRF、CRP，以及免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和补体C3、C4，这14种蛋白质，目前已有国际公认的标准参考物质。

血清总蛋白测定 ①凯氏定氮法：参考方法 优点：准确度高，回收率达101.54 % ；精密度好，CV%为0.85% 缺点：操作流程长，程序复杂。各种蛋白质含氮量在疾病状态差异较大 等，但平均为16%,比较准确。 该法主要用作血清蛋白质标准品定值及参考性工作，血清总蛋白常规测定中很少使用。 ②双缩脲法：是临床测定血清总蛋白首选的常规方法 【原理】：血清中蛋白质的两个相邻肽键（-CO-NH-）在碱性溶液中能与二价铜离子作用产生稳定的紫色络合物。生成的紫色络合物颜色的深浅与血清蛋白质含量成正比，故可用来测定蛋白质含量。 优点：显色稳定性好，干扰物质少，试剂单一，方法简便 缺点：灵敏度较低 干扰物质：主要为右旋糖酐，其与反应混合液中的铜和酒石酸结合形成沉淀，影响测定结果的准确度。此外胆红素、血红蛋白、脂浊、某些抗菌素和铵盐等也可干扰结果。

血清清蛋白测定 染料结合法----国内最常用方法是溴甲酚绿（bromcresol green，BCG）法，还有溴甲酚紫（bromcresol purple, BCP）法。BCP法比BCG法受其他血浆蛋白的干扰少，但灵敏度较低，且与非人源性清蛋白结合力相当弱，不适合于测定动物样本中的清蛋白，故BCP法临床应用较少。 【原理】：血清清蛋白(pI4.7)在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料BCG结合形成蓝绿色复合物，其颜色深浅与清蛋白浓度成正比。 优点：BCG法灵敏度高、操作简便、重复性好，既可用作手工操作也可自动分析。但 缺点：该法存在问题较多，主要是试剂标准化、标准品的选用、反应时间等，如不严格掌握，将会对测定结果造成严重影响。 反应时间：要求血清清蛋白的测定在30s内完成（快反应），30s后球蛋白的非特异性反应增高。

第十一章 血糖：血糖是指血液中的葡萄糖。 正常人空腹血糖浓度：3.89～6.11mmol/L。

胰岛素样生长因子(IGF) ：是一种多肽，与胰岛素结构相似，主要为IGFⅠ和IGFⅡ。

高血糖症（hyperglycemia）：血糖浓度高于空腹水平上限6.1mmol/L时称为高血糖症。 临床上常见的病理性高血糖有： 空腹血糖受损（IFG） 糖耐量减低（IGT） 糖尿病（DM）。 低血糖症(hypoglycemia)：是指血糖浓度低于参考范围下限，临床出现以交感神经兴奋和脑细胞缺糖为主要特点的综合征。一般以血浆葡萄糖浓度低于2.8mmol/L时作为低血糖症生物标准。

糖尿病（DM）：是一组由胰岛素分泌不足和（或）作用缺陷所引起的以慢性血糖水平增高为特征的代谢性疾病。 在DM患者中，2型DM占90%~95%，1型DM约为5%~ 10%，其他类型占比例很少。 1999年WHO糖尿病专家委员会提出的病因学分型标准，共分为四大类型即： 1型糖尿病、2型糖尿病、其他特殊类型糖尿病、妊娠期糖尿病。

I型糖尿病：主要是因胰岛β细胞的破坏引起胰岛素绝对不足。 主要是因胰岛β细胞的破坏引起胰岛素绝对不足。按病因和发病机制分为：免疫介导性1型糖尿病、特发性1型糖尿病 一、免疫介导性I型糖尿病 【病因】 遗传易感性：与人类白细胞组织相容性抗原（HLA）有很强关联。 环境因素：常见的有病毒感染（风疹病毒、柯萨奇B病毒等）、化学物质、生活方式、精神应激以及营养成分改变（如牛奶）等。 自身免疫机制：患者血清中存在一些自身抗体，这些抗体有的在发病前数年可以检测到，如血清胰岛细胞胞浆抗体（ICA）、胰岛素自身抗体（IAA）、谷氨酸脱羧酶自身抗体（GADA）等。 【特点】 ①胰岛β细胞的自身免疫性损伤是重要的发病机制，大多数患者体内存在自身抗体为特征。②血清胰岛素或C肽水平低。③胰岛β细胞的破坏引起胰岛素绝对不足，且具有酮症酸中毒倾向，治疗依赖胰岛素。④遗传因素在发病中起重要作用，特别与HLA某些基因型有很强关联。⑤任何年龄均可发病，但常见于儿童和青少年，起病较急。 二、特发性I型糖尿病 该类型少见，主要见于非洲及亚洲人。 特点是具有很强的遗传性，胰岛素明显缺乏，容易发生酮症酸中毒，但缺乏自身免疫机制参与以及与HLA关联的特点。

II型糖尿病：是由多个基因及环境因素综合引起的复杂病，其病因是：遗传+环境因素。 2型糖尿病有更强的遗传易感性，并有显著的异质性。（异质性疾病：病因不是很清楚，并且在现有的研究结果中，未发现一个很统一的病因与机制） 环境因素主要有人口老龄化、生活方式改变、营养过剩、体力活动过少、应激、化学物质等。 【机制】 胰岛素抵抗（IR）和胰岛β细胞功能减退是2型糖尿病的主要发病机制，是指胰岛素作用的靶器官（主要是肝脏、肌肉和脂肪组织）对正常浓度的胰岛素不能产生正常的生物学反应，即胰岛素敏感性降低。 胰岛素抵抗的原因包括遗传和环境两方面因素。 在DM发生发展过程中，出现的高血糖和脂代谢紊乱可导致胰岛素敏感性进一步降低和胰岛β细胞功能损伤，分别称为葡萄糖毒性（glucotoxicity）和脂毒性(lipotoxicity)。 【特点】 ①常见肥胖的中老年成人，偶见于幼儿。②起病较慢，在疾病早期阶段可无明显症状，常以并发症出现为首诊。③血清胰岛素水平可正常或稍高，在糖刺激后呈延迟释放。④自身抗体呈阴性。⑤早期单用口服降糖药一般可以控制血糖。⑥自发性酮症酸中毒较少。⑦有遗传倾向，但与HLA基因型无关。

糖尿病患者由于胰岛素的绝对或相对不足，导致机体出现糖、脂肪、蛋白质、水及电解质等多种物质的代谢紊乱。 :1、糖代谢紊乱：由于胰岛素的绝对或相对不足，葡萄糖在肝脏、肌肉和脂肪组织的利用减少，肝糖原分解和糖异生加速，糖原合成减少，引起血糖增高。 血糖过高如超过肾糖阈可产生渗透性利尿。严重高血糖可使细胞外液的渗透压急剧升高，引起脑细胞脱水，出现高渗性高血糖昏迷。 2、脂代谢异常：由于胰岛素绝对或相对不足，脂肪合成减少，脂肪分解增加，血中游离脂肪酸和甘油三酯浓度增加。 在胰岛素严重不足时，因为脂肪大量分解，生成酮体过多，当超过机体对酮体的利用能力时，造成酮血症，严重时引起酮症酸中毒。 3、蛋白质代谢异常：由于胰岛素绝对或相对不足，蛋白质合成减少，分解加速，导致机体出现负氮平衡、体重减轻、生长发育迟缓等现象。 糖尿病典型的临床表现是“三多一少”，即多饮、多食、多尿、体量减轻 。