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纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式综合化学实验:芦丁的提取分离和鉴定芦丁简介:芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。
目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。
尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinoe，一种由葡萄糖glucoe与鼠李糖rhamnoe组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174，178℃，无结晶水时188，190℃。
溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。
微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycoide，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。
目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：1、芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。
味苦性凉、具清热凉血、止血之功。
常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。
槐米常炒炭应用。
槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。
临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。
[目的要求]1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2．掌握槲皮素的制备原理及操作。
3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。
[实验原理]芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。
难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。
能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。
利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。
通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
[实验内容]一、芦丁的提取分离及精制方法⑴500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9滤液 药渣10分钟，维持pH8～9pH 至4 ～51：200的比例加水，方法⑵ 利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
HPLC测定槐花药材不同部位芦丁和槲皮素含量目的比较槐花不同部位（槐花、槐米及枝梗）中芦丁和槲皮素的含量。
方法采用高效液相色谱法进行测定，Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，0.45 ?m），水-甲醇为流动相梯度洗脱，流速1 mL/min，柱温35 ℃，检测波长256 nm，进样量20 ?L。
结果芦丁含量为槐米>槐花>枝梗；槲皮素含量整体较低，且槐花>槐米>枝梗。
结论槐花各部位芦丁含量较高，且含量差别不大。
槐花中的槲皮素含量明显高于槐米及其枝梗。
Abstract：Objective To compare rutin and quercetin content of different parts （flower，bud and pedicel）of Sophora Japonica L.. Methods HPLC method was used with Ultimate XB-C18 column （4.6 mm×250 mm，0.45 ?m），water and methanol as solvent system with gradient elution. The flow rate was 1 mL/min，column temperature was 35 ℃，detection wavelength was set at 256 nm，and injection volume was 20 ?L. Results The content of rutin was bud>flower>pedicel. The content of quercetin was low on the whole，and in sequence of flower>bud>pedicel. Conclusion In the different parts of Sophora Japonica L.，rutin content is high with little difference. Quercetin content of flower is significantly higher than in bud and pedicel.Key words：Sophora japonica；different parts；rutin；quercetin；comparison of content槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，前者称“槐花”，后者称“槐米”，具有凉血止血、清肝泻火的功效[1]。
纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。
在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。
在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。
实验步骤如下：1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。
2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。
3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C24.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。
5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。
6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。
7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。
8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。
需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。
在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。
同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。
芦丁和槲皮素的几种快速鉴定方法
芦丁和槲皮素是一种由植物合成的特殊的有机物质，常被用于药材和保健食品中。
由于它们拥有许多药用价值，所以鉴别它们的真伪及其成份非常重要。
因此，本文主要介绍了芦丁和槲皮素的几种快速鉴定方法。
首先，对芦丁和槲皮素进行外观检查是一种简单有效的鉴定方法。
通常情况下，芦丁是一种灰白色的细粉末，有较强的香味，溶于多种溶剂，而槲皮素是一种粉红色的细粉末，有较强的清香。
通过比较，可以很容易发现芦丁和槲皮素的不同外观特征。
其次，熔点检测是一种常用的快速鉴定方法。
根据芦丁和槲皮素的不同性质，它们在不同的温度下熔解。
通常情况下，芦丁的熔点为184℃，槲皮素的熔点为162℃，因此可以通过测量其熔点，来区分
它们。
再次，元素分析是一种常见的快速鉴定方法。
芦丁和槲皮素的主要成分分别是碳、氢、氧、氮和硫，通过元素分析仪来测量他们的含量，就可以完成对两者的快速鉴定。
最后，可以使用电脑辅助X射线衍射仪（XRD）来进行氧化鉴定。
XRD可以扫描样品，检测出它们的晶体结构及晶体尺寸，使分析更加准确，从而可以更准确地鉴定芦丁和槲皮素。
总结而言，外观检查、熔点检测、元素分析和X射线衍射仪（XRD）等几种快速鉴定方法可以被使用来鉴别芦丁和槲皮素，从而达到区分它们的目的。
但是，为了准确确定芦丁和槲皮素的成分，还需要采用
更多的检验手段，比如超高效液相色谱分析、红外光谱光谱分析等。
辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷的含量分析谷俐媛;陶俊宇;曾芸;韦英益;胡庭俊【摘要】The flavonoids of Polygonum hydropiper were separated and purified by means of macroporous adsorption resin, and its antioxidant activity was tested in previous research, which gained satisfied results. In order to obtain flavonoids of Polygonum hydropipe with stable quality, and provide evidence for quality control in industrial production, high performance liquid chromatography for determination of total flavonoids in Polygonum hydropiper was used with rutin, quercetin and quercitrin as reference substance. The results showed that the contents of rutin, quercetin and quercitrin from flavonoids ethyl acetate ( FEA) in Polygonum hydropipe were 281. 97, 160.98, 83. 31 mg/g respectively; The contents of rutin, quercetin and quercitrin of flavonoids n-butanol ( FNB) in polygonum hydropiper were 150. 33, 147. 51, 73. 82 mg/g respectively. The method demonstrated advantage of simply, accuraty and sensitivity, and successfully applied to the analysis of rutin, quercetin and quercitrin content in flavonoids from Polygonum hydropipe.%为保障辣蓼黄酮工业化生产中的质量控制,建立辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷含量测定高效液相色谱法.结果表明,运用高效液相色谱法测定辣蓼黄酮乙酸乙酯部分(FEA)中芦丁、槲皮苷与槲皮素的含量分别为281.97、160.98、83.31 mg/g,辣蓼黄酮正丁醇部分(FNB)中芦丁、槲皮苷与槲皮素的含量分别为150.33、147.51、73.82 mg/g.该方法简单、准确、灵敏、重复性好,可作为辣蓼黄酮中芦丁、槲皮素与槲皮苷含量分析的参考方法.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2017(051)010【总页数】7页(P39-45)【关键词】辣蓼;黄酮;高效液相色谱;含量分析【作者】谷俐媛;陶俊宇;曾芸;韦英益;胡庭俊【作者单位】广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西医科大学基础医学院,南宁530021;广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西大学动物科学技术学院,南宁530005;广西大学动物科学技术学院,南宁530005【正文语种】中文【中图分类】S853.7辣蓼，味辛、温，具有祛风利湿，散瘀止痛，解毒消肿，杀虫止痒之功效[1]。
芦丁的提取分离和鉴别槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。
味苦性凉，入肝、大肠经。
具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。
槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。
临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。
芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。
一、实验目的：1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法；2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。
二、仪器与试药（一）仪器SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品甲酸丙酮三、主要成分的结构与性质：*皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中，酸水解得上述两种苷元及糖。
糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
R=H 槲皮素R=–glu –rha 芦丁白桦脂醇 槐花二醇四、实验原理：1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。
并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。
2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。
五、实验内容OOROOH OHOH O H OH CH 2OHOH OH（一）芦丁的提取分离和纯化60-70℃用浓盐酸调pH3-4[注3]，滤液（弃去）1:200的溶解度加蒸滤液冷却、静置、析晶，过滤 芦丁精品（60-70℃干燥，称重）注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基的作用，使其不与Ca 2+络合，生成钙盐沉淀，使提取收率下降。
