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实验一 芦丁的提取、精制与鉴定一、实验目的与要求l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷, 苷元和糖部分的鉴定方法。
R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素芦丁溶解度: 冷水1: 8000 热水1: 200冷乙醇1: 300 热乙醇1: 30难溶于乙酸乙酯、丙酮, 不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。
槲皮素溶解度: 冷乙醇1: 650 热乙醇1: 60可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶, 不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。
二、实验原理本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质, 用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物, 可被稀酸水解成槲皮素（苷元）, 葡萄糖和鼠李糖。
芦丁和槲皮素通过化学反应, 色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。
三、实验内容（一）提取分离和纯化l 、芦丁的提取:2.精制（重结晶）:3、芦丁的水解:OO OHOH OROH HO流程图如下:槐米（20g）研碎, 于500ml烧杯中,加350, 250ml水煮沸15min,10min棉花过滤150ml, 1%H2SO4 80倍水加热溶解, 趁热抽滤直火加热水解30min放冷抽滤, 沉淀水洗至中性不溶物（弃去）滤液放置 1-1.5h, 抽滤精品芦丁（水浴浓缩至2ml）(二)鉴定l、化学检识取芦丁和槲皮素少量, 置2支试管中分别加乙醇8ml使溶解(1)盐酸—镁粉反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加浓盐酸5滴, 再加少量镁粉, 观察颜色变化。
(2)Molish反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加10%α—萘酚0.5ml摇匀, 倾斜试管, 沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml, 静置, 观察二层溶液界面处颜色变化, 并比较芦丁和槲皮素的区别。
(3)FeCL3反应: 取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml, 置2支试管中分别加1%三氯化铁乙醇液几滴, 观察颜色变化。
HPLC测定雪莲中芦丁和槲皮素的含量
卢永昌;闫红
【期刊名称】《华西药学杂志》
【年(卷),期】2007(22)1
【摘要】目的建立测定雪莲中芦丁和槲皮素含量的方法。
方法采用HPLC法，色谱柱为AgilentZorbax SB—C18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．04％磷酸溶液（40：60），流速1．0ml·min^-1，检测波长360nm，柱温35℃。
结果芦丁和槲皮素的线性范围分别为0．01～0．20μg和0．007～0．099μg；r分别为0．9999和0．9997；平均回收率分别为102．1％
（RSD=2．0％，n=6）和99．5％（RSD=1．4％，n=6）。
结论所建法快速、简便、准确、重复性好，可作为雪莲药材质量控制的方法。
【总页数】2页(P79-80)
【关键词】高效液相色谱法;雪莲;芦丁;槲皮素
【作者】卢永昌;闫红
【作者单位】青海民族学院化学系
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.雪莲中绿原酸、芦丁、木犀草素含量的HPLC法测定 [J], 张海霞;卢永昌;王庶
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Vol.7 No.2Apr. 2021生物化工Biological Chemical Engineering第 7 卷 第 2 期2021 年 4 月HPLC 法同时测定黄蜀葵花冠中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量朱俊豪1，贾红倩2，张彩梅1，颜军1，何钢1*（1.成都大学 药学院 四川抗菌素工业研究所 药食同源植物资源开发四川省高校重点实验室，四川成都 610106；2.北京天衡军威医药技术开发有限公司，北京 102600）摘 要：目的：建立HPLC 同时测定黄蜀葵花冠中芦丁、金丝桃苷和槲皮素3种活性成分的分析方法。
方法：采用Waters C 18色谱柱（4.6 mm×150 mm，2.7 μm），乙腈-0.2%磷酸溶液作为流动相，梯度洗脱，柱温35 ℃，流速0.7 mL/min，进样量 10 μL，检测波长256 nm。
结果：芦丁、金丝桃苷、槲皮素分别在0.000 5~0.010 0 mg/mL（r =0.999 95）、0.001 15~ 0.023 00 mg/mL（r =0.999 95）、0.003 13~0.063 00 mg/mL（r =0.999 79）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为96.01%（RSD =0.87%）、99.60%（RSD =0.90%）、96.92%（RSD =1.72%）。
结论：本法操作简便，稳定性好，可作为黄蜀葵全花的质量控制以及同时分析黄蜀葵全花中芦丁、金丝桃苷、槲皮素的有效手段。
关键词：HPLC；黄蜀葵花冠；芦丁；金丝桃苷；槲皮素中图分类号：R917 文献标识码：ASimultaneous Determination of Rutin, Hyperoside and Quercetin from the Corolla of Abelmoschus manihot (L.) by HPLCZHU Junhao 1, JIA Hongqian 2, ZHANG Caimei 1, YAN Jun 1, HE Gang 1*(1. Key Laboratory of Medicinal and Edible Plants Resources Development of Sichuan Education Department, Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, School of Pharmacy, Chengdu University, Sichuan Chengdu 610106; 2. BeijingTianheng Junwei Medical Technology Development Co., Ltd., Beijing 102600)Abstract: Objective: An HPLC method for the simultaneous determination of rutin, hyperoside and quercetin from the Corolla of Abelmoschus manihot (L.) full flower was established in this paper. Methods: the Waters C 18 column (4.6 mm×150 mm, 2.7 μm) was adopted to separate the samples with a gradient elution consisting of acetonitrile-0.2% phosphoric acid solution mobile phase at a flow of 0.7 mL/min. the column temperature was 35 ℃, and the detection wavelength was 256 nm, the sample volume was 10 μL. Results: The three active components showed good linear relationship respectively over the concentration range of 0.000 5~0.010 0 mg/mL (r =0.999 9)、0.001 15~0.023 00 mg/mL (r =0.999 9)、0.003 13~0.063 00 mg/mL(r =0.999 7), the average recovery was 96.01% (RSD =0.87 %)、99.60 % (RSD =0.90 %)、96.92 %(RSD =1.72 %). Conclusion: The developed method can be used as an effective means of simultaneous rutin, hyperoside and quercetin analysis.Keywords: HPLC; Abelmoschus manihot (L.) full flower; rutin; hyperoside; quercetin黄蜀葵[Abelmoschus manihot (L.)]是一种广泛分布于印度和中国南方多省的一年或多年生粗壮直立植物，别名黄秋葵、棉花葵、野芙蓉、鸡爪莲，为锦葵科秋葵属植物黄蜀葵的干燥花冠[1]。
反相高效液相色谱法测定芦丁中槲皮素的含量尹丽平【摘要】[目的]建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定芦丁中槲皮素含量的方法.[方法]用C(18)(250 mm × 4.6 mm)色谱柱,流动相为水-乙腈-冰乙酸(1060:350:45,V:V:V),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm.[结果]采用水-乙腈-冰乙酸系统为流动相,分离效果好,峰型好,分离时间短,计算结果准确;以甲醇为溶媒提取时间短,提取杂质少.槲皮素含量在4-12 mg/L范围内呈良好的线性关系,回归方程Y=1285X+3645,平均回收率为99%.所测样品芦丁中槲皮素的含量平均为0.813g/ml.[结论]采用RP-HPLC测定芦丁中槲皮素含量简便、灵敏、准确、重复性好,可作为质量和生产控制的有效方法.%[Objective] The main biological traits of three species of mushroom(Pleurotus ostreatus) : Pinggu, Jigu and Xiuzhengu, were fu-ture understand. [ Method] The yield, the biological efficiency, the morphologic character of fruiting body, the spore print, shape and size of spore of three species of mushrooms were compared and analyzed. [ Result] The yield and biological efficiency of three species of mushrooms was Pinggu > Jigu > Xiuzhengu and also the length and diameter of stem was Pinggu > Jigu > Xiuzhengu. There were some differences in the color spore print and class and the shape and size of spore of three species of mushrooms, which was obvious. [ Conclusion ] Pinggu, Jigu, Xiuzhengu were the allied species of Pleurotus. In general, the body of individual Pinggu was largest with higher yield; the body of Jigu was middle size with the highest price in the products of Pleurotus, which economic benefit was the most significant and the size of Xiuzhenguwas delicate and precious with the crab flavor, which was a the best variety in Pleurotus.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)016【总页数】2页(P9588-9589)【关键词】反相高效液相色谱法;芦丁;槲皮素;含量【作者】尹丽平【作者单位】青岛盛瑞德实业有限公司,山东,青岛,266100【正文语种】中文【中图分类】S567芦丁又叫芸香苷、维生素P或紫槲皮甙，是从荞麦或别的植物中得来的无臭无味、淡黄色至淡黄绿色结晶性粉末，在185～192℃树脂化，约215℃分解。
一、实验目的1. 了解芦丁和槲皮素的理化性质。
2. 掌握芦丁和槲皮素的提取、分离与鉴定方法。
3. 熟悉光谱分析在有机化合物结构鉴定中的应用。
二、实验原理芦丁和槲皮素均为黄酮类化合物，具有多种生物活性。
芦丁是槐米中的一种主要活性成分，槲皮素则广泛存在于多种植物中。
本实验通过碱酸法提取芦丁和槲皮素，并利用光谱分析（紫外-可见光谱、红外光谱、核磁共振波谱）对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：槐米、芦丁标准品、槲皮素标准品、无水乙醇、浓盐酸、镁粉、10%萘酚溶液、浓硫酸、聚酰胺薄层板、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温加热器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、紫外-可见分光光度计、红外光谱仪、核磁共振波谱仪等。
四、实验步骤1. 芦丁和槲皮素的提取（1）将槐米粉末用无水乙醇回流提取，过滤，收集滤液。
（2）将滤液浓缩至一定体积，用热水溶解，冷却后用盐酸调节pH值至2～3。
（3）静置沉淀，取上清液，用旋转蒸发仪浓缩至近干。
（4）用少量无水乙醇溶解残渣，定容至一定体积，得到芦丁和槲皮素的提取液。
2. 芦丁和槲皮素的鉴定（1）紫外-可见光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用紫外-可见分光光度计测定其在200～400nm范围内的吸收光谱，与标准品进行比较。
（2）红外光谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用红外光谱仪测定其红外光谱，与标准品进行比较。
（3）核磁共振波谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，用核磁共振波谱仪测定其核磁共振波谱，与标准品进行比较。
3. 芦丁和槲皮素的分离（1）薄层色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，点样于聚酰胺薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（5:4:1）为展开剂进行薄层色谱分析，与标准品进行比较。
（2）高效液相色谱分析取芦丁和槲皮素的提取液，经适当处理后，用高效液相色谱仪测定其含量，与标准品进行比较。
五、实验结果与分析1. 紫外-可见光谱分析芦丁和槲皮素的紫外-可见光谱与标准品的吸收光谱基本一致，表明提取液中含有芦丁和槲皮素。
HPLC法测定苦荞茶中芦丁＼槲皮素的含量[摘要] 建立了高效液相色谱法测定常见苦荞茶中芦丁槲皮素成分含量的方法。
色谱柱：SHIMDZU VP-ODS，流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4），流速：0.9 5mL·min-1，检测波长：360 nm，进样量：5 µL。
芦丁在0.048-0.32 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9997，槲皮素在0.028-0.19 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9996，加标回收率为98.7%，RSD 为0.013%。
本方法操作简便快捷，重复性好，结果准确可靠。
[关键词] HPLC法苦荞茶芦丁槲皮素含量测定苦荞是我国独有的药食两用粮食作物，主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区[1]，近年来苦荞茶作为人们最热衷的保健饮品之一，在降低血压胆固醇，防治心脑血管疾病及高脂血症方面疗效显著[2]。
苦荞茶中富含黄酮类物质，其主要成分为芦丁、槲皮素等[3,4]，能够降低毛细血管脆性，改善微循环功能，具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用[5]，在临床上主要用于糖尿病、高血压的辅助治疗[6,7]。
本实验通过优化提取工艺，进行了方法学考察，建立了苦荞茶的HPLC 含量测定方法，并对不同苦荞茶中两种黄酮类组分进行了比较，为更好地控制苦荞茶的质量提供了一种简便、可行、重复性好的质量控制方法。
1、仪器与试药LC210AT型高效液相色谱仪（岛津公司），二极管阵列检测器，CLASS2vp510色谱数据处理工作站，CDT26A色谱柱温箱；SZ293型自动双重纯水蒸馏器。
芦丁、槲皮素对照品，由中国药品生物制品检定所提供。
4种苦荞茶样品购于绵阳专卖店，（生产企业及批号见表2），甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂为分析纯，水为高纯水。
2、方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：SHIMDZU VP反相色谱柱；流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4）；检测波长：360 nm；流速：0.95 mL·min-1；柱温：35℃。
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量
李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000）
摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。
方法采用Zorbox SBC18
色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。
结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。
芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。
结论本法结果
准确，重复性良较好，方法简便可行。
关键词：芦丁；槲皮素；HPLC
Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC
LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China）
ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid.
KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC
芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。
它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。
主要用于防治高血压病的辅
助治疗。
同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。
现行卫生部药品标准采用紫外分
光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲
皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。
1仪器和试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪：Agilent 1100系列二级管阵列检测器，HP ChemStation化学工作站，Agilent 1100系列自动进样器，Agilent 1100系列柱温箱，Agilent 1100系列双元泵。
1.2 试药
甲醇（Tedia Company，A）为色谱纯，乙醇、乙酸均为分析纯.；芦丁（批号：040609、040908、041107），河南省平舆天聚化工厂，芦丁对照品和槲皮素对照品（均为中国药品生物制品检定所，含量均为100.0%）
2 方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Agilent Zorbox SB C18 4.6 mm×150mm，5μ。
流动相：水-甲醇- 乙酸（45 :50 :5），柱温35℃，流速1.0ml·min-1，检测波长256nm，进样量20μl照“2.1.1”和“2.2.2”项下方法制备对照品、供试品溶液，各进样20μl记录色谱图（图1），保留时间分别为芦丁2.56 min，槲皮素5.831min，其分离度为14.8。
理论板数均不低于2000（芦丁8700，槲皮素4800）
2.2样品溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的配制取经120℃干燥至恒重的芦丁对照品200.0mg和槲皮素对照品8.0mg，置同一100ml量瓶中，用流动相超声溶解，并稀释成芦丁0.1mg·ml-1，槲皮素4μg·ml-1作为对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的配制精密称取样品适量（相当于芦丁200mg），置100ml容量瓶中，用流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀。
精密量取上述溶液5ml置100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别称取芦丁对照品200.0mg，槲皮素对照品8.0mg，加流动相超声溶解，分别制成含芦丁2mg·ml-1和槲皮素0.08mg·ml-1的溶液，以此两种溶液为母液分别配制成含芦丁0.06、0.08、0.10、0.12、0.14 mg·ml-1和含槲皮素2.4、3.2、4.0、4.8、5.6μg•ml-1对照品溶液。
分别进样20μl测定，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标绘制标
准曲线，得芦丁和槲皮素的标准曲线回方程分别为：
Y = 0.6161919 + 23695.1833X，r = 1.00000
Y = 0.2390663 + 25.1588835X，r=0.99998
线性范围分别为芦丁60~140μg·ml-1，槲皮素2.4~5.6μg·ml-1。
2.4 进样精密度试验：
取“2.2.1”项下的对照品溶液，按上述条件连续进样6次，芦丁峰面积的RSD为0.1%，槲皮素峰面积的RSD为0.8% 。
2.5 重复性试验
取芦丁（040609）按2.2.2项下平行制备供试品溶液5份，按样品测定法测定，结果平均含量为99.2%(n=5)，表明本法重复性好。
2.6 供试品溶液稳定性试验：
取本品按含量测定方法及色谱条件分别放置0、2、4、6、8、10、12h测定结果，平均含量为芦丁99.3%，RSD为0.6%，槲皮素0.32%，RSD为0.4%。
说明供试品溶液在12个小时以内是稳定的。
2.7 回收率试验：
分别精密称取芦丁和槲皮素对照品适量，用流动相超声溶解并稀释成标示量浓度的80%、100%、120%各三份。
按含量测定方法测定回收率。
测得芦丁的平均回收率分别为99.3%，RSD为0.3%；槲皮素平均回收率99.6%，RSD为0.6%，
2.8 样品含量测定：
分别取“2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液各进样20μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见表1。
表1芦丁和槲皮素含量测定结果(n=3)
Tab.1 Resultes of rutin and quermination determination(n=3)
Lot No. rutin/ % quercetin/ %
040609 99.3 0.32
040908 99.2 0.34
041107 99.5 0.37
3讨论
3.1检测波长的选择：分别将芦丁和槲皮素的对照品溶液进行紫外扫描，两个对照品溶液均在256nm处有最大吸收，并且在256nm处响应值较强，因此选择测定波长为256nm。
3.2本文通过实验研究，建立了芦丁中芦丁和槲皮素的HPLC测定法，本法与卫生部药品标准WS1—49（B）—89［S］法比较，本法操作简便、快速、准确、专属性强，重复性好，并且槲皮素的测定可以定量。
可用于该样品的常规质量分析。
REFRRENCES
[1]. 中华人民共和国卫生部药品标准(1989)化学药品及制剂第一册［S］1989:56-57.
[2]. Ch.P(2005)VolⅡ(中国药典2005年版.二部)[S] Appendix（附录）ⅤD.。
