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过表达分析和互补测验等对候选基因进行功能验证。图１作物重要数量性状基因的发掘与应用流程图
表１植物中已克隆的主要ＱＴＬｓ
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３
ＳＳＲ分子标记技术及应用３．１
ＳＳＲ分子标记的概念、特点和获得
ＳＳＩｔ是建立在ＰｃＲ技术上的一种新型的分子标记，是一种以ｌ－６个核苷酸为重复单位组成的长达几十个核苷酸的串联序列。英文全称：ｓｉｍｐｌｅ．ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｐｅａｔ，简称ＳＳＩｔ。中文称：简单序列重复或简单重复序列。
ＳＳＲ也称微卫星ＤＮＡ（ＭｉｃⅫａｔｅｍｔｅＩ）ＮＡ）或短串联重复
（Ｂｈｏｌｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＩｔ）。微卫星ＤＮＡ重复单位长度一般为
２－６个ｂｐ，一个ＳＳＩｔ的总长度可达几十到几百个ｈｐ。每个微卫星ＤＮＡ都由两部分组成，即核心序列和两翼的序列，核心序列即前面所称“重复”的短序列。重复序列的两端即两翼ＤＮＡ序列往往是相对保守的限制性核酸内切酶位点。可以根据两翼保守序列设计一对特异引物扩增重复序列本身，从而检测到不同植
２０１０年第６期
物群体的简单重复序列。由于重复单位长度不同而造成ＤＮＡ区域的多态性。
ＳＳｌｌ特点是：①均匀、随机、广泛地分布于水稻、甜菜、大麦、
小麦、大豆等多种作物基因组中。②共显性遗传，按照孟德尔方
式分离。③多态性高，多数ＳＳＩＩ无功能作用，增加或减少几个重复数不影响生物的正常生长发育，因而具有广泛位点变异，
每个位点均有许多等位形式，比ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ分子标记更具多
态性。④重复性好。⑤操作简单。⑥仅需微量组织，即使ＤＮＡ降解，也能有效地分析鉴定。在数量方面没有限制．其标记带型简单，记录条带一致，客观明确。
ＳＳｌｌ标记的获得：使用ＳＳＩｔ标记的前提是要知道重复序列两侧的ＤＮＡ序列。最好的途径就是进行￥ＳＲ标记的开发，而且一旦开发，可以以引物进行实验室间交流。当然获取途径是多种的，也可以根据已有的遗传图谱，每隔一定遗传距离选择一个标记，根据ＣｅｎＢａｎｋ等已知的序列设计扩增ＳＳＲ序列的引物。
３．２ＳＳＲ分子标记技术的应用
ＳＳＲ分子标记以ＰＣＩｔ反应为基础，它既具有一般ＰＣｔｔ反应的操作简单、快速、成本低廉的特点，又具有与ＥＦＬＰ相同的结果稳定町靠，特异性强和共显性的优点，因而在基因定位、遗传作图、品种鉴定和分子标记辅助育种等方面都得到广泛的应用。
２０世纪９０年代后期。科学家借助５００多个分子标记．建立了甜菜的原始染色体图谱。最近德国的两家育种公司和四个研究所共同完成了一个带有６１１０个标记的甜菜遗传图谱，并公布于世。在图谱绘制过程中，应用了ＲＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＳＳＲ、ＡＦＬＰ等技术。其中几个重要的基因被定位，如抗线虫的Ｈｓｌ、Ｈｓ２基因、
抗丛根病的Ｒｎ基因、修补位点ｘ和ｚ、单胚种球基因Ｍ、红色下胚轴基因Ｒ、抽甍基因Ｂ及抗ｃｅｍｐａ阻ｂｅｔｉｃｏＩａＳａｃｃ．叶斑病和产量组分的ＱＴＬ。
２０００年．在水稻中已定位的ＳＳＩｔ标记已超过３００个，这些
ＳＳＲ均匀分布于水稻基因组中，平均每６【：Ｍ，就有一个ＳＳＩｔ。Ａｎｄａｙａ等利用梗稻Ｍ一２０２×籼稻ＩＲ５０构建的重组衍生自交系
为作图群体，用ＳＳＩｔ标记构建了分子遗传连锁图，并进行了抗寒性叩Ｌ定位研究。ｗｕ
Ｊｉａｎｊｕ等利用黄早四×Ｍ０１７的Ｆ２为
作图群体，通过ＳＳＲ标记作图，将一个抗玉米矮花叶病毒Ｂ株系的抗病主效隐性基因Ｍｄｍｌ（ｔ）定位于第六染色体靠近着丝粒的长臂匕位于微卫星标记ｐｈｉ０７７和ｂｎｌ９３９１之间。
刘章雄等利用ＳＳｔｌ分子标记技术，以组合Ｐ２５×Ｆ３４９的Ｆ２家系作为构图群体，构建了玉米ＳＳｔｌ遗传连锁图谱，并将玉米抗南方型锈病基因定位于１０号染色体上，与ｐｈｉ０５９标记的遗传距离为５．８ｅＭ。
ＳＳＲ是共显性标记，其优点是适用叮ｒＬ定位（数量性状基因座定位）研究，便于在育种中对有关的ＯＴＩ．的遗传动态进行跟踪，从而增强人们对数量性状的遗传操纵能力，提高育种中对数量性状优良基因型选择的准确性和预见性。
采用ＱＴＬＮａｐｐｅｄ．６数量性状基因定位软件对ＳｓＲ试验结果进行分析，该种分析在植物数量性状定位领域有很广的应用范围。
４
ＱＴＬＭａｐＤｅ一．６介绍及应用
ＱＴＬＭａｐｐｅｒＩ．６是一个免费的定位数最性状基因座位的计
算机软件，由Ｄ∞ｌｏｎｇＷ卸ｇＪｉｍＺ｝Ｉｕ’ｚｌｌｉｋ粕ｇＬｊ和Ａ．Ｈ．Ｐａｔｅｒｇｅｍ设计编程的。
Ｑ１ＬＭａｐｐｅｒｌ．６对计算机硬件的要求不高；ＰＣ＿ＡＳ６或更高；
内存１６ＭＢ以上；硬盘２ＭＢ以上自由空间就可以。操作系统：
Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ
Ｗｉｎｄｏｗｓ９５丹８，２０００，ＷｉｎｄｏｗｓＸＰ也都可以。
Ｑ１｜ＬＪ
Ｎａｐｐｅｒｌ．６用于定位数龟性状基因座位的主要效应、
上位效应及数量性状与环境交互作用。定位群体可以是ＤＨ（加
