双波长等吸收消去法测定蒲公英中芦丁和槲皮素的含量

科技信息　。科教前沿ｏ　ＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ　２０１０年第２５期　双波长等吸收消去法测定蒲公英中　芦丁和槲皮素的含量　

周冬菊张延萍王晓静邱娜娜　（河南科技大学化工与制药学院河南洛阳４７１００３）　

【摘要】实验利用双波长等吸收消去法同时测定了蒲公英提取物中的芦丁和槲皮素的含量。结果表明：槲皮素在波长２４Ｏｈｍ和２６６ｍｎ处　有相同的吸收，芦丁在波长３３０ｎｍ和３７０ｎｍ处有相同的吸收。本法测定蒲公英提取物中的芦丁和槲皮素，含量分别达到５．７０％和１．２１％；相对　标准偏差为１．６６％和０．５７％。该方法简便易行，实现了二组分的同时测定　【关键词】双波长法；芦丁；槲皮素；蒲公英　Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒｕｆｉｎ　ａｎｄ　Ｑｕｅｒｃｅｒｔｉｎ　ｉｎ　ｄａｎｄｅｌｉｏｎ　ｂｙ　Ｉｓｏａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ　Ｐｏｉｎｔ　Ｕ１ｔｒａＶｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ＺＨＯＵ　Ｄｏｎｇ－ｊｕ　ＺＨＡＮＧ　Ｙａｎ－ｐｉｎｇ　ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｊｉｎｇ　ＱＩＵ　Ｎａ－ｎａ　（Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｉｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌｕｏｙａｎｇ　Ｈｅｎａｎ，４７１００３，Ｃｈｉｎａ）　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｔｈｅ　ａｒｔｉｃｌｅ　ｕｓｅ　ｉｓｏａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ　ｐｏｉｎｔ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｑｕｅｒｅｅｒｔｉｎ　ｉｎ　ｄａｎｄｅｌｉｏｎ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｓｈｏｗ：ｑｕｅｒｃｅｒｔｉｎ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｎ　２４０ｎｍ　ａｎｄ　２６　６ｎｍ，ａｎｄ　ｒｕｔｉｎ　ｈａｖｅ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｎ　３４０ｎｍ　ａｎｄ　３７０ｎｍ．Ｔｈｅ　ｍｏｔｈｏｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｆ　ｒｕｔｉｎ　ａｎｄ　ｑｕｅｒｃｅｒｔｉｎ　ｉｎ　ｄａｎｄｅｌｉｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　５．７０　ａｎｄ　１－２１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ：ｔｈｅｉｒ　ＲＳＤ　ｗｅｒｅ　１．６６％ａｎｄ　０．５７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｅａｓｙ．ａｎｄ　ｉｔ　ｗｉｌ１　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］Ｓｏａｂｓｏｒｐｔｉｖｅ　Ｐｏｉｎｔ　Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；Ｒｕｔｉｎ；Ｑｕｅｒｃｅｒｔｉｎ；Ｄａｎｄｅｌｉｏｎ　

Ｏ引言　蒲公英为菊科植物蒲公英的干燥全草，具清热解毒、消肿散结、利　尿通淋之功效，用于治疗急性乳腺炎、淋巴腺炎、尿路感染等。曾有报　道蒲公英因含有芦丁，槲皮素等多种黄酮类化合物而具有活血化瘀等　药理作用。【‘　芦丁和槲皮素的结构及ｌ｝缶床上的作用很相似。两种物质往往共　存，测定它们的含量时，相互之间有干扰，需经分离后才能进行测定，　操作繁琐费时，误差较大。目前，蒲公英中黄酮的的含量测定方法主要　有，利用比色法，以芦丁为对照品测定总黄酮含量［引，采用双波长薄层　色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量　。蒲公英中咖啡酸和绿原酸的含　量有采用ＨＰＬＣ同时测定［６１。由于蒲公英中总黄酮的含量较低．未见采　用双波长等吸收消去法测定蒲公英中芦丁和槲皮素含量的相关报道。　本法不经分离，对蒲公英中的芦丁和槲皮素同时进行测定。其原理为：　在等吸收波长处测定样品溶液的吸光度．其吸光度差值△Ａ只与其中　

一种组分的浓度呈线性关系，而与另一组分的浓度无关。　

１　实验部分　１．１实验试药与设备　Ｔ５２Ｎ紫外分光光度计（上海精科），ＢＳ１２４Ｓ分析天平（赛多利斯　科学仪器有限公司），ＫＱ３２００Ｂ超声清洗器（昆山市超声仪器有限公　司）槲皮素（成都曼斯特生物，Ｕｖ纯度大于９９％），芦丁（成都曼斯特生　物，ＵＶ纯度大于９９％），实验用水为蒸馏水。　１．２双波长等吸收消去法的确定　

０　８　毗０　７　，　０　６　Ｊ４　０　５　＾Ｏ　４　Ｏ　３　０　２　０１　０Ｏ　

１一芦丁：２槲皮素　图１　芦丁和槲皮素吸收光谱图　

分别配制槲皮素和芦丁的单组分标准溶液，测定它们在波长　２２０－４００ｎｍ的吸光度，经过粗选和细选，分别找出芦丁和槲皮素的等　吸收波长Ａ　、Ａｚ、Ａ］、Ａ　。由于芦丁在Ａ。、Ａ　处有相同的吸收，在此二波　长处混合物的△Ａ只与的槲皮素浓度有关。同理，在Ａ。、Ａ４处测定其　

吸光度，△Ａ只与的槲皮素浓度有关。配制一系列浓度的槲皮素和芦　丁标准溶液，在等吸收波长处测定其吸光度，计算吸光度的差值，作校　准曲线及线性回归方程．由此可计算出未知物样品中芦丁和槲皮素的　含量。从扫描图中可知，芦丁在３３０ｎｍ和３７０ｎｍ处有相同吸收，槲皮　素在２４０ｎｍ和２６６ｎｍ处有相同吸收　１．３标准曲线的绘制　１ｌ３．１　芦丁标准曲线的绘制　称取芦丁标准品０．００３２ｇ置于ｌＯＯｍＬ的容量瓶中，用１：４的甲醇　水溶液定容，分别吸取０．５　ｍＬ，１．ＯｍＬ，１．５ｍＬ，２ｍＬ，２．５ｍＬ，３ｍＬ，３．５ｍＬ，　４ｍＬ置于１０ｍｌ　容量瓶中定容，即得芦丁储备液。在波长２４０ｎｍ和　２６６ｎｍ处测定吸光度，计算吸光度差值和浓度，然后绘制标准曲线，得　线性方程△Ａ：０．００９９５Ｃ＋０．００１２　Ｒ＝０．９９８　１．３．２槲皮素标准曲线的绘制　称取槲皮素标准品０．００３１０ｇ置于１００ｍｌ　的容量瓶中．用１：４的　甲醇水溶液定容，分别吸取０．５ｍＬ，１．ＯｍＬ，１．５ｍＬ，２ｍＬ，２．５ｍＬ，３ｍＬ，　３．５ｍＬ置于ｌＯｍＬ容量瓶中定容，即得槲皮素储备液。在波长３３０ｎｍ　和３７０ｎｍ处测定吸光度，计算吸光度差值和浓度，然后绘制标准曲　线，得线性方程△Ａ＝０．００８６Ｃ＋０．００８３　Ｒ＝０．９９９。　

图２芦丁标准曲线　图３槲皮素标准曲线　（下转第１８页）　２７　

州　啦　２０１０年第２５期　ＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ　ＩＮＦＯＲＭＡＴＩＯＮ　ｏ本刊重稿０　科技信息　社会民众的质疑，也损害了法律面前人人平等的公信力。　５改革死刑执行方式。确定注射刑为死刑立即执行的惟一方　式。推动我国刑罚轻缓化进程　我国《刑事诉讼法》规定，死刑的执刑方式有枪决、注射等，推广以　注射为代表的新的执刑方式，是中国死刑执行方式进～步文明化的标　志。由于我国法律规定了枪决、注射两种执行方式，但对两种执行方式　如何选择适用并未明确规定。因此，应对死刑立即执行的方式进行规　范，明确规定注射刑为我国死刑立即执行的惟一方式具有重大意义。　注射刑作为惟一的死刑执行方式具有许多优点：第一．注射方式行刑　更加人道化、科学化。采用注射刑无论对行刑者还是受刑者都大大减　轻了心理压力．符合联合国公约中规定的最大限度地减轻受刑者肉体　痛苦和精神创伤，体现了文明执法，顺应了人间道义。而对于行刑人而　言。行刑过程中不见血腥且无法确认致死药物由谁注入，因杀人而产　生的厌恶感较小。第二，注射执行死刑能够保证死刑犯尸体的完整性。　由于注射刑是采取静脉注射的方式行刑，对死刑犯尸体的完整性不会　破坏，这样既可以安抚一下死刑犯家属的心情，同时对于一些少数民　族或者有宗教信仰的死刑犯，也不会破坏他们的民族风俗或者宗教习　惯。第三，注射刑的执行过程更加简易、快捷。采用注射死刑．即静脉扎　针的过程，开始注射只需摁一下“注射键”即可，其余均为电脑操作。快　捷性则体现在注射过程的速度，注射执行一名死刑犯最多需要一分半　钟。将注射刑确定为我国死刑执行的惟一方式，具有现实可操作性。最　高法院审判委员会己于２００１年９月４同通过了《关于采用注射方法　执行死刑若干问题的规定（试行）》进一步规范和统一了死刑注射执行　的具体方法和步骤．并对用药规定了详细的内容。这一规定对于保障　各地法院在规范化、科学化、合法化的基础上开展采用注射方法执行　工作。具有统一指导行刑的作用。在现代文明社会，人道主义、人权观　念是选择执行方式最重要的因素，从一枪到一针，变化的不仅是形式，　更重要的是观念。这充分体现了我国法治建设的逐步健全和完善，同　时实践也表明，我国使用注射死刑不仅受到了国内各界和死刑犯家属　的认同，还受到了国际社会的一致好评，它的实施不仅推动了中国人　道主义、人权事业的发展，同时推动我国刑罚轻缓化进程。　

６结语　废除死刑是我国刑罚轻缓化进程中一个重要的目标。鉴于我国国　情以及死刑所具有的特殊作用，我国短期内很难废除死刑。死刑的执　行方式是刑事司法制度的重要组成部分，注射的死刑执行方式可以让　被执行人在一种更加从容、更少痛苦、更能体会到人格尊严的气氛中　死去，体现了对被执行人基本人权的尊重。在我国继续保留死刑的情　形下，进一步完善死刑的执行制度。有利于推动我国刑罚轻缓化的进　程，意义重大而深远。锰　

【参考文献】　［１］宁汉林，魏克家．法系刑法学说的形成和发展【Ｍ］．北京：中国政法大学出版社　２００１．　［２］胡常龙．死刑案件程序问题研究［Ｍ】．北京：中国人民公安大学出版社，２００３．　［３］姚旺吴．对我国现行死刑执行制度的思考［Ｊ１．法制与社会，２００７，（４】．　［４］庄旭筠．浅析我国注射死刑制度叨．西南科技人学学报：哲学社会科学版　２００５，（１２）　［５］周红梅．刑罚执行论【Ｍ】．沈阳：辽宁人民出版社，１９９４．　［６］胡云腾．存与废死刑基本理论研究ｆＭ】一￡京：中国检察出版社，２０００．　

作者简介：郭凯（１９８【卜），男，河南许昌人，许昌学院数学科学学院，助教　研究方向为刑法学。　

※基金项目：河南省许昌学院２０１０年度校内科研基金项目课题　（２０１０１１Ｏ）。　

（上接第２７页）１．４回收率实验　精密吸取储备液２ｍＬ、２．５ｍＬ、３ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中，加蒸馏　水至标线，放置１０ｍｉｎ，在波长２５０ｎｍ，测定吸光度。计算其芦丁回收　率为１０１．４５％．ＲＳＤ为０．８２％：槲皮素回收率为９９．８１％，ＲＳＤ为　０．４７％。　１．５样品的测定　称取蒲公英１０ｇ（本市药店购买），用蒸馏水浸泡２ｈ后，用５０％的　乙醇按１：３５的料液比在８Ｏ℃的条件下超声提取２０ｍｉｎ。过滤，蒸馏回　收乙醇，浓缩干燥得提取物。称取３２ｍｇ提取物，用甲醇溶解，转移至　５０ｍＬ，的容量瓶中，用１：４的甲醇水溶液定容至刻度，制得样品储备　液。　移取２．０ｍＬ一４．５ｍＬ（间隔Ｏ．５ｍＬ）的样品储备液，配制成一系列浓　度的样品溶液，分别在波长２３５ｎｍ和２６６ｎｍ以及在波长３３０ｎｍ和　３７０ｎｍ下测定其吸光度值，并计算吸光度差值，用计算芦丁及槲皮素　的浓度．进而可以计算出样品中的含量。　２结果与讨论　在波长２４０ｎｍ和２６６ｎｍ测定吸光度值，计算样品中芦丁的含量　结果见表１。　表１　样品中芦丁含量的计算　样品浓　Ａ　Ａ，　△Ａ　芦丁含　芦丁含量　ＲＳＤ　％　度／ｕ咖Ｌ　（２３５ｎｍ）　（２６６ｎｍ）　量，％　平均值，％　１２８　０．３０６　０．３７４　０．０６８　５．４９　ｌ　６（】　０４３３　０．５２２　０．０８９　５．７８　ｌ９２　０．５４５　０．６５３　０．１Ｏ８　５．８６　５．７Ｏ　１．６６　２２４　０．６２２　０．７４８　０．１２６　５．８６　２５６　０．６５２　０．７９ｌ　Ｏ．１３９　５．６７　２８８　０．７３３　０．８８５　０．１５２　５．５】　１８　［责任编辑：张慧］　在波长３３０ｎｍ和３７０ｎｍ测定吸光度值，计算样品中槲皮素的含　量，结果见表２。　表２样品中槲皮素含量的计算