白细胞介素一l0 检测及其l 临床意义

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ＥＬＩｓＡ一点技术
这项技术简称为ＥＬＩ
用流式细胞仪测定母血中胎儿红细胞含量的新方法
周春喜
（解披军总匡院匡学宴验测试中心，北京１００８５３）
本文介绍一种快速而准确地测量母血中胎儿 红细胞含量的方法。它通过流式细胞仪检测母血 中胎儿红细胞胞内的血红蛋白（ＨｂＦ）和红细胞表 面ｉ抗原，可以特异地识别母血中胎儿红细胞。这 对预防新生儿溶血症和优生优育具有重要意义。 材料与方 ５ｍＬ冲洗液，将离心管颠倒几次 洗细胞。１０００９离心３ｍｉｎ，弃上清，将剩下的细胞 混匀。加１００”Ｌ破膜液，混匀，室温温育３ｍｉｎ。 （６）加２．５ｍＬ冲洗液，将离心管颠倒几次洗 细胞。１０００９离心３ｍｉｎ，弃上清，用２．５ｍＬ冲洗掖 再洗细胞一次。离心弃上清，加１ｍＩ，冲洗液，混
万方数据
复垂鱼垒盘堑皇ｌ堕生！业！王！；星墨！董璺！型
２５ｌ
性和高灵敏度。
４免摄荧光法
能检测单个细胞水平ＩＬ—ｌＯ的产牛．对研究ＩＩ．一 ｌｏ住细胞问进行信息传递的作用，具有重要的意 义。操作步骤：将单细胞悬液加到包被抗ＩＬ一１０ 抗体的反应｝Ｌ中，经诱导产生ＩＬ一１０，后者与生物 素化的第二抗体产生结合反应，当加入碱性磷酸酶 标记的链亲和素和显色剂后，显色反应在覆盖的琼 脂胶中进行，最后用倒置显微镜计数蓝色斑点。本 法操作简单，可以使细胞处于与体内的状态非常相 近的条件。ＥＬＩ～ｓＰＯＴ法还可用来跟踪疾病产 生、调整治疗方案等。如用于重症肌无力患者外周 血Ｔ细胞分泌ＩＬ一１０（和ＩＦＮ一７）的研究；用于检 测多发性硬化患者外周单个细胞ｌＬ一１０分泌水 平。 ｓＰＯＴ，用Ｅ ＬＩ—ｓＰＯＴ （陈泮藻编委审 张增武编辑） ７的表达
１０和鼠ＩＬ一
７对单核细胞活化。ＩＩ，１０对ＮＫ细胞的 ｌＯ抑制ＮＫ细
抑制作用是间接的而非直接，ＩＬ
胞产生ＩＦＮ一７，ＩＬ一１０不抑制ＬＡＫ细胞活性。 成熟的Ｂ细胞才能分泌ＩＬ—ｌＯ，ＩＬ一１０是Ｂ细胞 有效的增殖和分化因子，它对Ｂ细胞活化和增殖 有着效应。在ＴＧＦ 物活性。 ＩＩ，１０检测对疾病的临床诊断、免疫病理和 免疫调节等方面的研究都是必需的。 ＩＩ．一１０的检测方法和临床意义：
这类检测方法简称为ＲＩＡ和ＥＬＩｓＡ法，检测 特异性高，较生物活性检测方法快速，其灵敏度可 达ｐｇ水平。可测患者的血、细胞液和尿液等标本 中的ＩＬ一１０水平，已有成套试剂盒可供使用，操作 也十分方便和简单。
２斑点杂交法
用地高辛甙标记的ｃＤＮＡ作为探针的点杂交 方法，可检测系统红斑狼苍（ｓＬＥ）患者ＩＬ一１０ ｍＲＮＡ的含量。实验结果表明，ＬＥｓ患者ＩＬ一１０ ｍＲＮＡ表达量比正常人高二倍，提示ＩＬ １０与 ｓｕ！发病有直接关系，并表明了ＩＬ—１０拮抗剂有 可能用于ＳＬＥ病的治疗。这种方法操作简便，并 有助于ｓＬＥ疾病的临床治疗和用于选择合适的免 疫调节剂。
３反转录一ＰＣＲ检测法
这种检测法简称为ＲＴ—ＰｃＲ，检测ＩＬ一１０特 定基因转录产物ＲＮＡ的表达水平。它可以从血 清、血浆、细胞、腹水和组织液等，一步处理，快速分 离样品中的ＲＮＡ，可从５０ｐｇ总ＲＮＡ中扩增出所 需片段，最大扩增片段超过２ｋｂ，因此具有高特异
收稿日期：２００１一０２
１８：惨回日期：２００１一０５—２８
匀。
２荧光染色方法 （１）每份样品取２支流式细胞仪样品管，分别
标记为１和２。
（１）静脉采血１ｍ Ｌ’用ＥＤＴＡ抗凝，室温保存
备用。
（２）用血球汁数仪计数并计算抗凝ＩＩＩＬ中红细 胞的浓度。 （３）用冲洗液将抗凝Ｊｆ『Ｌ稀释成浓度为２．５× １０９个／ｍＬ的红细胞悬液。 （４）取一带盖尖底离心管，加入１０＂Ｌ红细胞
采用双标记免疫荧光法，可检测唾液腺炎患者 唾液腺组织中１１。一１０、ＩＩ。一１２和ＩＦＮ 水乎，而大部分ＩＬ １０表达阳性的单个核细胞，
ｃＤ４也阳性，又称双阳性免疫荧光标记法。采用 免疫双染色法可检测类风湿性关节炎和骨关节炎 患者的滑膜细胞培养液巾ＩＬ一】ｏ的水乎，结果表 明类风湿性关节炎患者ＩＩ， １０水平为３５８— ５５０１ｐｇ／ｍＬ’骨关节炎患者ＩＬ一１０水平为３１０— ３３９０ｐｇ／ｍＬ。这表明ｌＬ一１０是由滑膜里层单核细 胞和聚集的淋巴细胞（Ｔ细胞）产生的。
ｌ
Ｂ存在下，ＩＬ—ｌＯ能提高ＩｇＡ
分泌能力，在ＩＬ一４存在下ＩＩ，１０能提高Ｉ庙生
１０核苷酸序列同源性达８１％，氨基酸序列同源性 达７３％。人ＩＬ—ｌＯ对人细胞和小鼠细胞均有作 用，小鼠ＩＬ—１０只对鼠细胞有作用，而对人细胞无
作用。
放射免疫分析法和酶免疫吸附法
白介素的基因是单拷贝基因，其位置在第一染 色体上。【Ｉ，一１０基因的核苷酸序列或蛋白质氨基 酸顺序和其他的细胞因子无明显的顺序同源性。 而ＩＬ～１０基因和ＥＢｖ基因组中有一段开放读码 区的ＢｃＲＦ １有大干８０％的明显同源性。 ＩＬ—１０是一种具有免疫抑制和免疫刺激作用 的细胞因子，人ＩＬ—ｌＯ在单核细胞存在下，能直接 抑制Ｔ细胞增殖和白介素的产生。当它作为免疫 抑制因子时，能抑制多种细胞合成其他细胞因子。 ＩＬ一１０抑制细胞性免疫应答，主要是通过抑制 Ｔ。１产生ＩＬ一２、干扰素一丫（ＩＦＮ一７）等，抑制ＩＬ 一２Ｒ的作用。在机体免疫应答中．既有对机体起 保护作用的一面，也有不利于机体的一面。ＩＩ，一１０ 能增强体液免疫应答。ＩＬ～ｌｏ在机体多种自身免 疫疾病的产生过程中起着重要的作用，与白血病关 系较为密切。ＩＬ一１０与ＩＬ一３和ＩＬ一４拂同因子 能刺激未成熟的肥大细胞增殖，内源性ＩＬ一１０也 能抑制同种异体ＭＬＲ表达。ＩＬ—１０和转化生长
ＦＩＴｃ标记的ＩｇＧ】、ｌＯ弘Ｌ ＰＥ标记的ＩｇＭ和
１０“Ｌ ＬＤＳ ７５ｌ，混匀。
（４）将两管于４℃避光温育３０ｍｍ。用２．５ｍＬ
收稿日期：２００１
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１８：修回日期：２００１一０８—１０
冲洗液洗１次。
万方数据
（２）在ｌ号管中依次加入１００ｐＬ细胞悬液、 １０弘Ｉ．异硫氰酸荧光素（ＦＩＴｃ）标记的抗ＨｂＦ、１０ｐＬ 藻红蛋白（ＰＥ）标记的抗ｉ抗原和１０“Ｌ ＤＮＡ染液
（Ｉ。ＤＳ ７５１），混匀。
（３）在２号管中依次加入１００ｐＬ细胞悬液、
１０肛Ｌ
悬液及１００止封闭液，混匀。加入ｌＯＯｐＬ固定液，
混匀，室温温育３０ｍｉｎ。
生堡型Ｉ婴！竺些！！坚竺些！丛型，坚竺巴堕！塑！．！型：塾型！：！
・检测技巧
白细胞介素一１０检测及其Ｉ临床意义
董晓军
（解放军总医院科技开发中心，北京１００８５３）
白细胞介素
１０（简称白介素一１０，ｉｎｔｅｒ—
因子（ＴＧＦ）可通过抑制一氧化氮的产生而干扰
ＩＦＮ
ｌｅｕｋｉｎ—ｌｏ，ＩＬ一１０）是具有多种生物功能的细胞 因子，它与机体自身免疫疾病、感染性疾病和肿瘤 等有着密切关系。ＩＬ一１０主要由单核细胞，巨噬 细胞，肥大细胞，Ｔ、Ｂ淋巴细胞和激活的角质细胞 产生。人的ｌＬ—１０是一种单肽链的，由１６０个氨 基酸组成的酸性蛋白，分子量为１８．７ｋＤ（不包括Ｎ 端１８个氨基酸构成的信号肽序列），等电点为 ８．１，通常为二聚体（３９ｋＤ）。人ＩＬ